2.2. Isolation of actinomycete strains
Ten grams of herbal vermicompost from each sample were
separately suspended in 90 ml of physiological saline (0.85% of
NaCl) in a flask and placed on an orbital shaker (at 100 rpm) at room
temperature (28 2 C) for 1 h. At the end of shaking, the vermicompost
samples were serially diluted up to 106 dilutions with
physiological saline. Dilutions 104106 were plated on starch casein
agar (SCA) by spread plate technique and incubated at 28 2 C for
four days. The most prominent colonies (the ones which were
found abundantly in the plate, produced pigments and inhibited
the adjacent colonies) were isolated and maintained on SCA slants
at 4 C for further studies.
2.3. In vitro antifungal activity
Actinomycete isolates were evaluated for their antifungal
activity against FOC (Race 1; causal agent of Fusarium wilt in
chickpea), Rhizoctonia bataticola (Taub) Butter (three strains viz.
RB-6, RB-24 and RB-115; causal agent of dry root rot in chickpea)
and Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid. (causal agent of charcoal
rot in sorghum) by dual-culture assay. FOC and all the three
strains of R. bataticola were acquired from the Legumes Pathology
Division, ICRISAT, Patancheru, India and M. phaseolinawas acquired
from the Directorate of Sorghum Research, Hyderabad, India.
A fungal disk (FOC/R. bataticola) of 6 mm dia. was placed on one
edge (1 cm from the corner) of the glucose casamino acid yeast
extract (GCY agar; Anjaiah et al., 1998) plate, and actinomycete
isolate was streaked on the other edge of the plate (1 cm from the
corner), followed by incubation at 28 2 C for four days or until
the pathogen covered the entire plate in the control plate. Inhibition
of fungal mycelium (halo zone) around the actinomycete
colony was noted as positive and the inhibition zone measured.
2.4. Enzymatic activities and secondary metabolite production by
the actinomycete isolates
2.4.1. Siderophore production
Siderophore production was determined according to the
methodology described by Schwyn and Neilands (1987). Actinomycetes
were streaked on chrome azurol S (CAS) agar media and
incubated at 28 2 C for four days. When the actinomycetes
consume iron, present in the blue-colored CAS media, orange halos
are produced around the colonies, which indicate the presence of
siderophores. Observations were recorded on a 04 rating scale as
follows: 0 ¼ no change; 1 ¼ positive; 2 ¼ halo zone of 1e3 mm;
3 ¼ halo zone of 4e6 mm and 4 ¼ halo zone of 7 mm and above.
2.4.2. Cellulase production
The standardized protocols of Hendricks et al. (1995) were used
to evaluate the cellulase production. Actinomycetes were streaked
on cellulose Congo red agar media and incubated at 28 2 C for
four days. The plates were observed for halo zone around the
actinomycete colonies, which indicate the presence of cellulase.
Observations were recorded on a 04 rating scale as follows: 0 ¼ no
change; 1 ¼ positive; 2 ¼ halo zone of 1e3 mm; 3 ¼ halo zone of
4e6 mm and 4 ¼ halo zone of 7 mm and above.
2.4.3. Protease production
It was done as per the protocols of Bhattacharya et al. (2009).
Actinomycetes were streaked on casein agar and incubated at
28 2 C for four days. At the end of the incubation, the plates were
observed for halo zone around the colonies, which indicates the
presence of protease. Observations were recorded on a 04 rating
scale as follows: 0 ¼ no change; 1 ¼ positive; 2 ¼ halo zone of
1e3 mm; 3 ¼ halo zone of 4e6 mm and 4 ¼ halo zone of 7 mm and
above.
2.4.4. Hydrocyanic acid (HCN) production
HCN was estimated qualitatively by the sulfocyanate colorimetric
method (Lorck, 1948). The actinomycetes were grown in
Bennett agar amended with glycine (4.4 g l1). One sheet of
Whatman filter paper no. 1 (8 cm dia.) was soaked in 1% picric acid
(in 10% sodium carbonate; filter paper and picric acid were sterilized
separately) for a minute and stuck underneath the Petri dish
lids. The plates were sealed with Parafilm and incubated at
28 2 C for four days. Development of reddish brown color on the
filter paper indicated positive for HCN production. Observations
were recorded (by a panel of three observers) on a 03 rating scale
2.2 การแยกสายพันธุ์ actinomycete10 กรัมของ vermicompost สมุนไพรจากแต่ละอย่างได้แยกชั่วคราวใน 90 ml ของ physiological น้ำเกลือ (0.85%NaCl) ในความหนาว และวางลงในเชคเกอร์ของวงโคจร (ที่ 100 rpm) ห้องอุณหภูมิ (28 2 C) สำหรับ 1 h ที่สุดของการสั่น การ vermicompostตัวอย่างที่ผสมถึง dilutions 106 กับ seriallyน้ำเกลือ physiological Dilutions 104 106 ถูกชุบในแป้งเคซีนagar (SCA) โดยแผ่แผ่นเทคนิค และ incubated ที่ 2 C 28 สำหรับวันที่สี่ อาณานิคมที่สุด (คนที่ถูกอุดมสมบูรณ์ในจาน ผลิตสี และห้ามแยกต่างหาก และอยู่ใน SCA slants อาณานิคมอยู่ติดกัน)ที่ C 4 สาขา2.3 การกิจกรรมเพาะในต้านเชื้อราแยก actinomycete ถูกประเมินสำหรับการต้านเชื้อรากิจกรรมกับ FOC (แข่งขัน แทนสาเหตุของการเหี่ยว Fusarium ในแกงถั่วเขียว), Rhizoctonia bataticola (Taub) เนย (สามสายพันธุ์ vizRB 6, RB-24 และ RB-115 ตัวแทนสาเหตุของแห้งรากเน่าในแกงถั่วเขียว)Macrophomina phaseolina (Tassi) และ Goid (สาเหตุแทนถ่านเน่าในข้าวฟ่าง) โดยวิเคราะห์จากสองวัฒนธรรม FOC และทั้งสามสายพันธุ์ของอาร์ bataticola ได้รับมาจากพยาธิกินมา phaseolinawas หาร ICRISAT, Patancheru อินเดีย และม.จากฝ่ายวิจัยข้าวฟ่าง ไฮเดอราบัด อินเดียดิสก์แบบเชื้อรา (FOC/R. bataticola) ของ 6 mm dia.ถูกวางบนขอบ (1 ซม.จากมุม) ยีสต์น้ำตาลกลูโคสกรดของ casaminoสารสกัด (GCY agar Anjaiah และ al., 1998) จาน และ actinomyceteแยกเป็นลายบนขอบของจาน (1 ซ.ม.จากมุม), ตาม ด้วยการบ่มที่ 28 2 C สี่วัน หรือจนกว่าการศึกษาครอบคลุมทั้งแผ่นในแผ่นควบคุม ยับยั้งการของ mycelium เชื้อรา (halo โซน) สถาน actinomyceteโคโลนีที่สังเกตเป็นบวก และโซนยับยั้งวัด2.4 กิจกรรมที่เอนไซม์ในระบบและ metabolite รองผลิตโดยแยก actinomycete2.4.1. Siderophore ผลิตผลิต Siderophore กำหนดตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Schwyn และ Neilands (1987) Actinomycetesมีลายบนโครเมี่ยม azurol media agar S (CAS) และincubated ที่ 28 2 C 4 วัน เมื่อ actinomycetesใช้เหล็ก นำเสนอในสื่อสีน้ำเงิน CAS, halos ส้มผลิตทั่วอาณานิคม ซึ่งบ่งชี้สถานะของsiderophores บันทึกข้อสังเกตใน 4 0 เรทติ้งเป็นดังต่อไปนี้: 0 ¼ไม่เปลี่ยนแปลง 1 ¼บวก 2 โซน¼ halo 1e3 มม.3 โซน¼ halo 4e6 มม.และ 4 โซน¼ halo ของ 7 มม. และเหนือ2.4.2. cellulase ผลิตใช้โพรโทคอลที่เป็นมาตรฐานของนดริกส์ et al. (1995)การประเมินการผลิต cellulase Actinomycetes มีลายบนเซลลูโลสคองโกแดง agar media และ incubated ที่ 2 C 28 สำหรับวันที่สี่ แผ่นสุภัคสำหรับ halo โซนสถานอาณานิคม actinomycete ซึ่งบ่งชี้สถานะของ cellulaseสังเกตบันทึกบนเรทติ้งดัง 4 0:0 ¼ไม่change; 1 ¼ positive; 2 ¼ halo zone of 1e3 mm; 3 ¼ halo zone of4e6 mm and 4 ¼ halo zone of 7 mm and above.2.4.3. Protease productionIt was done as per the protocols of Bhattacharya et al. (2009).Actinomycetes were streaked on casein agar and incubated at28 2 C for four days. At the end of the incubation, the plates wereobserved for halo zone around the colonies, which indicates thepresence of protease. Observations were recorded on a 04 ratingscale as follows: 0 ¼ no change; 1 ¼ positive; 2 ¼ halo zone of1e3 mm; 3 ¼ halo zone of 4e6 mm and 4 ¼ halo zone of 7 mm andabove.2.4.4. Hydrocyanic acid (HCN) productionHCN was estimated qualitatively by the sulfocyanate colorimetricmethod (Lorck, 1948). The actinomycetes were grown inBennett agar amended with glycine (4.4 g l1). One sheet ofWhatman filter paper no. 1 (8 cm dia.) was soaked in 1% picric acid(in 10% sodium carbonate; filter paper and picric acid were sterilizedseparately) for a minute and stuck underneath the Petri dishlids. The plates were sealed with Parafilm and incubated at28 2 C for four days. Development of reddish brown color on thefilter paper indicated positive for HCN production. Observationswere recorded (by a panel of three observers) on a 03 rating scale
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.2 การแยกสายพันธุ์ actinomycete
สิบกรัมของปุ๋ยหมักมูลไส้เดือนจากสมุนไพรแต่ละตัวอย่างถูก
ระงับแยกต่างหากใน 90 มล. น้ำเกลือทางสรีรวิทยา (0.85% ของ
โซเดียมคลอไรด์) ในขวดและวางไว้บนเครื่องปั่นวงโคจร (ที่ 100 รอบต่อนาที) ณ ห้อง
อุณหภูมิ (28? 2? C ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในตอนท้ายของการสั่น, มูลไส้เดือน
ตัวอย่างที่ถูกปรับลดเป็นลำดับถึง 106 เจือจางด้วย
น้ำเกลือทางสรีรวิทยา เจือจาง 104? 106 ถูกชุบแป้งเคซีนใน
อาหารเลี้ยงเชื้อ (SCA) โดยใช้เทคนิคการแพร่กระจายแผ่นและบ่มที่ 28? 2? C เป็นเวลา
สี่วัน อาณานิคมที่โดดเด่นที่สุด (คนที่ถูก
พบมากในแผ่นที่ผลิตเม็ดสีและยับยั้ง
อาณานิคมอยู่ติดกัน) มีแยกและการบำรุงรักษาใน slants SCA
ที่ 4 องศาเซลเซียสสำหรับการศึกษาต่อไป.
2.3 ในกิจกรรมต้านเชื้อราหลอดทดลอง
actinomycete แยกได้รับการประเมินสำหรับเชื้อราของพวกเขา
กับกิจกรรมฟรี (การแข่งขัน 1; ตัวแทนโรคเหี่ยวใน Fusarium สาเหตุ
ถั่วเขียว) Rhizoctonia bataticola (Taub) เนย (สามสายพันธุ์ ได้แก่ .
RB-6 RB-24 RB-115; สาเหตุของโรครากเน่าแห้งในถั่วเขียว)
และ Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid (สาเหตุของถ่าน
เน่าในข้าวฟ่าง) โดยการทดสอบแบบ dual-วัฒนธรรม ฟรีและทั้งสาม
สายพันธุ์ของ bataticola อาร์ที่ได้มาจากพืชตระกูลถั่วพยาธิวิทยา
กอง ICRISAT, Patancheru อินเดียและเอ็ม phaseolinawas ที่ได้มา
จากคณะกรรมการของข้าวฟ่างวิจัย Hyderabad, India.
ดิสก์เชื้อรา (ฟรี / R. bataticola) ของ เส้นผ่าศูนย์กลาง 6 มม ถูกวางลงบนหนึ่ง
ขอบ (1 ซม. จากมุม) ของน้ำตาลกลูโคสกรดซามิยีสต์
สารสกัด (วุ้น GCY. Anjaiah, et al, 1998) แผ่นและ actinomycete
แยกถูกลายบนขอบของแผ่นอื่น ๆ (1 ซม. จาก
มุม ) ตามด้วยการบ่มที่ 28? 2 องศาเซลเซียสเป็นเวลาสี่วันหรือจนกว่าจะมี
การติดเชื้อที่ครอบคลุมทั้งในแผ่นแผ่นควบคุม ยับยั้ง
เส้นใยของเชื้อรา (เขตรัศมี) รอบ actinomycete
อาณานิคมถูกตั้งข้อสังเกตว่าในเชิงบวกและบริเวณยับยั้งวัด.
2.4 กิจกรรมของเอนไซม์และการผลิตสารทุติยภูมิโดย
actinomycete แยก
2.4.1 การผลิต siderophore
ผลิต siderophore ถูกกำหนดให้เป็นไปตาม
วิธีการอธิบายโดย Schwyn และ Neilands (1987) actinomycetes
ถูกเส้นโครเมี่ยมใน azurol S (CAS) วุ้นสื่อและการ
บ่มที่ 28? 2 องศาเซลเซียสเป็นเวลาสี่วัน เมื่อ actinomycetes
บริโภคเหล็กอยู่ในสื่อ CAS สีฟ้า, สีส้มรัศมี
มีการผลิตทั่วอาณานิคมซึ่งบ่งบอกถึงการปรากฏตัวของ
siderophores ข้อสังเกตที่ถูกบันทึกไว้บน 0 4 มาตราส่วนเป็น?
ต่อไปนี้: 0 ¼ไม่มีการเปลี่ยนแปลง 1 ¼บวก; 2 ¼โซนรัศมีของ 1e3 มม
3 ¼โซนรัศมีของมม 4e6 และ 4 ¼เขตรัศมี 7 มิลลิเมตรและสูงกว่า.
2.4.2 ผลิตเซลลูเล
โปรโตคอลมาตรฐานของเฮ็นดริกเอตอัล (1995) ถูกนำมาใช้
ในการประเมินการผลิตเซลลูเลส actinomycetes ถูกลาย
บนเซลลูโลสคองโกสื่อวุ้นสีแดงและบ่มที่ 28? 2? C เป็นเวลา
สี่วัน แผ่นถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับโซนรัศมีรอบ
อาณานิคม actinomycete ซึ่งบ่งบอกถึงการปรากฏตัวของเซลลูเลส.
สังเกตที่ถูกบันทึกไว้บน 0 4 ระดับคะแนนดังต่อไปนี้: 0 ¼ไม่มี
การเปลี่ยนแปลง 1 ¼บวก; 2 ¼โซนรัศมีของมม 1e3; 3 ¼โซนรัศมีของ
มม 4e6 และ 4 ¼เขตรัศมี 7 มิลลิเมตรและสูงกว่า.
2.4.3 การผลิตโปรติเอส
มันก็ทำตามโปรโตคอลของ Bhattacharya et al, (2009).
Actinomycetes ถูกลายเคซีนในอาหารเลี้ยงเชื้อและบ่มที่
28? 2 องศาเซลเซียสเป็นเวลาสี่วัน ในตอนท้ายของการบ่มแผ่นที่ถูก
ตั้งข้อสังเกตสำหรับโซนรัศมีรอบอาณานิคมซึ่งบ่งชี้ว่า
การปรากฏตัวของโปรติเอส ข้อสังเกตที่ถูกบันทึกไว้ใน 4 0 คะแนน?
ขนาดดังต่อไปนี้: 0 ¼ไม่มีการเปลี่ยนแปลง 1 ¼บวก; 2 ¼โซนรัศมีของ
มม 1e3; 3 ¼โซนรัศมีของมม 4e6 และ 4 ¼เขตรัศมี 7 มิลลิเมตรและ
ด้านบน.
2.4.4 กรดไฮโดรไซยา (HCN) ผลิต
HCN เป็นที่คาดกันในเชิงคุณภาพโดยสี sulfocyanate
วิธี (Lorck, 1948) แอคติโนมัยถูกปลูกใน
เบนเน็ตต์กับวุ้นแก้ไข glycine (4.4 GL 1) หนึ่งแผ่น
กระดาษกรอง Whatman ไม่มี 1 (. 8 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง) ถูกแช่ในกรด picric 1%
(ในโซเดียมคาร์บอเนต 10%; กระดาษกรองและกรด picric ถูกฆ่าเชื้อ
แยกต่างหาก) สำหรับนาทีและติดอยู่ใต้จานเลี้ยงเชื้อ
ฝาปิด แผ่นถูกปิดผนึกด้วย Parafilm และบ่มที่
28? 2 องศาเซลเซียสเป็นเวลาสี่วัน การพัฒนาที่มีสีน้ำตาลแดงบน
กระดาษกรองชี้ให้เห็นในเชิงบวกสำหรับการผลิต HCN ข้อสังเกต
ที่ถูกบันทึกไว้ (โดยแผงของสามผู้สังเกตการณ์) ในวันที่ 0 3 มาตราส่วน
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.2 . การแยกเชื้อแอคติโนมัยซีท
10 กรัมของสมุนไพร Vermicompost จากแต่ละจำนวน
แยกกันชั่วคราวใน 90 มิลลิลิตร สรีรวิทยา น้ำเกลือ ( 0.85 %
NaCl ) ในขวดและวางไว้บนเครื่องปั่นโคจร ( ที่ 100 รอบต่อนาที ที่อุณหภูมิในห้อง
( 28 2 C ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในตอนท้ายของสั่น และ vermicompost
จำนวนเป็นจำนวนถึง 106 เจือจางกับ
น้ำเกลือทางสรีรวิทยาวิธีการ 104 106 ถูกชุบบนอาหารวุ้นเคซีน
แป้ง ( SCA ) โดยเทคนิคแผ่นกระจายและบ่มที่อุณหภูมิ 28 2 C
4 วัน อาณานิคมที่โดดเด่นที่สุด ( คนที่ได้
พบมากในจาน , ผลิตสีและยับยั้ง
อาณานิคมติดกัน ) ถูกแยกและรักษา SCA slants
ที่ 4 C สำหรับการศึกษา .
2.3 ในหลอดทดลองในกิจกรรม
แอคติโนมัยซีทสายพันธุ์มาศึกษาฤทธิ์ต้านรา
กับฟรี ( แข่ง 1 ; สาเหตุโรคเน่าแห้งเหี่ยวใน
ถั่วเขียว ) , ไรซอคโทเนีย bataticola ( เทา ) เนย ( 3 สายพันธุ์ ได้แก่ rb-6
, และ rb-24 rb-115 ; สาเหตุโรครากเน่าแห้งถั่วเขียว )
macrophomina และชีวภาพ ( tassi ) ทองคำ . ( สาเหตุโรคเน่าในถ่าน
ข้าวฟ่าง ) โดยวัฒนธรรมสองการทดสอบ ฟรีและทั้งหมด 3
สายพันธุ์ Rbataticola ได้มาจากพืชตระกูลถั่วพยาธิวิทยา
ฝ่าย ญเติบโต Patancheru , อินเดีย และ ม. phaseolinawas ได้มา
จากกรมยุทธศึกษา ข้าวฟ่าง ไฮเดอราบัด อินเดีย
ดิสก์รา ( ฟรี / R . bataticola ) ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 6 มม. ที่ถูกวางไว้บนขอบ (
1 ซม. จากมุมของกลูโคส กรด casamino ยีสต์สกัด (
gcy วุ้น ; anjaiah et al . , 1998 ) และแอคติโนมัยซีท
จานแยกเป็นลายบนขอบของแผ่น ( 1 ซม. จาก
มุม ) ตามมาด้วยการบ่มที่ 28 2 เป็นเวลาสี่วัน หรือจนกว่า
เชื้อโรคครอบคลุมจานทั้งหมดในทะเบียนคุม การยับยั้งการเจริญของเชื้อรา
( รัศมีโซน ) รอบทีโนมัยซีท
อาณานิคมถูกระบุเป็นบวกและยับยั้งเขตวัด
2.4 . กิจกรรมและการสร้างสารทุติยภูมิโดย
การผลิตเอนไซม์actinomycete ไอโซ
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . การผลิตสารละลายไซเดอโรฟอร์ ตัดสินใจตามการผลิต
วิธีการอธิบายโดย schwyn และ neilands ( 1987 ) แอคติโนมัยซีท
ลายบน Chrome azurol S ( CAS ) สื่อต่างๆ
บ่มที่อุณหภูมิ 28 2 เป็นเวลาสี่วัน เมื่อเชื้อแอคติโนมัยสีท
กินเหล็ก ปัจจุบันในสีฟ้า CAS สื่อรัศมีสีส้ม
ผลิตรอบการล่าอาณานิคมซึ่งบ่งชี้ถึงการปรากฏตัวของ
ไซเดอโรฟอร์ . สังเกตที่ถูกบันทึกไว้บน 0 4 ระดับ เป็นดังนี้ ¼ไม่เปลี่ยน
0 1 ¼บวก 2 ¼รัศมีโซนของ 1e3 มม. ;
3 ¼รัศมีโซน 4e6 มม. 4 ¼รัศมีโซน 7 มม. ขึ้นไป
2.4.2 . การผลิตเซลลูเลส
โปรโตคอลมาตรฐานของเฮนดริกซ์ et al . ( 1995 ) ใช้
ประเมินการผลิตเซลลูเลส . แอคติโนมัยซีทลาย
บนอาหารวุ้นเซลลูโลสคองโกสีแดงบ่มที่ 28 2 C
4 วัน แผ่นเป็นสังเกตสำหรับรัศมีโซนรอบ
แอคติโนมัยซีทอาณานิคมซึ่งบ่งชี้ของเซลลูเลส .
สังเกตบันทึกบน 0 4 ระดับ ดังนี้ 0 ¼ไม่
เปลี่ยน 1 ¼บวก 2 ¼รัศมีโซนของ 1e3 มม. 3 ¼รัศมีโซนของ
อืม 4e6 4 ¼ ทรงกลด โซน 7 มม. ขึ้นไป
2.4.3 .
การผลิตโปรติเอสมันทำตามโปรโตคอลของ bhattacharya et al . ( 2552 ) .
แอคติโนมัยซีทลายบนเคซีน วุ้น และบ่มที่อุณหภูมิ 28
2 เป็นเวลาสี่วัน ในตอนท้ายของการบ่มเพาะ จานถูก
) รัศมีโซนรอบโคโลนีซึ่งบ่งชี้
ตนของโปรติเอส สังเกตที่ถูกบันทึกไว้บน 0 4 ระดับ ดังนี้ คะแนน
0 ¼ไม่มีการเปลี่ยนแปลง ; 1 ¼บวก 2 ¼รัศมีโซนของ
1e3 มม. ;3 ¼รัศมีโซน 4e6 มม. 4 ¼รัศมีโซน 7 มม. และ
2.4.4 ข้างต้น . . กรดไฮโดรไซยานิค ( กรดไฮโดรไซยานิก ) กรดไฮโดรไซยานิกการผลิต
ประมาณเชิงคุณภาพ โดย sulfocyanate วิธี Colorimetric
( lorck , 1948 ) และแอคติโนมัยซีสโตใน
เบนเน็ตต์วุ้นผสมกับไกลซีน ( 4.4 กรัมต่อลิตร 1 ) แผ่นเดียว
whatman กระดาษกรองเบอร์ 1 ( 8 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง ) หมัก 1 % กรดพิคริก
( 10% โซเดียม คาร์บอเนต ;กระดาษรองกรดพิคริกถูกฆ่าเชื้อ
แยก ) สำหรับนาทีและติดใต้ฝาจานเพาะเชื้อ
. จานถูกผนึกด้วยพาราฟิล์ม และ บ่มที่
28 2 เป็นเวลาสี่วัน การพัฒนาสีน้ำตาลแดงบน
กรองกระดาษระบุบวกการผลิตกรดไฮโดรไซยานิก . สังเกต
บันทึก ( โดยคณะสามผู้สังเกตการณ์ ) 0 3 ระดับ
การแปล กรุณารอสักครู่..
