The HPLC columnThis is also known a

The HPLC column

This is also known as the stationary phase. This is the workhorse of the HPLC machine, is made from one of a variety of substances (often silica) and is very compact in nature. The silica particles are functionalized by long carbon chains. The carbon chains are apolar and therefore the longer the chain, the more apolar the column becomes. Columns containing 18-carbon chains are commonly used and are known as C18 columns.

The HPLC sample

Sample types vary greatly depending on the field and the type of compounds in question. HPLC can be used to analyze compounds in biological specimens (urine, blood, saliva, and muscle), environmental samples, medicinal chemistry (drugs), and microbiology (toxins produced by fungi and bacteria).

Injection of sample

Samples are injected into the HPLC column. This used to be carried out manually, meaning that some poor soul had to sit by the HPLC machine for hours on end injecting each sample with a syringe, sometimes all night long!

Luckily, newer models have an automatic injector, reducing the manual input and allowing higher throughput. Modern machines are equipped with software allowing the user to input a list of samples, how much and in what order they should be injected. So you can enjoy your lunch while your HPLC runs itself!

The mobile phase

This is really just a mixture of water and an organic solvent (usually acetonitrile or methanol). The mobile phase gets it name because it moves through the column and at the same time elutes (or flushes out) the compounds from the column.

Compounds are often eluted along a concentration gradient. If you’re anything like me, concentration and gradient are two words you hate to see coming together in a sentence! It just means that the percentage of water in the mobile phase decreases over time, while the percentage of the apolar solvent increases simultaneously. This means that the mobile phase gradually becomes more apolar. Don’t worry too much about gradients for now, as they will appear again in a follow-up article.

The HPLC run

HPLC can be performed in a number of modes. The most commonly used method is known as reversed-phase (RP-HPLC) and this is what I describe here. In this mode, compounds are separated starting with the most polar, and ending with the apolar compounds. For all modes, a high-powered pump moves the sample and the mobile phase through the column. A typical run can take between 10-60 minutes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คอลัมน์ HPLCนี่คือเรียกว่าเฟสแบบ นี่คือ แหล่งพลังของเครื่อง HPLC ทำจากความหลากหลายของสาร (มักซิลิก้า) อย่างใดอย่างหนึ่ง และมีขนาดเล็กมากในธรรมชาติ โรงแรมปรับหมู่ฟังก์ชั่นอนุภาคซิลิกา ด้วยโซ่คาร์บอนที่ยาว โซ่คาร์บอนมี apolar และโซ่ดังนั้นอีกต่อไป กลายเป็นคอลัมน์ apolar เพิ่มเติม คอลัมน์ที่ประกอบด้วยคาร์บอน 18 โซ่ใช้กันทั่วไป และเป็นที่รู้จักกันเป็นคอลัมน์ C18ตัวอย่าง HPLCตัวอย่างชนิดที่แตกต่างกันมากขึ้นอยู่กับฟิลด์และชนิดของสารในคำถาม HPLC สามารถใช้วิเคราะห์สารตัวอย่างทางชีวภาพ (ปัสสาวะ เลือด น้ำลาย และกล้ามเนื้อ), ตัวอย่างสิ่งแวดล้อม เคมียา (ยา), และจุลชีววิทยา (สารพิษที่ผลิต โดยเชื้อราและแบคทีเรีย)การฉีดสารตัวอย่างตัวอย่างที่ฉีดเข้าไปในคอลัมน์ HPLC นี้ใช้ในการดำเนินการด้วยตนเอง ซึ่งหมายความ ว่า จิตวิญญาณบางอย่างไม่ดีได้นั่ง โดยเครื่อง HPLC ชั่วโมงฉีดแต่ละอย่าง ด้วยเข็มฉีดยา บางครั้งตลอดทั้งคืนโชคดี รุ่นใหม่กว่ามีการอัดอัตโนมัติ ลดการป้อนข้อมูลด้วยตนเอง และช่วยให้อัตราความเร็วสูง เครื่องจักรทันสมัยประกอบ ด้วยซอฟต์แวร์ที่ช่วยให้ผู้ใช้ป้อนรายการของตัวอย่าง จำนวน และลำดับพวกเขาควรฉีด ดังนั้น คุณสามารถเพลิดเพลินกับอาหารกลางวันของคุณ HPLC ของคุณทำงานเองขั้นตอนการเคลื่อนที่นี้เป็นแค่ส่วนผสมของน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์ (acetonitrile ปกติหรือเมทานอล) เฟสเคลื่อนที่ได้รับการตั้งชื่อเนื่องจากมันเคลื่อนผ่านคอลัมน์ และในเวลาเดียวกัน elutes (หรือล้าง) สารประกอบจากคอลัมน์สารประกอบมักจะ eluted ไปพร้อมการไล่ระดับความเข้มข้น ถ้าคุณเป็นอะไรเช่นฉัน ความเข้มข้นและการไล่ระดับสีเป็นคำสองคำที่คุณเกลียดไปดูมาด้วยกันในประโยค มันแค่หมายความ ว่า เปอร์เซ็นต์ของน้ำในขั้นตอนการเคลื่อนลดลง ในขณะที่เปอร์เซ็นต์ของการเพิ่มตัวทำละลายของ apolar พร้อมกัน หมายความ ว่า เฟสเคลื่อนที่ค่อย ๆ กลายเป็น apolar เพิ่มเติม ไม่ต้องกังวลมากเกินไปเกี่ยวกับการไล่ระดับสีสำหรับตอนนี้ จะปรากฏอีกครั้งในบทความติดตามผลHPLC ที่เรียกใช้HPLC สามารถทำได้ในหลายโหมด กลับเฟส (RP-HPLC) เรียกว่าวิธีการที่ใช้มากที่สุด และเป็นสิ่งที่ผมอธิบายนี่ ในโหมดนี้ สารแยกจากกันเริ่มต้น ด้วยสุดขั้ว และลงท้าย ด้วยสาร apolar สำหรับทุกโหมด ปั๊มลังเคลื่อนตัวและการเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ ใช้ทั่วไปสามารถใช้เวลาระหว่าง 10-60 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คอลัมน์ HPLC แห่งนี้เป็นที่รู้จักกันเป็นเฟส นี่คือเทียมของเครื่อง HPLC ที่ถูกสร้างขึ้นมาจากหนึ่งในความหลากหลายของสาร (มักซิลิกา) และมีขนาดเล็กมากในธรรมชาติ อนุภาคซิลิกาจะฟังก์ชันโซ่คาร์บอนยาว โซ่คาร์บอน apolar และดังนั้นจึงนานห่วงโซ่ที่มากขึ้น apolar คอลัมน์กลายเป็น คอลัมน์ที่มีโซ่ 18 คาร์บอนที่ใช้ทั่วไปและเป็นที่รู้จักกันเป็นคอลัมน์ C18. ตัวอย่าง HPLC ประเภทตัวอย่างแตกต่างกันมากขึ้นอยู่กับข้อมูลและชนิดของสารประกอบในคำถาม HPLC สามารถนำมาใช้ในการวิเคราะห์สารตัวอย่างทางชีวภาพ (ปัสสาวะเลือดน้ำลายและกล้ามเนื้อ) ตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อม, ยาเคมี (ยาเสพติด) และจุลชีววิทยา (สารพิษที่ผลิตจากเชื้อราและแบคทีเรีย). ฉีดตัวอย่างตัวอย่างจะถูกฉีดเข้าไปใน HPLC ได้ คอลัมน์. ที่ใช้ในการดำเนินการได้ด้วยตนเองซึ่งหมายความว่าบางจิตวิญญาณที่ไม่ดีได้ไปนั่งด้วยเครื่อง HPLC ได้สำหรับชั่วโมงที่สิ้นสุดฉีดตัวอย่างแต่ละคนมีเข็มฉีดยาบางครั้งตลอดทั้งคืน! โชคดีที่รุ่นใหม่มีหัวฉีดอัตโนมัติ, ลดการป้อนข้อมูลด้วยตนเองและ ช่วยให้ throughput สูง เครื่องจักรที่ทันสมัยมีการติดตั้งซอฟแวร์ที่ช่วยให้ผู้ใช้สามารถป้อนข้อมูลรายการของตัวอย่างเท่าไหร่และในสิ่งที่เพื่อที่พวกเขาควรจะฉีด เพื่อให้คุณสามารถเพลิดเพลินกับอาหารกลางวันของคุณในขณะ HPLC ของคุณทำงานตัวเอง! เฟสมือถือนี้เป็นจริงเพียงแค่ส่วนผสมของน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์ (ปกติ acetonitrile หรือเมทานอล) ก เฟสเคลื่อนที่ได้รับมันชื่อเพราะมันเคลื่อนผ่านคอลัมน์และที่ elutes เวลาเดียวกัน (หรือวูบวาบออก) สารประกอบจากคอลัมน์. สารประกอบมักจะชะพร้อมไล่ระดับความเข้มข้น หากคุณเป็นอะไรที่ชอบก็ความเข้มข้นและการไล่ระดับสีเป็นสองคำที่คุณเกลียดที่จะเห็นมาร่วมกันในประโยค! มันก็หมายความว่าร้อยละของน้ำในเฟสเคลื่อนที่ลดลงเมื่อเวลาผ่านไปในขณะที่ร้อยละของ apolar ตัวทำละลายเพิ่มขึ้นพร้อมกัน ซึ่งหมายความว่าเฟสเคลื่อนที่ค่อยๆกลายเป็น apolar เพิ่มเติม ไม่ต้องกังวลมากเกินไปเกี่ยวกับการไล่ระดับสีสำหรับตอนนี้ที่พวกเขาจะปรากฏตัวอีกครั้งในบทความติดตาม. HPLC ได้ทำงานHPLC สามารถดำเนินการได้ในหลายรูปแบบ วิธีที่ใช้กันมากที่สุดเป็นที่รู้จักกันย้อนกลับเฟส (RP-HPLC) และนี่คือสิ่งที่ผมอธิบายที่นี่ ในโหมดนี้จะถูกแยกสารประกอบที่เริ่มต้นด้วยขั้วมากที่สุดและลงท้ายด้วยสารประกอบ apolar สำหรับทุกโหมดปั๊มสูงขับเคลื่อนเคลื่อนตัวอย่างและเฟสมือถือผ่านคอลัมน์ วิ่งทั่วไปอาจใช้เวลาประมาณ 10-60 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พบคอลัมน์นี้เป็นที่รู้จักกันเป็นเฟสอยู่กับที่ นี่เป็น workhorse ของ HPLC เครื่องจักร จะทำจากความหลากหลายของสารเคมีมักจะซิลิกา ) และมีขนาดเล็กมากในธรรมชาติ ซิลิกาที่มีหมู่ฟังก์ชันโดยคาร์บอนเป็นโซ่ยาว คาร์บอนโซ่ apolar จึงห่วงโซ่ยาว ยิ่ง apolar คอลัมน์เท่านั้น คอลัมน์ที่มี 18 โซ่คาร์บอนมักจะใช้และเป็นที่รู้จักกันเป็นคอลัมน์ c18 .พบตัวอย่างชนิดตัวอย่างแตกต่างกันอย่างมากขึ้นอยู่กับเขตข้อมูลและชนิดของสารประกอบในคำถาม โดยสามารถใช้วิเคราะห์สารประกอบในตัวอย่างทางชีวภาพ ( ปัสสาวะ เลือด น้ำลาย และกล้ามเนื้อ ) , ตัวอย่างสิ่งแวดล้อม , เคมียา ( ยาเสพติด ) และจุลชีววิทยา ( สารพิษที่ผลิตจากเชื้อราและแบคทีเรีย )การฉีดตัวอย่างตัวอย่างจะถูกฉีดเข้าไปใน HPLC คอลัมน์ ใช้นี้จะต้องดำเนินการด้วยตนเอง หมายถึง ว่า บางวิญญาณที่ไม่ดี ต้องนั่ง ด้วยเครื่อง HPLC สำหรับชั่วโมงบนจุดสิ้นสุดการฉีดแต่ละตัวอย่าง มีเข็ม บางครั้งทั้งคืนโชคดีที่รุ่นที่ใหม่กว่ามีหัวฉีดอัตโนมัติ ลดการป้อนข้อมูลด้วยตนเองและให้สูงกว่าอัตรา เครื่องจักรที่ทันสมัยมีการติดตั้งซอฟต์แวร์ที่ช่วยให้ผู้ใช้สามารถใส่รายชื่อตัวอย่างเท่าใดและเพื่อสิ่งที่พวกเขาควรฉีด ดังนั้นคุณสามารถเพลิดเพลินกับอาหารกลางวันของคุณและของคุณในขณะที่วิ่งเอง !ระยะเคลื่อนที่นี้เป็นเพียงส่วนผสมของน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์ ( ปกติไนหรือเมทานอล ) ระยะที่เคลื่อนที่ได้มันชื่อเพราะมันเคลื่อนผ่านคอลัมน์ที่ elutes ในเวลาเดียวกัน ( หรือ flushes ออก ) สารประกอบที่ได้จากคอลัมน์ตัวอย่างสารประกอบมักตามความเข้มข้นของการไล่ระดับสี . ถ้าคุณชอบอะไรฉัน , ความเข้มข้นและการไล่ระดับสีเป็นสองคำที่เธอเกลียดที่จะเห็นมาด้วยกันในประโยค ! มันหมายถึงว่า ค่าของน้ำในเฟสเคลื่อนที่ลดลงตลอดเวลา ในขณะที่ร้อยละของ apolar ละลายเพิ่มขึ้นพร้อมกัน ซึ่งหมายความว่าระยะเคลื่อนที่ค่อยๆกลายเป็น apolar เพิ่มเติม ไม่ต้องกังวลมากเกินไปเกี่ยวกับการไล่ระดับสีในตอนนี้ พวกเขาจะปรากฏอีกครั้งในการติดตามบทความกรัม วิ่งโดยสามารถดำเนินการได้ในหลายโหมด วิธีที่ใช้กันมากที่สุดเรียกว่า reversed-phase ( ๆ ) และนี้คือสิ่งที่ฉันอธิบายที่นี่ ในโหมดนี้จะแยกสารประกอบเริ่มต้นด้วยขั้วโลกมากที่สุดและสิ้นสุดด้วยสารประกอบ apolar . สำหรับทุกโหมด ปั๊มแรงสูงย้ายตัวอย่างและเฟสเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ วิ่งปกติสามารถใช้เวลาระหว่าง 10-60 นาที