Twenty clinical S. dysgalactiae iso

Twenty clinical S. dysgalactiae isolates were used in the current
study. All S. dysgalactiae isolates were isolated from lesions in
the caudal peduncle or the kidney of moribund fishes.
Geographic origin and fish species from which S. dysgalactiae
isolates were retrieved are shown in Table 1. The reference
strain S. dysgalactiae subsp. dysgalactiae ATCC43078 was included
for comparative purpose.
Growth conditions and DNA extraction
All S. dysgalactiae isolates were aerobically grown on Todd
Hewitt agar (THA; Difco, Sparks, MD, USA) plates and incubated
at 37 C for 24 h. Stock cultures were maintained frozen
at 80 C in Todd-Hewitt broth (Difco, Sparks, MD, USA).
Lancefield serotyping C [24] was confirmed by using PASTOREX
Strep (Bio-Rad, Marnes-la-Coquette, France). The identification
of the S. dysgalactiae isolates was performed by using
API 20 STREPT (bioMerieux, Marcy-l’Etoile, France).
Genomic DNA was performed from bacterial colonies by
using a DNAzol reagent (Invitrogen, Carlsbad, USA)
according to the manufacturer’s protocol.
PCR identification and partial sequences of tuf gene
Internal fragment of the tuf gene was amplified using primers
set designed from ATCC43078 (AF276263);
tuf1: 50-GTAGTTGCTTCAACAGACGG-30 and tuf2: 50-
GGCGATTGGGTGGATCAACTC-30 that yield 795-bp.
Generally, the PCR mixture was subjected on a thermal cycler
to the following program; a denaturation at 95 C for
4 min followed by 35 cycles of denaturation at 95 C for
30 s, annealing at 51 C for 30 s, extension at 72 C for
90 s, and a final extension at 72 C for 10 min. The amplified
fragment of tuf gene of thirteen S. dysgalactiae isolates was
then sequenced according to the method reported by
Abdelsalam et al. [8]. Briefly, the amplified products of thirteen
isolates were directly ligated into the plasmid pGEM-T
Easy vector (Promega, Madison, WI, USA), and the recombinant
plasmid was introduced into Escherichia coli DH5a
according to the manufacture’s protocol. Plasmid DNA was
purified by using the QIAprep Spin Miniprep kit (Qiagen,
Germantown, MD, USA). Sequencing reactions were performed
by using the GenomeLab DTCS Quick Start Kit
(Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA) with the oligonucleotide
primers SP6 (5-ATTTAGGTGACACTATAGAA-3)
and T7 (5-TAATACGACTCACTATAGGG-3). The PCR
products were loaded into the CEQ 8000 Genetic Analysis
System (Beckman Coulter), and the nucleotide sequence
was determined. The nucleotide sequences were analyzed by
using BioEdit version 7.0 [25]. The phylogenetic analysis
was then carried out by the neighbor

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

20 คลินิก S. dysgalactiae แยกใช้ในปัจจุบันศึกษา ทั้งหมด S. dysgalactiae แยกถูกแยกต่างหากจากได้ในcaudal peduncle หรือไตของปลา moribundสายพันธุ์ต้นกำเนิดและปลาจาก S. dysgalactiae ที่ทางภูมิศาสตร์แยกถูกดึงมาแสดงในตารางที่ 1 การอ้างอิงต้องใช้ S. dysgalactiae ถั่ว dysgalactiae ATCC43078 ถูกรวมสำหรับวัตถุประสงค์เปรียบเทียบสภาพการเจริญเติบโตและการสกัดดีเอ็นเอAerobically ได้ปลูกทั้งหมด S. dysgalactiae แยกในทอดด์Agar ฮิววิท (ท่า แผ่น Difco สปาร์ค MD สหรัฐอเมริกา) และ incubatedที่ 37 C สำหรับวัฒนธรรม 24 h. หุ้นถูกเก็บ แช่แข็งที่ C 80 ในซุปฮิววิททอดด์ (Difco สปาร์ค MD สหรัฐอเมริกา)Lancefield serotyping C [24] ได้รับการยืนยันโดย PASTOREXอาการ (Bio Rad, Marnes-ลา-Coquette ฝรั่งเศส) รหัสของ S. dysgalactiae แยกทำโดยAPI 20 STREPT (bioMerieux, Marcy l'Etoile ฝรั่งเศส)ทำ genomic DNA จากแบคทีเรียอาณานิคมโดยใช้รีเอเจนต์ DNAzol (Invitrogen คาร์ลส สหรัฐอเมริกา)ตามโพรโทคอลของผู้ผลิตรหัส PCR และลำดับบางส่วนของยีน tufส่วนภายในของยีน tuf ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ชุดที่ออกแบบมาจาก ATCC43078 (AF276263);tuf1: 50-GTAGTTGCTTCAACAGACGG-30 และ tuf2: 50 -GGCGATTGGGTGGATCAACTC-30 ที่ก่อ 795-bpทั่วไป ส่วนผสม PCR ถูกยัดเยียดใน cycler ร้อนโปรแกรมต่อไปนี้ denaturation ที่ 95 C สำหรับ4 นาทีตามรอบ 35 ของ denaturation ที่ C 95 ใน30 s การอบเหนียวที่ C 51 สำหรับ 30 s, 72 C สำหรับ90 s และส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72 C สำหรับ 10 นาที ที่เอาต์ส่วน tuf ยีนของสิบสามลักษณะ S. dysgalactiae แยกเป็นแล้ว เรียงลำดับตามวิธีการรายงานAbdelsalam et al. [8] สั้น ๆ ผลิตภัณฑ์เอาต์ของ thirteenแยกได้โดยตรงควบเป็น plasmid pGEM-Tเวกเตอร์กลาย (Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา), และวททชplasmid ถูกนำเข้าสู่ Escherichia coli DH5aตามโพรโทคอลการผลิต Plasmid DNA ได้บริสุทธิ์ โดยใช้ QIAprep หมุน Miniprep ชุด (QiagenGermantown, MD สหรัฐอเมริกา) ลำดับปฏิกิริยาดำเนินโดย GenomeLab DTCS ด่วนเริ่มต้นชุด(Beckman Coulter ฟู CA, USA) กับ oligonucleotideไพรเมอร์ SP6 (5-ATTTAGGTGACACTATAGAA-3)และ T7 (5-TAATACGACTCACTATAGGG-3) PCRผลิตภัณฑ์ถูกโหลดลงในวิเคราะห์พันธุกรรม 8000 CEQระบบ (Beckman Coulter), และลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ถูกกำหนด ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ถูกวิเคราะห์โดยใช้ BioEdit เวอร์ชัน 7.0 [25] วิเคราะห์ phylogeneticถูกแล้วดำเนินการ โดยเพื่อนบ้าน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยี่สิบคลินิกเอสไอโซเลท dysgalactiae ถูกนำมาใช้ในปัจจุบัน
การศึกษา ทั้งหมดเอไอโซเลท dysgalactiae ถูกแยกออกจากแผลใน
คอดหางหรือไตของปลาตาย.
กำเนิดทางภูมิศาสตร์และพันธุ์ปลาจากที่เอส dysgalactiae
เชื้อถูกดึงมาจะแสดงในตารางที่ 1 การอ้างอิง
สายพันธุ์เอ subsp dysgalactiae dysgalactiae ATCC43078 ถูกรวม
เพื่อการเปรียบเทียบ.
สภาพการเจริญเติบโตและการสกัดดีเอ็นเอ
ทั้งหมดเอไอโซเลท dysgalactiae มีปลูก aerobically บนโทดด์
เฮวิตต์วุ้น (THA; Difco, ประกายไฟ, MD, USA) แผ่นและบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง? วัฒนธรรมหุ้นถูกเก็บรักษาแช่แข็ง
ที่? 80? C ในน้ำซุปทอดด์-เฮวิตต์ (Difco, ประกายไฟ, MD, USA).
Lancefield serotyping C [24] ได้รับการยืนยันโดยใช้ PASTOREX
Strep (Bio-Rad, Marnes-la-Coquette, ฝรั่งเศส) . บัตรประจำตัว
ของเชื้อ S. dysgalactiae ได้รับการดำเนินการโดยใช้
API 20 STREPT? (bioMerieux, Marcy-l'Etoile, ฝรั่งเศส).
ดีเอ็นเอจีโนมได้รับการดำเนินการจากแบคทีเรียโดย
ใช้ DNAzol? รีเอเจนต์ (Invitrogen, คาร์ลส, ประเทศสหรัฐอเมริกา)
. ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต
บัตรประจำตัว PCR และลำดับบางส่วนของ TUF ยีน
ส่วนภายในของยีน TUF ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์
ชุดที่ออกแบบมาจาก ATCC43078 (AF276263);
tuf1: 50-GTAGTTGCTTCAACAGACGG-30 และ tuf2: 50-
GGCGATTGGGTGGATCAACTC-30 ให้ผลผลิต 795-bp.
โดยทั่วไปส่วนผสม PCR ยู่บน Cycler ความร้อน
ไปยังโปรแกรมดังต่อไปนี้ denaturation ที่ 95? C เป็นเวลา
4 นาทีตามด้วย 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 95? C เป็นเวลา
30 วินาที, การอบที่ 51 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, นามสกุลที่ 72? C เป็นเวลา
90 วินาที, และนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสสำหรับ 10 นาที ขยาย
ส่วนของยีน TUF สิบสามเอไอโซเลท dysgalactiae ถูก
ติดใจแล้วตามวิธีการรายงานโดย
Abdelsalam และคณะ [8] สั้น ๆ , ผลิตภัณฑ์ขยายสิบสาม
สายพันธุ์ที่ถูก ligated โดยตรงในพลาสมิด pGEM-T
ง่ายเวกเตอร์ (Promega, Madison, WI, USA) และ recombinant
พลาสมิดถูกนำเข้าสู่ Escherichia coli DH5a
ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ดีเอ็นเอถูก
ทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ QIAprep ปั่น miniprep ชุด (Qiagen,
ทาวน์, MD, USA) ปฏิกิริยาลำดับได้ดำเนินการ
โดยใช้ Genomelab DTCS เริ่มต้นอย่างรวดเร็ว Kit
(Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA) กับ oligonucleotide
ไพร SP6 (5-ATTTAGGTGACACTATAGAA-3)
และ T7 (5-TAATACGACTCACTATAGGG-3) PCR
ผลิตภัณฑ์ถูกโหลดลงใน CEQ 8000 ทางพันธุกรรมการวิเคราะห์
ระบบ (Beckman Coulter) และลำดับนิวคลีโอ
ที่ถูกกำหนด ลำดับเบสที่ได้มาวิเคราะห์โดย
ใช้รุ่น 7.0 BioEdit [25] การวิเคราะห์สายวิวัฒนาการ
จากนั้นก็ดำเนินการโดยเพื่อนบ้าน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

20 . dysgalactiae ไอโซคลินิก ถูกใช้ในการศึกษาปัจจุบัน

ทั้งหมด dysgalactiae ไอโซเลทที่แยกได้จากรอยโรคใน
ก้านหาง หรือ ไตของปลาร่อแร่ .
ที่มาทางภูมิศาสตร์และสายพันธุ์ปลาจากที่เอส dysgalactiae
ไอโซเลทได้แสดงในตารางที่ 1 อ้างอิง
สายพันธุ์ S dysgalactiae subsp . dysgalactiae atcc43078 อยู่

เพื่อเปรียบเทียบการเจริญเติบโตและภาวะ
การสกัดดีเอ็นเอทั้งหมด dysgalactiae ไอโซเลท aerobically ปลูกในทอดด์
Hewitt ( ท่า ; difco , ประกายไฟ , MD , USA ) แผ่นและบ่มที่ 37 
C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หุ้นวัฒนธรรมยังคงแช่แข็ง
ที่  80  C ใน ทอดด์ ฮิววิตต์ ซุป ( difco , ประกายไฟ , MD , สหรัฐอเมริกา .
แลนส์ฟิลด์การสำรวจ C [ 24 ] ได้รับการยืนยันโดยการใช้ pastorex
Strep ( ไบโอ ราด marnes ลา , โคลีนคลอไรด์ , ฝรั่งเศส ) รหัส
ของสหรัฐอเมริกา dysgalactiae ไอโซเลททำการโดยใช้
API 20 strept  ( biomerieux marcy-l'etoile , ฝรั่งเศส ) .
genomic DNA ที่ได้จากแบคทีเรียโคโลนีโดย
ใช้ dnazol  Reagent ( Invitrogen Carlsbad , USA )
ตามขั้นตอนของผู้ผลิต การลำดับบางส่วนของวิธี PCR และ

ส่วนภายในไฮยีน ของยีนที่ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์
ชุดออกแบบจาก atcc43078 ( af276263 ) ;
tuf1 : และ 50-gtagttgcttcaacagacgg-30 tuf2 : 50 -
ggcgattgggtggatcaactc-30 ผลผลิตที่ 795 BP .
โดยทั่วไป โดยส่วนผสมถูกยัดเยียดบน
วงจรความร้อนเพื่อโปรแกรมต่อไปนี้ ; ( 95  C
4 นาทีตามด้วย 35 รอบ ( 95  C
30 วินาที annealing ที่ 51  C 30 S , ส่วนขยายที่ 72  C
90 วินาทีและสุดท้ายส่วนขยายที่ 72  C 10 นาทีทำการ
เบสของยีนของเชื้อ S . dysgalactiae สิบสามประเทศสหรัฐอเมริกาคือ
จากนั้นทำการตามวิธีการที่รายงานโดย
abdelsalam et al . [ 8 ] สั้น ๆ , ขยายผลิตภัณฑ์ของสิบสาม
ไอโซเลทโดยตรงผูกลงในพลาสมิด pgem-t
ง่ายเวกเตอร์ ( promega เมดิสัน , WI , USA ) และรีคอมบิแนนท์
พลาสมิดที่ถูกใส่เข้าไปในแบคทีเรีย Escherichia coli dh5a
ตามขั้นตอนของการผลิต พลาสมิดดีเอ็นเอ
บริสุทธิ์โดยใช้ qiaprep ปั่น miniprep Kit ( QIAGEN
Germantown , MD , USA ) ปฏิกิริยาการจัดลำดับการ
โดยใช้ genomelab DTCs Quick Start Kit
( Beckman Coulter ฟูลเลอร์ตัน แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ด้วยไพรเมอร์ ซึ่ง sp6 ( 5-atttaggtgacactatagaa-3 )

6 กับ 7 ( 5-taatacgactcactataggg-3 ) ผลิตภัณฑ์ PCR
ถูกโหลดเข้าสู่ CEQ 8000 การวิเคราะห์
พันธุกรรมระบบ ( เบคแมน คูลเตอร์ ) และลำดับนิวคลีโอไทด์
ถูกกำหนดไว้ ลำดับยีนที่วิเคราะห์โดย
ใช้ bioedit รุ่น 7.0 [ 25 ]
วิเคราะห์ ซึ่งได้ดำเนินการโดยเพื่อนบ้าน