The10-fold serial dilutions of p24

The10-fold serial dilutions of p24 in the dilution buffer (PBS containing 1 g/L bovine serum albumin) and spiked in a serum from an HIV-1 negative individual were detected by NLFOA and the conventional ELISA (HIV-1 p24 ELISA). One hundred sera from HIV-1 negative individuals were included as negative controls. The written consent was obtained from all subjects who participated in the study, and the study was approved by the ethics committee of Jilin University. HIV-1 p24 was diluted at low (1 pg/mL), intermediate (10 pg/mL) and high (100 pg/mL) concentrations for determination of the reproducibility and the coefficient of variation (CV). To compare the sensitivity and reproducibility between NLFOA and ELISA, the intra-assay variation was determined with p24 spiked samples (N = 5) analyzed on the same day, and the inter-assay variation was determined with the same samples analyzed on different days. All comparisons were carried out in five independent repeats.

To demonstrate the applicability of NLFOA for detection of other antigens, the capsid protein VP1 of enterovirus 71 (EV71) was analyzed. The procedure for detection of VP1 was similar to that used for p24 detection, with the following changes: mAb 2H2 targeting VP1 was used to coat 96-cell polystyrene microplate, recombinant VP1 expressed in E. coli was spiked in sera, and the biotinylated detection antibody was prepared from VP1-immunized rabbits.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

The10-พับ dilutions ประจำของ p24 ในการเจือจางบัฟเฟอร์ (PBS ประกอบด้วย 1 บัญชีวัว serum albumin) และ spiked ในซีรั่มจากเอชไอวี-1 ลบบุคคลพบ โดย NLFOA และ ELISA ธรรมดา (เอชไอวี-1 p24 ELISA) จะร้อยจากเอชไอวี-1 ลบบุคคลที่เป็นตัวควบคุมค่าลบ สิทธิได้รับจากเรื่องทั้งหมดที่เข้าร่วมในการศึกษา และการศึกษาได้รับการอนุมัติ โดยคณะกรรมการจรรยาบรรณของมหาวิทยาลัยจี๋หลิน P24 เอชไอวี-1 ที่ผสมที่ต่ำ (1 pg/mL), (100 pg/mL) ความเข้มข้นสูงที่ reproducibility และสัมประสิทธิ์ของความแปรผัน (CV) และปานกลาง (10 pg/mL) การเปรียบเทียบความไวและ reproducibility ระหว่าง NLFOA และ ELISA กำหนดความผันแปรภายในวิเคราะห์กับ p24 spiked ตัวอย่าง (N = 5) วิเคราะห์ในวันเดียว และกำหนดเปลี่ยนแปลงระหว่างทดสอบกับตัวอย่างเดียวกันที่วิเคราะห์ในวันต่าง ๆ เปรียบเทียบทั้งหมดได้ดำเนินการทำซ้ำด้วยตนเอง 5แสดงให้เห็นถึงความเกี่ยวข้องของของ NLFOA ตรวจ antigens อื่น มีวิเคราะห์โปรตีน capsid VP1 ของเอนเทอโรไวรัส 71 (EV71) ขั้นตอนในการตรวจสอบของ VP1 ได้คล้ายกับที่ใช้สำหรับการตรวจหา p24 กับการเปลี่ยนแปลงต่อไปนี้: มาบ 2H 2 กำหนดเป้าหมาย VP1 ใช้ตรา microplate โฟมเซลล์ 96, VP1 recombinant แสดงใน E. coli มี spiked ในนโยบาย และที่ biotinylated ตรวจหาแอนติบอดีที่เตรียมจากกระต่ายที่ VP1 immunized

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

The10 เท่าเจือจางอนุกรมของ p24 ในบัฟเฟอร์การเจือจาง (พีบีเอสที่มี 1 กรัม / ลิตรอัลบูมิซีรั่มวัว) และถูกแทงในซีรั่มจากเอชไอวี 1 รายเชิงลบที่ถูกตรวจพบโดย NLFOA และวิธี ELISA ธรรมดา (HIV-1 p24 ELISA) หนึ่งร้อยซีรั่มจากบุคคลเอชไอวี -1 เชิงลบถูกรวมเป็นตัวควบคุมเชิงลบ ได้รับความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรที่ได้รับจากอาสาสมัครทุกคนที่มีส่วนร่วมในการศึกษาและการศึกษาได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัยจี๋หลิน เอชไอวี 1 p24 ถูกเจือจางที่ต่ำ (1 pg / มิลลิลิตร) กลาง (10 pg / มิลลิลิตร) และสูง (100 pg / มิลลิลิตร) สำหรับการกำหนดความเข้มข้นของการทำสำเนาและสัมประสิทธิ์การแปรผัน (CV) เพื่อเปรียบเทียบความไวและการทำสำเนาระหว่าง NLFOA และวิธี ELISA, รูปแบบการทดสอบภายในถูกกำหนดด้วย p24 ถูกแทงตัวอย่าง (ยังไม่มี = 5) วิเคราะห์ในวันเดียวกันและการเปลี่ยนแปลงระหว่างการทดสอบก็ตั้งใจกับกลุ่มตัวอย่างเดียวกันวิเคราะห์ในวันที่แตกต่างกัน เปรียบเทียบทั้งหมดถูกดำเนินการในห้าซ้ำอิสระ. เพื่อแสดงให้เห็นถึงการบังคับใช้ของ NLFOA ในการตรวจหาแอนติเจนอื่น ๆ ที่ VP1 โปรตีน capsid ของเอนเทอโร 71 (EV71) ได้รับการวิเคราะห์ ขั้นตอนการตรวจสอบของ VP1 ก็คล้ายคลึงกับที่ใช้ในการตรวจหา p24 มีการเปลี่ยนแปลงต่อไปนี้: mAb 2H2 กำหนดเป้าหมาย VP1 ได้ถูกใช้ในเสื้อ 96 เซลล์ไมโครสไตรีน, VP1 recombinant แสดงในเชื้อ E. coli ถูกแทงในซีรั่มและการตรวจสอบ biotinylated แอนติบอดีที่เตรียมจากกระต่าย VP1-วัคซีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการพับ p24 the10 อนุกรมในการบัฟเฟอร์ ( PBS ) 1 กรัมต่อลิตร อัลบูมินในเลือด ) และถูกขัดขวางจากบุคคลต่างๆ ที่ถูกตรวจพบและลบโดย nlfoa วิธี ELISA ใน p24 ELISA ) หนึ่งร้อย ( บุคคลลบต่างๆ ถูกรวมเป็นควบคุมลบ หนังสือยินยอมได้มาจากกลุ่มตัวอย่างทั้งหมดที่เข้าร่วมในการศึกษาและการศึกษาที่ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัย Jilin . - p24 ที่ความเข้มข้นต่ำ ( 1 พิโคกรัม / มิลลิลิตร ) , กลาง ( 10 pg / ml ) และสูง ( 100 pg / ml ) ความเข้มข้นยากระชับและสัมประสิทธิ์ความแปรปรวน ( CV ) การเปรียบเทียบความไวและกระชับและระหว่าง nlfoa Elisa ,การทดสอบการเปลี่ยนแปลงภายในถูกกำหนดด้วย p24 spiked ตัวอย่าง ( n = 5 ) วิเคราะห์ในวันเดียวกัน และระหว่างการทดสอบการเปลี่ยนแปลงถูกกำหนดด้วยจำนวนเดียวกันวิเคราะห์ในวันที่แตกต่างกัน การเปรียบเทียบทั้งหมดดำเนินการในห้าซ้ำอิสระ

เพื่อแสดงให้เห็นถึงความเกี่ยวข้องของการตรวจหาแอนติเจน nlfoa แคปซิดโปรตีนอื่น ๆ vp1 ของเอนเทอโรไวรัส 71 ( ev71 ) คือการวิเคราะห์ขั้นตอนการตรวจหา vp1 คือคล้ายกับที่ใช้ในการตรวจสอบ p24 ที่มีการเปลี่ยนแปลงต่อไปนี้ : มาบ 2h2 เป้าหมาย vp1 ใช้โค้ท 96 เซลล์โฟมพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยรีคอมบิแนนท์ vp1 แสดงออกใน E . coli ถูกวิธี และการตรวจหาแอนติบอดีที่เตรียมได้จากไล vp1 กลุ่มกระต่าย