1. Introduction
Alkaline proteases are widely used biocatalytic enzyme and well known for their emerging novel properties and their exotic catalytic nature. Hence alkaline protease producing organisms have attracted more attention of the scientific community so as to enhance and ensure better utilization of proteins [3] and [20]. These enzymes find diverse applications in different industries such as detergent, food, feed, pharmaceutical, leather, silk and for recovery of silver from used X-ray films [1], [12] and [29]. Microorganisms represent an excellent source of protease owing to their broad biochemical diversity and susceptibility to genetic manipulation that are desirable for various applications [11]. Alkaline proteases can be defined as the proteases that are active in alkaline range of pH [13] and [15]. Microbial proteases are among the most important hydrolytic enzymes and have been studied extensively since the advent of enzymology. Looking into the depth of microbial diversity, there is always a chance of finding microorganism producing novel enzymes with better properties and suitable for commercial exploitation. The multitude of physiochemical diverse habitats has challenged nature to develop equally numerous molecular adaptations in the microbial world. The 16S rDNA method is sequence based taxonomy and in the present scenario, molecular characterization based on RAPD fingerprinting is additionally used to study the microbial diversity or variability and their ecological distribution. RAPD is a very convenient and cost effective method employed for bacterial identification and variability estimation [17]. The PCR based method of gene typing based on genomic polymorphism is a recent approach which is widely used for the assessment of inter and intraspecific genetic variation and uses a single short random oligonucleotide primer [36]. In most cases of bacterial genetics, RAPD assay generated the best DNA pattern for differentiation of bacteria. A number of studies have reported success in using RAPD assays to distinguish bacterial strains among diverse species [28], [4], [9] and [10]. A study on genetic variability among Arthrobacter strain by phylogenetic analysis of RAPD-PCR fingerprint patterns has been reported by Saxena and Singh (2013) [31].
2. Materials and methods
2.1. Sample collection
For the isolation of protease producing bacteria, soil samples were collected from agricultural fields of Central Soil Salinity Research Institute, slaughter house, fish harbour and dairy house etc. (Table 1). Soil samples were collected in sterile polybags and stored at 4 °C for further experiments. Prior to collection of sample the pH of the soil was monitored.
1.
บทนำโปรตีเอสอัลคาไลน์ที่มีการใช้กันอย่างแพร่หลายเอนไซม์biocatalytic และเป็นที่รู้จักกันดีสำหรับการเกิดใหม่ของพวกเขาคุณสมบัติใหม่และตัวเร่งปฏิกิริยาธรรมชาติของพวกเขาที่แปลกใหม่ อัลคาไลน์โปรติเอสดังนั้นการผลิตสิ่งมีชีวิตที่ได้รับความสนใจมากขึ้นของชุมชนวิทยาศาสตร์เพื่อเพิ่มและให้แน่ใจว่าการใช้ประโยชน์ที่ดีของโปรตีน [3] และ [20] เอนไซม์เหล่านี้พบว่าใช้งานที่หลากหลายในอุตสาหกรรมที่แตกต่างกันเช่นผงซักฟอก, อาหาร, อาหาร, ยา, หนัง, ผ้าไหมและสำหรับการกู้คืนเงินจากการใช้ฟิล์มเอ็กซ์เรย์ [1] [12] และ [29] จุลินทรีย์เป็นแหล่งที่ดีของโปรติเอสเนื่องจากพวกเขามีความหลากหลายทางชีวเคมีในวงกว้างและความไวต่อการจัดการทางพันธุกรรมที่เป็นที่พึงประสงค์สำหรับการใช้งานต่างๆ [11] อัลคาไลน์โปรตีเอสสามารถกำหนดเป็นโปรตีเอสที่มีการใช้งานอยู่ในช่วงของค่าความเป็นกรดเป็นด่าง [13] และ [15] โปรตีเอสจุลินทรีย์อยู่ในหมู่เอนไซม์ย่อยสลายที่สำคัญที่สุดและได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางตั้งแต่การถือกำเนิดของเอนไซม์ มองเข้าไปในความลึกของความหลากหลายของจุลินทรีย์ที่ยังมีโอกาสในการหาจุลินทรีย์ที่ผลิตเอนไซม์นวนิยายที่มีคุณสมบัติที่ดีและเหมาะสำหรับการใช้ประโยชน์ในเชิงพาณิชย์ ฝูงของแหล่งที่อยู่อาศัยที่มีความหลากหลายทางเคมีกายภาพได้ท้าทายธรรมชาติในการพัฒนาดัดแปลงโมเลกุลหลายอย่างเท่าเทียมกันในโลกของจุลินทรีย์ 16S rDNA วิธีเป็นลำดับอนุกรมวิธานและในสถานการณ์ปัจจุบันลักษณะโมเลกุลขึ้นอยู่กับลายนิ้วมือดีเอ็นเอถูกนำมาใช้นอกจากนี้ในการศึกษาความหลากหลายของจุลินทรีย์หรือความแปรปรวนและการกระจายของพวกเขาในระบบนิเวศ RAPD เป็นวิธีที่สะดวกและประหยัดค่าใช้จ่ายที่ใช้ในการระบุตัวตนของเชื้อแบคทีเรียและการประมาณความแปรปรวน [17] วิธีการที่ใช้ในการพิมพ์ PCR ของยีนที่อยู่บนพื้นฐานของความแตกต่างของจีโนมเป็นวิธีการที่ผ่านมาซึ่งจะใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการประเมินการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมระหว่างและสำนวนและใช้ไพรเมอร์ oligonucleotide สุ่มสั้นเดียว [36] ในกรณีส่วนใหญ่ของพันธุศาสตร์ของแบคทีเรียทดสอบดีเอ็นเอที่สร้างรูปแบบดีเอ็นเอที่ดีที่สุดสำหรับความแตกต่างของเชื้อแบคทีเรีย จากการศึกษาได้มีการรายงานความสำเร็จในการใช้การตรวจดีเอ็นเอที่จะแยกแยะสายพันธุ์แบคทีเรียสายพันธุ์ที่มีความหลากหลายในหมู่ [28] [4] [9] และ [10] การศึกษาเกี่ยวกับความแปรปรวนทางพันธุกรรมของสายพันธุ์ Arthrobacter โดยการวิเคราะห์สายวิวัฒนาการของรูปแบบลายนิ้วมือ RAPD-PCR ได้รับรายงานจาก Saxena และสิงห์ (2013) [31]. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 การเก็บตัวอย่างสำหรับการแยกการผลิตเอนไซม์โปรติเอแบคทีเรียตัวอย่างดินที่ถูกเก็บรวบรวมจากสาขาการเกษตรของความเค็มของดินสถาบันวิจัยกลาง, โรงฆ่าสัตว์, ท่าเรือบ้านปลาและนม ฯลฯ (ตารางที่ 1) เก็บตัวอย่างดินใน Polybags ผ่านการฆ่าเชื้อและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสสำหรับการทดลองต่อไป ก่อนที่จะมีคอลเลกชันของกลุ่มตัวอย่างมีค่า pH ของดินได้รับการตรวจสอบ
การแปล กรุณารอสักครู่..