Tianjin Haiguang Chemical Co., Ltd (Tianjin, China). Prior to use, the
resin was immersed with ethanol more than 12 h to remove the inert
solvent, repeatedly washed with distilled water to no odour of ethanol,
and then kept it in a beaker for later use. Ethanol and inorganic salts
used were of analytical grade.
Preparation of fruit residue
V. uliginosum fruits (0.5 kg) were put into a JJ-2 Tissue Grinders
(Shenzhen, China) and homogenized for 2 min at speed of 1200 rpm.
After filtration, the solid residue was stored at -20°C.
Aqueous two-phase extraction
ATPSs were consisted of specific amount of ethanol, inorganic salt
and water in a total amount of 20 g. Various systems were prepared
in a range of ethanol (20%-40% (w/w)) and inorganic salt (10%-25%
(w/w)) concentrations. Inorganic salt was first dissolved into water in
25-mL teat glass tubes. Through preliminary experiments, we found
V. uliginosum residue hung between top phase and bottom phase. If
V. uliginosum residue was too much, the solid phase was too thick
to lower mass transfer. Therefore, in this study, the ratio of material
and solvent was 1:20. 1.0 g V. uliginosum residue was then added and
mixed by vortexing for 30 s, followed by addition of ethanol, and the
whole mixture was then thoroughly mixed by vortexing for 30 s and
then allowed to stand at room temperature for 0.5-1.0 h to enable phase
separation. Alternatively, a specific amount of inorganic salt solution was
added to 1.0 g of V. uliginosum residue by vortexing for 30 s, followed by
addition of ethanol. The mixture was then treated as described above.
After the two phases had separated, the volumes of the top and bottom
phases were recorded, and anthocyanins were analyzed in the top and
bottom phases, respectively. The extraction experiments were carried
out in triplicate at room temperature. Furthermore, ATPE was scaled
up on 3.0 kg scale in a 5.0-L beaker under optimized conditions. During
experiments visual inspection of the residue subjected to ATPE showed
a crimson top phase and a light purple bottom phase. The grey residue
present in the extract was accumulated at the interface, which was
discarded. The partition coefficient (K) of anthocyanins was defined as
the ratio of the concentration of anthocyanins in the top phase to that in
the bottom phase. The recovery (R) of anthocyanins was the percent of
anthocyanins in the top phase to the total amount in ATPS.
The yield (Y) of anthocyanins was defined as the percent of the
mass of anthocyanins in the extract to that obtained from acidified
ethanol extraction.
Acidified ethanol extraction
Acidified ethanol extraction of anthocyanins was performed with
50% (w/w) ethanol at 50°C and pH 3.5 for 60 min [7].
Aqueous two-phase extraction of anthocyanins combined
with column chromatography
100 g pretreated AB-8 macroporous resin was soaked by deionized
water (pH=3.0-3.5) for 24 h to equilibrate, and then filtered.
After ATPE, the anthocyanin extract was diluted 5 times by water
(pH=3-3.5) until ethanol elimination under vacuum at low temperature
(37°C) on a rotary evaporator (Rotavapor RE-52A, Yarong, Shanghai,
China). The diluted extract was added into a glass column (Φ1.5×40
cm) packed by 50.0 g pretreated AB-8 macroporous resin at a volume
of 40 mL resin bed (BV). The anthocyanins adsorbed to the resins were
washed with 1-2 BV water (pH 3-3.5), 1-2 BV 20% (v/v) ethanol solution
(pH 3-3.5), 1-2 BV 30% (v/v) ethanol solution (pH 3-3.5), 1 BV 40%
เทียนจิน Haiguang เคมิคอล จำกัด (เทียนจิน, จีน) ก่อนที่จะใช้
เรซินถูกแช่กับเอทานอลมากกว่า 12 ชั่วโมงในการลบเฉื่อย
ตัวทำละลายล้างซ้ำด้วยน้ำกลั่นกลิ่นของเอทานอลไม่มี
แล้วเก็บมันไว้ในบีกเกอร์เพื่อใช้ในภายหลัง เอทานอลและเกลืออนินทรี
ที่ใช้เป็นของเกรดวิเคราะห์.
เตรียมผลไม้ที่เหลือ
โวลต์ ผลไม้ uliginosum (0.5 กก.) ได้รับการใส่ลงไปในเครื่องบดเนื้อเยื่อ JJ-2
(เซินเจิ้นประเทศจีน) และปั่นเป็นเวลา 2 นาทีที่ความเร็ว 1200 รอบต่อนาที.
หลังจากการกรองสารตกค้างที่เป็นของแข็งถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส.
น้ำสกัดสองเฟส
ATPSs ประกอบด้วยของจำนวนเงินที่เฉพาะเจาะจงของเอทานอล, เกลืออนินทรี
และน้ำในปริมาณรวม 20 กรัม ระบบต่าง ๆ ได้จัดทำ
ในช่วงของเอทานอล (20% -40% (w / w)) และเกลืออนินทรี (10% -25%
(w / w)) ความเข้มข้น เกลือนินทรีย์ที่กำลังละลายลงไปในน้ำเป็นครั้งแรกใน
จุกนม 25 มิลลิลิตรหลอดแก้ว ผ่านการทดลองเบื้องต้นเราพบ
โวลต์ สารตกค้าง uliginosum แขวนระหว่างขั้นตอนด้านบนและด้านล่างขั้นตอน ถ้า
โวลต์ สารตกค้าง uliginosum มากเกินไป, ของแข็งเป็นหนาเกินไป
เพื่อลดการถ่ายเทมวล ดังนั้นในการศึกษาครั้งนี้อัตราส่วนของวัสดุ
และตัวทำละลายเป็น 01:20 1.0 กรัมโวลต์ตกค้าง uliginosum ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วและ
ผสมโดย vortexing สำหรับ 30 วินาทีตามด้วยการเพิ่มของเอทานอลและ
ส่วนผสมทั้งหมดถูกแล้วผสมให้เข้ากันโดย vortexing 30 และ
ได้รับอนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็น 0.5-1.0 h เพื่อ ช่วยให้ขั้นตอนการ
แยก อีกวิธีหนึ่งคือจำนวนเฉพาะของสารละลายเกลืออนินทรีได้รับ
เพิ่มถึง 1.0 กรัมของสารตกค้างโวลต์โดย uliginosum vortexing สำหรับ 30 วินาทีตามด้วย
การเพิ่มของเอทานอล ส่วนผสมที่ได้รับการรักษาแล้วตามที่อธิบายไว้ข้างต้น.
หลังจากที่ทั้งสองขั้นตอนได้แยกออกจากกันไดรฟ์ของด้านบนและด้านล่าง
ขั้นตอนที่ถูกบันทึกไว้และ anthocyanins วิเคราะห์ในด้านบนและ
ด้านล่างขั้นตอนตามลำดับ การทดลองสกัดได้ดำเนิน
การในเพิ่มขึ้นสามเท่าที่อุณหภูมิห้อง นอกจากนี้ ATPE เป็นสัดส่วน
ขึ้นบนขนาด 3.0 กก. ในบีกเกอร์ 5.0 ลิตรภายใต้เงื่อนไขที่ดีที่สุด ในระหว่าง
การทดลองตรวจสอบภาพจากสารตกค้างภายใต้ ATPE แสดงให้เห็น
ขั้นตอนด้านบนสีแดงเข้มและขั้นตอนด้านล่างสีม่วงอ่อน สีเทาตกค้าง
อยู่ในสารสกัดที่ถูกสะสมในอินเตอร์เฟซซึ่งถูก
ทิ้ง สัมประสิทธิ์ (K) ของ anthocyanins ถูกกำหนดเป็น
อัตราส่วนของความเข้มข้นของ anthocyanins ในขั้นตอนด้านบนเพื่อว่าใน
ระยะที่ด้านล่าง การกู้คืน (R) ของ anthocyanins เป็นร้อยละของ
anthocyanins ในระยะบนลงจำนวนใน Atps.
ผลผลิต (Y) ของ anthocyanins ถูกกำหนดเป็นเปอร์เซ็นต์ของ
มวลของ anthocyanins ในสารสกัดที่ได้จากการหมัก
เอทานอลสกัด .
การสกัดเอทานอล Acidified
กรดสกัดเอทานอลของ anthocyanins ได้ดำเนินการกับ
50% (w / w) เอทานอลที่ 50 องศาเซลเซียสและมีค่า pH 3.5 สำหรับ 60 นาที [7].
น้ำสกัดสองเฟสของ anthocyanins รวม
กับคอลัมน์
100 กรัมปรับสภาพ AB- 8 macroporous เรซินแช่โดยปราศจากไอออน
น้ำ (pH = 3.0-3.5) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพื่อให้สมดุลและกรองแล้ว.
หลังจาก ATPE, สารสกัดจาก anthocyanin ถูกเจือจาง 5 ครั้งด้วยน้ำ
(pH = 3-3.5) จนกระทั่งการกำจัดเอทานอลภายใต้สูญญากาศที่ อุณหภูมิต่ำ
(37 ° C) ในเครื่องระเหยแบบหมุน (Rotavapor RE-52A, Yarong, เซี่ยงไฮ้,
จีน) สารสกัดเจือจางถูกเพิ่มเข้าไปในคอลัมน์แก้ว (Φ1.5× 40
ซม.) โดยบรรจุ 50.0 กรัมปรับสภาพ AB-8 macroporous เรซินที่ปริมาณ
40 มิลลิลิตรเตียงเรซิน (BV) anthocyanins ดูดซับกับเรซินที่ถูก
ล้างด้วยน้ำ 1-2 BV (pH 3-3.5) 1-2 BV 20% (v / v) การแก้ปัญหาเอทานอล
(pH 3-3.5) 1-2 BV 30% (v / V) การแก้ปัญหาเอทานอล (pH 3-3.5) BV 1 40%
การแปล กรุณารอสักครู่..

เทียนจิน haiguang Chemical Co . , Ltd ( เทียนจิน , จีน ) ก่อนที่จะใช้เรซินเพลิน
ด้วยเอทานอลมากกว่า 12 ชั่วโมง เพื่อเอาตัวทำละลายเฉื่อย
ซ้ำๆ ล้างด้วยน้ำกลั่นไม่มีกลิ่นแอลกอฮอล์
แล้วเก็บไว้ในบีกเกอร์เพื่อใช้ในภายหลัง เอทานอลและเกลืออนินทรีย์
ใช้วิเคราะห์ระดับการเตรียมผลไม้
V
กากผลไม้ uliginosum ( 05 กิโลกรัม ) ใส่ลงใน jj-2 เยื่อบด
( เซินเจิ้น ) และบดสำหรับ 2 นาทีที่ความเร็ว 1200 rpm .
หลังจากการกรองกากของแข็งที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ - 20 องศา C .
atpss การสกัดสารละลายผสม ประกอบด้วย จํานวนเฉพาะของเอทานอล
เกลือและน้ำในยอด 20 . ระบบต่างๆ เตรียม
ในช่วงของเอทานอล ( 20 % - 40 % ( w / w ) และเกลืออนินทรีย์ ( 10 - 25 %
( w / w ) เข้มข้น เกลือเป็นครั้งแรกที่ละลายในน้ำใน
25 มิลลิลิตรหัวนมแก้วหลอด ผ่านการทดลองเบื้องต้นพบ
V . uliginosum กากแขวนระหว่างเฟสเฟสด้านบนและด้านล่าง ถ้า
V . uliginosum ตกค้างมากเกินไป , เฟสของแข็งหนาเกินไป
เพื่อลดการถ่ายเทมวล ดังนั้นในการศึกษานี้ อัตราส่วนของวัสดุ
และตัวทำละลายคือ 1 . 1.0 g Vuliginosum ตกค้างและผสม โดยเพิ่มแล้ว
vortexing 30 วินาที ตามด้วย นอกจากนี้ เอทานอล และส่วนผสมทั้งหมดละเอียดผสมแล้ว
โดย vortexing 30 และได้รับอนุญาตแล้วให้ยืนที่อุณหภูมิห้องที่คาดว่า H เพื่อให้เฟส
อีกวิธีหนึ่งคือ จํานวนเฉพาะของสารละลายเกลืออนินทรีย์คือ
เพิ่ม 1.0 g V . uliginosum กากโดย vortexing เป็นเวลา 30 วินาที ตามด้วย
นอกเหนือจากเอทานอล ส่วนผสมก็ปฏิบัติ ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น .
หลังจากสองขั้นตอนมีแยกปริมาณของด้านบนและด้านล่าง
ขั้นตอนที่ถูกบันทึกไว้ และแอนโทไซยานิน วิเคราะห์ในด้านบนและด้านล่าง
เฟส ตามลำดับ การแยกการทดลอง
ออกทั้งสามใบที่อุณหภูมิห้อง นอกจากนี้ atpe ถูกลดขนาด
บน 3.0 กกขนาด 5 .0-l บีกเกอร์ภายใต้เงื่อนไขที่ดีที่สุด . ในการทดลองของ Visual ตรวจสอบ
กาก
เฟสภายใต้ atpe แสดงด้านบนสีแดงเข้มและเฟสด้านล่างสีม่วงอ่อน สีเทากาก
ในปัจจุบันสกัดถูกสะสมที่รอยต่อซึ่ง
ละทิ้ง พาร์ทิชันแบบ ( k ) ของแอนโทไซยานินได้ เช่น
อัตราส่วนของความเข้มข้นของแอนโทไซยานินในขั้นตอนด้านบนนั้น
ด้านล่างเฟส การกู้คืน ( R ) ของแอนโทไซยานิน เป็นเปอร์เซ็นต์ของ
แอนโทไซยานินในขั้นตอนด้านบน ปริมาณผลผลิตใน atps .
( Y ) ของแอนโทไซยานินถูกกำหนดเป็นเปอร์เซ็นต์ของ
มวลของแอนโทไซยานินใน สารสกัดที่ได้จากการสกัดด้วยเอทานอลปรับปรับ
.
การสกัดเอทานอลการสกัดแอนโธไซยานินมีการปรับเอทานอลกับ
50 % ( w / w ) เอทานอลที่ 50 ° C และ pH 3.5 สำหรับ 60 นาที [ 7 ] .
การสกัดสารละลายผสมของแอนโทไซยานินรวม
กับ
คอลัมน์โครมาโตกราฟฟี 100 กรัมที่ได้รับ ab-8 macroporous เรซินถูกแช่ด้วยน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสาน
( pH = 3.0 ) 24 H ทำให้สมดุลและจากนั้นกรอง
หลังจาก atpe , แอนโทไซยานิน สารสกัดเจือจางด้วยน้ำ 5 ครั้ง
( pH = 3-3 .5 ) จนเอทานอลตัดสุญญากาศที่อุณหภูมิต่ำ ( 37 /
c ) บนเครื่องโรตารี่ ( rotavapor re-52a yarong
, , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) เจือจางสกัดเพิ่มลงในคอลัมน์แก้ว ( Φ 1.5 × 40
ซม. ) บรรจุโดย 50.0 กรัมกรัม ab-8 macroporous เรซิ่นที่ปริมาณ 40 ml เรซิน
เตียง ( BV ) มีแอนโธไซยานินดูดซับเพื่อเม็ดถูก
ซัก 1-2 BV น้ำ ( pH 3-3.5 )1-2 BV 20 เปอร์เซ็นต์ ( v / v )
( pH สารละลายเอทานอล 3-3.5 ) , 1-2 BV 30 % ( v / v ) สารละลายเอทานอล ( pH 3-3.5 ) 1 BV 40%
การแปล กรุณารอสักครู่..
