To verify the putative SNPs, 96 SNP

To verify the putative SNPs, 96 SNP sites derived from only 8-read sequences were randomly chosen between B. oleracea lines 01-88 and 02-12. Primers (Sangon, China) were designed to amplify about 500 bp fragments in which containing the corresponding SNPs. The PCR reaction contained 25 ng DNA, 0.2 mM dNTP, 0.5U Taq (MBI, USA) with 1xbuffer, and 5pM of each primer. PCR parameters were as follows: a pre-denaturation of 94°C for 2 min, 35 cycles of amplification (94°C for 30S, 60°C for 1 min and 72°C for 1 min) and a final extension reaction was performed
at 72°C for 5 min. PCR products were detected on 1.0% agarose gel by electrophoresis and ligated into PMD18T-vector (Takara, Japan) for SNP identification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจสอบการ putative SNPs ไซต์ SNP 96 มาเพียง 8 อ่านลำดับถูกสุ่มเลือกระหว่างบรรทัดเกิดตื่นสาย 01 88 และ 02-12 ไพรเมอร์ (Sangon จีน) ถูกออกแบบมาเพื่อขยายบางส่วนของ bp ประมาณ 500 ใน SNPs ที่สอดคล้องกันซึ่งประกอบด้วย ปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย 25 ng DNA, dNTP 0.2 mM, 0.5U Taq (MBI สหรัฐอเมริกา) กับ 1xbuffer และ 17.00 น.ของแต่ละพื้น พารามิเตอร์ PCR มีดังนี้: ทำการ denaturation ก่อน 94 ° C สำหรับ 2 นาที 35 วงจรการขยาย (94 ° C สำหรับ 30S, 60 ° C ใน 1 นาที และ 72 องศาเซลเซียสใน 1 นาที) และปฏิกิริยาต่อขั้นสุดท้ายที่ 72° C สำหรับ 5 นาที PCR ผลิตภัณฑ์ถูกตรวจพบบนเจล 1.0% agarose โดย electrophoresis และควบเป็น PMD18T-เวกเตอร์ (Takara ญี่ปุ่น) สำหรับรหัส SNP

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เมื่อต้องการตรวจสอบ SNPs สมมุติ 96 เว็บไซต์ SNP มาจากลำดับเพียง 8 อ่านถูกสุ่มเลือกระหว่างบรรทัด B. oleracea 01-88 และ 02-12 ไพรเมอร์ (Sangon, จีน) ถูกออกแบบมาเพื่อขยายประมาณ 500 bp ชิ้นส่วนที่มี SNPs ที่เกี่ยวข้อง ปฏิกิริยา PCR มี 25 ดีเอ็นเอศึกษา, 0.2 มิลลิ dNTP, 0.5U Taq (MBI สหรัฐอเมริกา) กับ 1xbuffer และ 05:00 ของแต่ละประถมศึกษา พารามิเตอร์ PCR มีดังนี้ก่อนการสูญเสียสภาพธรรมชาติจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที, 35 รอบของการขยาย (94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30S, 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที) และปฏิกิริยาของนามสกุลสุดท้ายที่ถูกดำเนินการ
ที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการตรวจพบบน 1.0% agarose เจลโดย electrophoresis และ ligated เป็น PMD18T เวกเตอร์ (Takara, ญี่ปุ่น) เพื่อระบุตัวตน SNP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตรวจสอบ snps การแสดงออก , 96 SNP เว็บไซต์ได้มาจากเพียง 8-read ลำดับสุ่มเลือกระหว่าง พ. ต่อสาย 01-88 และ 02-12 . ไพรเมอร์ ( แสงอ่อน , จีน ) ถูกออกแบบมาเพื่อขยายประมาณ 500 BP เศษซึ่งประกอบด้วย snps ที่สอดคล้องกัน การตรวจปฏิกิริยาที่มีอยู่ 25 ของดีเอ็นเอ dntp 0.2 มิลลิเมตร 0.5u แทค ( 2 , USA ) กับ 1xbuffer และ pm ของแต่ละรองพื้น พารามิเตอร์ที่ตรวจมีดังนี้ก่อน ( 94 ° C เป็นเวลา 2 นาที 35 รอบขยาย ( 94 ° C เป็นเวลา 30 , 60 ° C เป็นเวลา 1 นาที 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที ) และปฏิกิริยาการสุดท้ายคือ 72 ° C )
5 นาที โดยผลิตภัณฑ์ที่ตรวจพบใน 1.0 % เจลโดยวิธีผูกเป็นเวกเตอร์ที่ pmd18t ( ทาคาระ ญี่ปุ่น ) เพื่อกำหนด HR .