2PO42,4.7mMKCl,1.7mMCaCl, 1.2 mM Mg

2
PO
4
2
,4.7mMKCl,1.7mMCaCl
, 1.2 mM MgSO
, 20 mM sodium acetate, and 10 mM glucose, pH 7.4. The buffer was kept at 37 ฐC and bubbled continuously with 100% oxygen. A small waterjacketed chamber was used to keep the hearts at 37 ฐC. The hearts were stabilized for 15 min, and then global ischemia and reperfusion were established for 20 min and 2 h, respectively. Sham hearts were perfused for the 15 min stabilization period only. The heart effluents were collected for 1-min intervals at selected times for determination of coronary flow and lactate dehydrogenase release. At the end of the perfusions, the hearts were harvested and the ventricles were snap-frozen in liquid nitrogen and kept at −70 ฐC for later analysis. The frozen ventricles were crushed to a powder using a liquid nitrogen-chilled tissue pulverizer. For tissue analyses, weighed amounts of the frozen tissues were homogenized in the appropriate buffer using a microcentrifuge tube homogenizer. The protein content of the homogenates was determined by the Bradford method [36].
4
Coronary Flow and Lactate Dehydrogenase (LDH) Release
The heart effluents were collected for 1 min at selected time points during stabilization and reperfusion periods. Coronary flow rate was calculated as ml effluent/min/g wet weight of heart. The activity of LDH in the effluent samples was measured according to the method of Kornberg [37]. LDH activity was calculated as units/ml of coronary flow/ wet weight of the heart.
Caspase-3 Activity
Thirty mg of the frozen tissue was homogenized in 500 μl cold lysis buffer containing 10 mM Hepes,
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2
PO
4
2
, 4.7mMKCl, 1.7mMCaCl
, 1.2 mM MgSO
, acetate โซเดียม 20 มม. และกลูโคส 10 mM ค่า pH 7.4 การ บัฟเฟอร์ที่ถูกเก็บไว้ที่ 37 ฐC และเป็นฟองเนื่อง ด้วยออกซิเจน 100% ห้อง waterjacketed ขนาดเล็กถูกใช้เพื่อเก็บหัวใจที่ 37 ฐC หัวใจไม่เสถียรสำหรับ 15 นาที แล้ว ขาดเลือดส่วนกลางและ reperfusion ก่อตั้ง 20 นาทีและ 2 h ตามลำดับ ซัมซุยโปหัวใจถูก perfused สำหรับเสถียรภาพงวด 15 นาทีเท่านั้น ห้อง effluents ถูกเก็บรวบรวมสำหรับช่วงเวลา 1 นาทีที่เลือกเวลาสำหรับการกำหนดกระแสหัวใจและนำ lactate dehydrogenase ในตอนท้ายของการ perfusions หัวใจถูกเก็บเกี่ยว แล้ว ventricles มีสแนปแช่ในไนโตรเจนเหลว และเก็บไว้ที่ ฐC −70 สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลัง Ventricles แช่แข็งถูกบดให้เป็นผงใช้ pulverizer เนื้อเยื่ออาหารไนโตรเจนเหลว สำหรับวิเคราะห์เนื้อเยื่อ เนื้อเยื่อแช่แข็งจำนวนชั่งน้ำหนักได้ homogenized เป็นกลุ่มในบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมใช้ homogenizer หลอดเป็น microcentrifuge โปรตีนของ homogenates ถูกกำหนด โดยวิธีแบรดฟอร์ด [36] .
4
ไหลหัวใจและนำ Lactate Dehydrogenase (LDH)
Effluents หัวใจถูกเก็บรวบรวมใน 1 นาทีเวลาเลือกจุดช่วง reperfusion และเสถียรภาพ อัตราการไหลหัวใจถูกคำนวณเป็นน้ำหนักเปียก น้ำ/นาที/g ml ของหัวใจ กิจกรรมของ LDH ในตัวอย่างน้ำทิ้งที่วัดตามวิธีของ Kornberg [37] กิจกรรม LDH คำนวณเป็นหน่วย/มล.ของกระแสเลือดหัวใจ / เปียกน้ำหนักของหัวใจ
กิจกรรม Caspase-3
30 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อแช่แข็งถูก homogenized เป็นกลุ่มในบัฟเฟอร์การ lysis เย็น 500 μl ประกอบด้วย 10 มม. Hepes,
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2
PO
4
2
, 4.7mMKCl, 1.7mMCaCl
1.2 มิลลิ MgSO
, 20 มิลลิโซเดียมอะซิเตทและ 10 มมของกลูโคส pH 7.4 บัฟเฟอร์ถูกเก็บไว้ที่ 37 ฐ C และฟองอย่างต่อเนื่องกับออกซิเจน 100% ห้อง waterjacketed ขนาดเล็กถูกนำมาใช้เพื่อให้หัวใจที่ 37 ฐซี หัวใจที่มีเสถียรภาพเป็นเวลา 15 นาทีและจากนั้นขาดเลือดทั่วโลกและกลับคืนเป็นที่ยอมรับสำหรับ 20 นาทีและ 2 ชั่วโมงตามลำดับ หัวใจ Sham ถูก perfused สำหรับงวดเสถียรภาพ 15 นาทีเท่านั้น น้ำทิ้งหัวใจถูกเก็บไว้สำหรับช่วงเวลา 1 นาทีในช่วงเวลาที่เลือกไว้สำหรับความมุ่งมั่นของการไหลเวียนของหลอดเลือดหัวใจและการปล่อยนม dehydrogenase ในตอนท้ายของ perfusions หัวใจที่ได้รับการเก็บเกี่ยวและโพรงที่เป็นสแน็ปแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -70 ฐ C สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลัง โพรงแช่แข็งที่ถูกบดเป็นผงโดยใช้ไนโตรเจนแช่เย็นเครื่องบดเนื้อเยื่อของเหลว สำหรับการวิเคราะห์เนื้อเยื่อชั่งน้ำหนักปริมาณของเนื้อเยื่อที่แช่แข็งได้หดหายในบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมโดยใช้โฮโมจีไนหลอดไมโคร ปริมาณโปรตีนของ homogenates ถูกกำหนดโดยวิธี Bradford [36]
4
หัวใจและการไหลของน้ำนมไฮโดรจีเน (LDH) ปล่อย
น้ำทิ้งหัวใจที่ถูกเก็บรวบรวมเป็นเวลา 1 นาทีที่จุดเวลาที่เลือกในระหว่างการรักษาเสถียรภาพและกลับคืนระยะเวลา อัตราการไหลของหลอดเลือดที่คำนวณได้เป็นน้ำทิ้งมล / นาที / กรัมน้ำหนักเปียกของหัวใจ กิจกรรมของ LDH ในตัวอย่างน้ำทิ้งที่ได้รับการวัดตามวิธีการของ Kornberg [37] กิจกรรม LDH ที่คำนวณเป็นหน่วย / ml การไหลเวียนของหลอดเลือด / น้ำหนักเปียกของหัวใจ
เซ่-3 กิจกรรม
สามสิบมิลลิกรัมของเนื้อเยื่อแช่แข็งได้รับการหดหายใน 500 ไมโครลิตรบัฟเฟอร์สลายเย็นที่มี 10 มิลลิ HEPES,
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2
4
2 ปอ


4.7mmkcl 1.7mmcacl 1.2 มม. , MgSO
, โซเดียมอะซีเตท 20 มม. และ 10 มม. กลูโคส , pH 7.4 . บัฟเฟอร์ที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และฟองอย่างต่อเนื่องด้วยออกซิเจน 100% ห้อง waterjacketed ขนาดเล็กถูกใช้เพื่อเก็บหัวใจที่ 37 องศา C . หัวใจมี 15 นาทีแล้วขาดเลือดทั่วโลกและได้รับก่อตั้งขึ้นเป็นเวลา 20 นาทีและ 2 ชั่วโมง ตามลำดับหัวใจถูกหนูหลอกลวงสำหรับ 15 นาทีเสถียรภาพระยะเท่านั้น หัวใจบริการ เก็บข้อมูลสำหรับช่วง 1-min ตลอดเวลาที่เลือกสำหรับการหาการไหลหัวใจตีบและ lactate dehydrogenase ปล่อย ในตอนท้ายของ perfusions หัวใจห้องล่างถูกตะครุบเก็บแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บที่อุณหภูมิ− 70 องศาเซลเซียส สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลังแช่แข็งส่วนล่างถูกบดให้เป็นผงใช้ไนโตรเจนเหลวเย็นบดเนื้อเยื่อ การวิเคราะห์เนื้อเยื่อ ชั่งปริมาณเนื้อเยื่อแช่แข็งถูกบดในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์เหมาะสมบัฟเฟอร์ใช้เครื่องปั่น . ปริมาณโปรตีนของ homogenates ถูกกำหนดโดยวิธี Bradford [ 36 ] .
4
การไหลของเลือด และ lactate dehydrogenase ( LDH ) ปล่อย
หัวใจบริการ เก็บข้อมูลนาน 1 นาที เลยเลือกเวลาจุดในเสถียรภาพและระยะเวลาที่ได้รับ . อัตราการไหลของหลอดเลือดเป็น ml / min / คำนวณ / กรัมน้ำหนักเปียกของหัวใจ กิจกรรมของ LDH ในตัวอย่างน้ำทิ้งได้ตามวิธีการของคอร์นเบิร์ก [ 37 ] กิจกรรมหลังถูกคำนวณเป็นหน่วย / มิลลิลิตร / น้ำหนักเปียกของหลอดเลือดของหัวใจ การศึกษาลักษณะกิจกรรม

30 มิลลิกรัมของการแช่แข็งเนื้อเยื่อบด 500 μผมเย็นการสลายบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 10 ฮีเปส mm
2