The neomycin phosphotransferase (NP

The neomycin phosphotransferase (NPTII) encoded by the selectable marker nptII gene was detected in transgenic guayule. 30 μg total soluble protein (quantified with the Bradford assay) was resolved by 12.5% SDS-PAGE gel, transferred onto nitrocellulose membrane (MDI Membrane Technologies, Bangalore, India), and hybridized with polyclonal anti-NPTII serum (Sigma, St. Louis, USA) raised in goats. The membrane, along with NPTII antibodies at dilution 1:3000, was incubated for 2 h at 4 °C. The blot was further exposed to an appropriate secondary antibody (raised in rabbit and used at dilution 1:3000) (Sigma, St. Louis, USA) coupled to Horse Radish Peroxidase (HRP). To observe the NPTII signal, the blot was developed using DAB tablet (Sigma, St. Louis, USA) according to the manufacturer's instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Phosphotransferase นีโอมัยซิน (NPTII) โดยยีน nptII เครื่องหมายเลือกการเข้ารหัสถูกตรวจพบในถั่วเหลือง guayule 30 μg รวมละลายโปรตีน (quantified กับวิเคราะห์แบรดฟอร์ด) มติ 12.5% SDS หน้าเจ โอนย้ายไปยังเยื่อ nitrocellulose (MDI เทคโนโลยีเมมเบรน บังกาลอร์ อินเดีย), และผสมพันธุ์กับต้าน NPTII polyclonal serum (ซิก St. Louis สหรัฐอเมริกา) ในแพะ เมมเบรน พร้อมแอนตี้ NPTII ที่เจือจาง 1:3000 ถูก incubated สำหรับ h 2 ที่ 4 องศาเซลเซียส คืนในตามีต่อสัมผัสที่เหมาะสมรองแอนติบอดี (ยกในกระต่าย และใช้เจือจาง 1:3000) ควบคู่กับม้าหัวผักกาด Peroxidase (HRP) (ซิก St. Louis สหรัฐอเมริกา) สังเกตสัญญาณ NPTII คืนในตาถูกพัฒนาโดยใช้เม็ดเล็กน้อย (ซิก St. Louis สหรัฐอเมริกา) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

phosphotransferase neomycin (NPTII) เข้ารหัสโดยเครื่องหมายเลือกยีน nptII ถูกตรวจพบใน guayule ดัดแปรพันธุกรรม 30 ไมโครกรัมโปรตีนที่ละลายได้ทั้งหมด (วัดด้วยการทดสอบ Bradford) ได้รับการแก้ไขโดย 12.5%​​ เจล SDS-PAGE, โอนไปยังเมมเบรนไนโตรเซลลูโลส (MDI เมมเบรน Technologies, บังกาลอร์, อินเดีย) ​​และไฮบริดที่มีโพลีเซรั่มต่อต้าน NPTII (ซิกม่าเซนต์หลุยส์ สหรัฐอเมริกา) เติบโตในแพะ เมมเบรนพร้อมกับแอนติบอดี NPTII ที่เจือจาง 1: 3000 ได้รับการบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ดวงที่ได้รับการเปิดเผยต่อไปแอนติบอดีรองที่เหมาะสม (เติบโตในกระต่ายและนำมาใช้ในการลดสัดส่วน 1: 3000) (ซิกม่าเซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) คู่กับม้าหัวไชเท้าเปอร์ออกซิเด (HRP) จะสังเกตเห็นสัญญาณ NPTII, blot ได้รับการพัฒนาโดยใช้แท็บเล็ต DAB (ซิกม่าเซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ phosphotransferase นีโอมัยซิน ( nptii ) เข้ารหัสโดยเลือกเครื่องหมาย nptii ยีนที่ตรวจพบใน guayule พันธุกรรม . 30 μกรัม ( ปริมาณโปรตีนที่ละลายน้ำได้ทั้งหมดด้วย ( Bradford ) ถูกแก้ไขโดย 12.5% เอนไซม์เจล , โอนไปยังไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ( MDI เมมเบรนเทคโนโลยี บังกาลอร์ , อินเดีย ) และโพลีโพรเซรั่มต่อต้าน nptii ( Sigma , เซนต์ หลุยส์ , USA ) เลี้ยงแพะเยื่อ พร้อมกับ nptii แอนติบอดีในการ 1:3000 ถูกบ่ม 2 H 4 ° C เปรอะเปื้อนยังสัมผัสกับแอนติบอดีรองที่เหมาะสม ( เลี้ยงกระต่าย และใช้ในการ 1:3000 ) ( Sigma , เซนต์ หลุยส์ , USA ) คู่กับเอนไซม์มะรุม ( HRP ) สังเกตสัญญาณ nptii , blot ถูกพัฒนาโดยใช้ป้ายแท็บเล็ต ( Sigma , เซนต์ หลุยส์สหรัฐอเมริกา ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต