Haustoria were then collected by ce

Haustoria were then collected by centrifugation
at 13 000 g, 5 min and washed three times with standard
PBS.Afluorescent-labeled anti-mouse conjugate (donkey anti
mouse-whole antibody-FITC-labeled: Jackson Immuno Research,
West Grove, PA) was then incubated with the decorated
haustoria for 30 min at room temperature, and washed
as before. The screen was completed by observing the haustoria
under a fluorescence microscope and overlaying phase
contrast bright-field images with fluorescent images to identify
hybridomas producing anti-haustoria-specific antibody.
Such clones were retained and single-cell cloned twice by
limiting dilution. They were subsequently grown to confluence
in 150 mL DMEM with 7% v/v FCS (Sigma Aldrich, St.
Louis MO) in T-flasks, at 37°C, 10% v/v CO2. The supernatant
tissue culture solution from these was stored at 4°C in sterile
test-tubes until needed, for up to 3 months without loss of
antibody. All successful hybridomas were tested for serotype
using a lateral-flow assay (Roche Applied Science, Laval PQ).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Haustoria ถูกเก็บรวบรวม โดยการหมุนเหวี่ยงแล้วที่ 13 000 g, 5 นาทีและล้างสามเวลามาตรฐานPBS ชื่อ Afluorescent เมาส์ป้องกัน conjugate (ลากันเมาส์ทั้งแอนติบอดี FITC ชื่อ: Jackson Immuno วิจัยตะวันตกโกรฟ PA) ถูกแล้วได้รับการกกกับการตกแต่งhaustoria 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ความสะอาดเป็นมาก่อน หน้าจอเสร็จสิ้น โดยสังเกต haustoriaภายใต้การเรืองแสงกล้องจุลทรรศน์และซ้อนระยะความคมชัดภาพสดใสฟิลด์ภาพฟลูออเรสเซนต์เพื่อระบุhybridomas ผลิตแอนติบอดีต่อต้าน haustoria เฉพาะโคลนดังกล่าวถูกเก็บไว้ และเซลล์เดียวลอกแบบสองเท่าด้วยจำกัดเจือจาง พวกเขามาที่ปลูกไปบรรจบใน 150 mL DMEM กับ 7% v/v FCS (Sigma Aldrich เซนต์Louis ที่ MO) ใน T-ขวด 37 ° c, 10% v/v CO2 ใน supernatantแก้ปัญหาเนื้อเยื่อจากเหล่านี้ถูกเก็บไว้ที่ 4° C ในที่ปลอดเชื้อหลอดทดลองจนกระทั่งจำเป็น ถึง 3 เดือนโดยไม่สูญเสียแอนติบอดี ทดสอบสำหรับ serotype hybridomas ประสบความสำเร็จทั้งหมดใช้ทดสอบการไหลด้านข้าง (วิทยาศาสตร์ประยุกต์โรช Laval PQ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Haustoria ถูกเก็บรวบรวมแล้วโดยการหมุนเหวี่ยง
ที่ 13 000 กรัม 5 นาทีและล้างสามครั้งด้วยมาตรฐาน
PBS.Afluorescent ป้ายผันป้องกันเมาส์ (ลาต่อต้าน
เมาส์ทั้งแอนติบอดี FITC ป้าย: แจ็คสัน Immuno วิจัย
เวสโกรฟ, PA) เป็น แล้วบ่มกับตกแต่ง
haustoria เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องและล้าง
เป็นมาก่อน หน้าจอเป็นที่เรียบร้อยแล้วโดยการสังเกต haustoria
ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงและซ้อนทับเฟส
ความคมชัดภาพที่สว่างสดใสสนามด้วยภาพเรืองแสงเพื่อแจ้ง
ไฮบริการผลิตแอนติบอดีต่อต้าน haustoria เฉพาะ.
โคลนดังกล่าวถูกเก็บไว้และเซลล์เดียวโคลนครั้งที่สองโดย
การ จำกัด การลดสัดส่วน พวกเขาได้เติบโตขึ้นต่อมาไปบรรจบ
ใน 150 มล DMEM ด้วย v 7% / V FCS (ซิกม่าดิช, เซนต์
หลุยส์ MO) ใน T-ขวดที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส 10% v / V CO2 ใส
วิธีการแก้ปัญหาจากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเหล่านี้ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสในการฆ่าเชื้อ
ทดสอบหลอดจนต้องนานถึง 3 เดือนโดยไม่สูญเสีย
แอนติบอดี ทั้งหมดไฮบริประสบความสำเร็จได้รับการตรวจ serotype
ใช้ทดสอบด้านข้างไหล (Roche วิทยาศาสตร์ประยุกต์ Laval PQ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

haustoria แล้วเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง13 , 000 G , 5 นาทีและล้างสามครั้งด้วยมาตรฐานpbs.afluorescent-labeled ป้องกันเมาส์ ) ( ลา ป้องกันป้าย : วิจัยแอนติบอดีเมาส์ทั้ง fitc มมูโนแจ็คสัน ,West Grove , PA ) แล้วบ่มกับตกแต่งhaustoria 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และล้างเช่นเดิม หน้าจอเสร็จสมบูรณ์โดยสังเกต haustoriaภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง และซ้อนทับ เฟสภาพคมชัดสดใสด้วยหลอดภาพเพื่อระบุเขตต่อต้าน ทำให้การผลิต haustoria แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงการโคลนและโคลนนั้นเป็นเซลล์เดี่ยวสองครั้งโดยการเจือจาง ปลูกในภายหลัง เพื่อการประชุมใน 150 ml dmem 7 % v / v FCS ( ซิกม่า Aldrich เซนต์หลุยส์โม ) ใน t-flasks ที่ 37 ° C 10% v / v CO2 และน่านการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อจากโซลูชั่นเหล่านี้ถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C ในการเป็นหมันหลอดทดลองจนต้องได้ถึง 3 เดือน โดยไม่มีการสูญเสียแอนติบอดี ทดสอบโดย ทำให้ประสบความสำเร็จทุกคนโดยใช้การวิเคราะห์การไหลด้านข้าง ( วิทยาศาสตร์ ลาวาล PQ ประยุกต์ โรช )