Selection of and immune response to

Selection of and immune response
to recombinant MHVA59
expressing the LCMV CD8
epitope gp33.


We have selected
a recombinant MHV-A59 (RA59) expressing a foreign
CD8
T-cell epitope, gp33, derived from the glycoprotein (or
G protein) of LCMV. The gp33 epitope is expressed as a
fusion protein, sandwiched between a 9-amino-acid fragment
of the MHV ORF4a protein (37) and the EGFP (4). A schematic
diagram of the genome of this virus (RA59-gfp/gp33) as
well as a previously described recombinant MHV-A59 expressing
the EGFP protein alone (RA59-gfp), is shown in Fig. 1. In
both genomes the nonessential gene 4 is replaced by the foreign
sequences. Selection of RA59-gfp was described previously
(5). RA59-gfp/gp33 was selected using techniques similar
to those used in the selection of RA59-gfp and is described in
the Materials and Methods. Briefly, recombination occurred
between fMHV and an RNA encoding, in place of gene 4, a
recombinant protein containing 9 amino acids from ORF4a
and 9 amino acids of gp33 fused in frame with the EGFP gene.
Such recombinants were selected and plaque purified on murine
L2 cells all as previously described (26) and were characterized
further.
Cells infected with these viruses were notably less fluorescent
than RA59-gfp, suggesting that the N-terminal addition to
the EGFP protein may interfere with its function. Alternatively
there may be less transcription or translation due to differences
near the intergenic sequences (5, 20). RA59-gfp/gp33 (log10
50% lethal dose [LD50]  5.6) displayed a similar level of
virulence to RA59-gfp (log10 LD50  5.5). As previously published
(5), RA59-gfp is somewhat attenuated relative to wildtype
recombinant RA59 (log10 LD50  4); thus, both EGFPexpressing
viruses display LD50 values approximately 10-fold
higher than those displayed by wild-type RA59.
We quantified the epitope-specific CD8
T-cell response to
RA59-gfp/gp33 in the spleen and in the CNS after both i.c. and
i.p. inoculation. Thus, 4-week-old B6 mice were inoculated
either i.c. or i.p. and animals were sacrificed at day 7 postinfection
(after i.c. inoculation) and on day 8 postinfection (after
i.p. inoculation), the peak of inflammation for each route.
Splenocytes were isolated from both sets of mice; CNS mononuclear
cells were isolated from only those mice inoculated by
the i.c. route. An intracellular IFN- assay was used to quantify
the percentage of CD8
T cells specific for the MHV spike
protein CD8
T-cell epitope S598 and for gp33 (19, 25). As
shown in Fig. 2, S598 and gp33 epitope-specific CD8
T cells
are detected in both the spleen and the CNS. Response in the
spleen is similar whether inoculation is carried out either i.c. or
i.p.; following i.c. infection, the levels of CD8
T cells specific
for both epitopes are higher in the CNS, the site of viral
replication, than in the spleen, as observed previously (3, 17).
Epitope-specific CD8
T cells confer protection against infection
with RA59-gfp/gp33. We wanted to determine the ability
of the CD8
T-cell response against a single epitope to
protect mice from MHV replication and disease. The strategy
was to carry out immunization with an rLm expressing gp33
(rLm-gp33) followed by challenge with RA59-gfp/gp33.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวเลือกและการตอบสนองภูมิคุ้มกัน การ recombinant MHVA59แสดง gp33 epitope LCMV CD8 เราได้เลือกเป็น recombinant MHV-A59 (RA59) การแสดงต่างประเทศCD8 T เซลล์ epitope, gp33 มาจากไกลโคโปรตีน (หรือกรัมโปรตีน) ของ LCMV แสดงเป็น gp33 epitope การอาหารโปรตีน ชาวลาวอระหว่างส่วน 9-อะมิโนกรดโปรตีน MHV ORF4a (37) และ EGFP (4) มีแผนผังวงจรไดอะแกรมของจีโนมของไวรัสนี้ (RA59-gfp/gp33) เป็นรวมทั้งการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ recombinant MHV A59 แสดงEGFP โปรตีนเพียงอย่างเดียว (RA59-gfp), มีแสดงใน Fig. 1 ในgenomes ทั้งยีนไม่จำเป็น 4 ถูกแทนที่ ด้วยต่างประเทศลำดับนั้น เลือก RA59 gfp ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(5) . RA59-gfp/gp33 เลือกใช้เทคนิคที่คล้ายกันที่ใช้ในการเลือก RA59 gfp และอธิบายไว้ในวัสดุและวิธีการ สั้น ๆ เกิด recombinationระหว่าง fMHV และมีอาร์เอ็นเอรหัส แทนยีน 4 แบบrecombinant โปรตีนประกอบด้วยกรดอะมิโน 9 จาก ORF4aและกรดอะมิโน 9 ของ gp33 fused ในกรอบกับยีน EGFPเลือกเช่น recombinants และหินปูนที่บริสุทธิ์บน murineเซลล์ L2 ทั้งหมดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (26) และมีลักษณะเพิ่มเติมเซลล์ที่ติดเชื้อไวรัสนี้มียวดน้อยเรืองแสงกว่า RA59-gfp แนะนำที่นี้ N-เทอร์มินัลโปรตีน EGFP อาจไปรบกวนการทำงานของ อีกวิธีหนึ่งคืออาจจะมีน้อยกว่า transcription หรือแปลเนื่องจากความแตกต่างnear the intergenic sequences (5, 20). RA59-gfp/gp33 (log1050% lethal dose [LD50]  5.6) displayed a similar level ofvirulence to RA59-gfp (log10 LD50  5.5). As previously published(5), RA59-gfp is somewhat attenuated relative to wildtyperecombinant RA59 (log10 LD50  4); thus, both EGFPexpressingviruses display LD50 values approximately 10-foldhigher than those displayed by wild-type RA59.We quantified the epitope-specific CD8
T-cell response toRA59-gfp/gp33 in the spleen and in the CNS after both i.c. andi.p. inoculation. Thus, 4-week-old B6 mice were inoculatedeither i.c. or i.p. and animals were sacrificed at day 7 postinfection(after i.c. inoculation) and on day 8 postinfection (afteri.p. inoculation), the peak of inflammation for each route.Splenocytes were isolated from both sets of mice; CNS mononuclearcells were isolated from only those mice inoculated bythe i.c. route. An intracellular IFN- assay was used to quantifythe percentage of CD8
T cells specific for the MHV spikeprotein CD8
T-cell epitope S598 and for gp33 (19, 25). Asshown in Fig. 2, S598 and gp33 epitope-specific CD8
T cellsare detected in both the spleen and the CNS. Response in thespleen is similar whether inoculation is carried out either i.c. ori.p.; following i.c. infection, the levels of CD8
T cells specificfor both epitopes are higher in the CNS, the site of viralreplication, than in the spleen, as observed previously (3, 17).Epitope-specific CD8
T cells confer protection against infectionwith RA59-gfp/gp33. We wanted to determine the abilityof the CD8
T-cell response against a single epitope toprotect mice from MHV replication and disease. The strategywas to carry out immunization with an rLm expressing gp33(rLm-gp33) followed by challenge with RA59-gfp/gp33.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

I want to bring you

.I want to bring you

.I want to bring you

.I want to bring you

.50% ตาย ( [ ld50 ]  5.6 ) แสดงระดับของความรุนแรงที่จะ ra59
GFP ( LN ld50  5.5 ) ที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้
( 5 ) , ra59 GFP จะค่อนข้างบางเมื่อเทียบกับ wildtype
recombinant ra59 ( LN ld50  4 ) ; ดังนั้น ทั้ง egfpexpressing
ไวรัสแสดง ld50 ค่าประมาณ 10 เท่า
สูงกว่าของ ra59
แสดงโดย .50% ตาย ( [ ld50 ]  5.6 ) แสดงระดับของความรุนแรงที่จะ ra59
GFP ( LN ld50  5.5 ) ที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้
( 5 ) , ra59 GFP จะค่อนข้างบางเมื่อเทียบกับ wildtype
recombinant ra59 ( LN ld50  4 ) ; ดังนั้น ทั้ง egfpexpressing
ไวรัสแสดง ld50 ค่าประมาณ 10 เท่า
สูงกว่าของ ra59
แสดงโดย .