DNA was extracted from soils as pre

DNA was extracted from soils as previously described (Steffan et al., 1988) with some modification. Soil samples (0.5 g) in a 2 ml extraction tube containing sterile sodium phosphate buffer (0.5 ml, 100 mM, pH 7.5) and autoclaved glass beads (0.5 g, 106 microns, Sigma/Aldrich) were bead beaten for 30 s at 4 m s 1 twice using a mini-BeatBeater (Biospec Product-USA) with the samples placed on ice in between bead beating sessions. Liquefied phenolchloroform-isoamyl alcohol (25:24:1), saturated with 10 mM Tris pH 8.0, 1 mM EDTA (0.5 ml, Sigma) was then added to the DNA solution. The mixture was centrifuged at 12,000 g for 10 min at 4 C and the aqueous phase was removed to a new tube where an equal volume of phenol-chloroform-isoamyl alcohol was added. The tubes were then centrifuged at 12,000 g for 10 min at 4 C. The phenol-chloroform-isoamyl alcohol wash was repeated three times. The crude DNA extract was then cleaned with a GENECLEAN TURBO Clean up kit (MP Biomedicals LLC) as per the manufacturer’s instructions. Every soil sample was extracted in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอถูกสกัดจากดินที่เป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Steffan et al. 1988) กับ modification บาง ตัวอย่างดิน (0.5 กรัม) ในการสกัด 2 มล.หลอดที่มีเป็นหมันโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.5, 0.5 ml, 100 มม.) และผลิตแก้วลูกปัด (0.5 กรัม 106 ไมครอน Sigma/Aldrich) ถูกลูกปัดที่ตี 30 s ที่ s 4 เมตรสองครั้งโดยใช้แบบมินิ-BeatBeater (Biospec ผลิตภัณฑ์ USA) กลุ่มตัวอย่าง 1 วางบนน้ำแข็งระหว่างลูกปัดตีเซสชัน Liquefied phenolchloroform-isoamyl แอลกอฮอล์ (25:24:1), มี 10 มม.ทริสเรทติ้ง pH 8.0, EDTA 1 มม. (0.5 มิลลิลิตร Sigma) แก้ไขแล้วเพิ่มเพื่อการแก้ไขปัญหาดีเอ็นเอ แก้ไขจากที่ 12,000 g 10 นาทีส่วนผสมที่ 4 C และเฟสอถูกเอาออกไปท่อใหม่ที่ถูกเพิ่มปริมาณแอลกอฮอล์ฟีนอลคลอโรฟอร์ม-isoamyl ที่เท่ากับ หลอดได้แล้วจากที่ 12,000 g 10 นาทีที่ 4 c ล้างแอลกอฮอล์ฟีนอลคลอโรฟอร์ม-isoamyl ซ้ำสามครั้ง สารสกัดดีเอ็นเอดิบสะอาดแล้ว ด้วย GENECLEAN เทอร์โบสะอาดชุด (MP Biomedicals LLC) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ทุกตัวอย่างดินถูกสกัดในลข้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอจากดินตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Steffan et al . , 1988 ) กับโมไดจึงไอออนบวก ตัวอย่างดิน ( 0.5 กรัม ) ในการสกัด 2 ml หลอดบรรจุปลอดเชื้อโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 0.5 ml , 100 มม. , pH 7.5 ) และสังเคราะห์ ( 0.5 กรัม ลูกปัดแก้ว , 106 ไมครอน , Sigma / ดิช ) ลูกปัดตี 30 S ที่ 4 M S 1 ครั้งใช้มินิ beatbeater ( USA biospec ผลิตภัณฑ์ ) ตัวอย่างที่วางอยู่บนน้ำแข็งระหว่างลูกปัดเต้นครั้ง lique จึงเอ็ด phenolchloroform แอลกอฮอล์ในปริมาณ ( 25:24:1 ) , อิ่มตัวกับ 10 มม. ซึ่ง pH 8.0 , 1 mM EDTA ( Sigma 0.5 ml ) แล้วเพิ่มสารละลาย DNA ส่วนผสมคือระดับที่ 12 , 000 กรัมต่อ 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส และระยะที่น้ำถูกลบออกไป เป็นหลอดใหม่ที่ปริมาณเท่ากันของฟีนอลในปริมาณแอลกอฮอล์คลอโรฟอร์มเข้ามาเสริม หลอดเป็นระดับที่ 12 , 000 กรัมต่อ 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ฟีนอล ( แอลกอฮอล์ในปริมาณล้างทำซ้ำ 3 ครั้ง ดีเอ็นเอที่สกัดได้ แล้วล้างด้วย geneclean เทอร์โบล้าง Kit ( MP biomedicals LLC ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ทุกสารตัวอย่างดินทั้งสามใบ