This article describes a rapid, hig

This article describes a rapid, highly efficient and versatile method for seamlessly assembling
multiple DNA fragments into a vector at any desired position. The inserted fragments
and vector backbone were amplified by high-fidelity PCR containing 20 bp to 50 bp overlapping
regions at 3′ and/or 5′ termini. These linearised fragments were equimolarly mixed,
and then cyclised in a prolonged overlap extension PCR without adding primers. The resulting
PCR products were DNA multimers that could be directly transformed into host strains,
yielding the desired chimeric plasmid. The proposed method was illustrated by constructing
an Escherichia coli co-expression vector. The feasibility of the method in Lactobacillus
was further validated by assembling an E. coli–Lactobacillus shuttle vector. Results showed
that three to four fragments could be simultaneously and precisely inserted in a vector in
only 2–3 days using the proposed method. The acceptable transformation efficiency was
determined through the tested host strains; more than 95% of the colonies were positive
transformants. Therefore, the proposed method is sufficiently competent for highefficiency
insertion of multiple DNA fragments into a plasmid and has theoretically good
application potential for gene cloning and protein expression because it is simple, easy to
implement, flexible and yields highly positive clones

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทความนี้จะอธิบายอย่างรวดเร็วมีประสิทธิภาพสูงและวิธีการที่หลากหลายสำหรับต่อเนื่องประกอบ
ดีเอ็นเอหลายเป็นเวกเตอร์ที่ตำแหน่งที่ต้องการได้ เศษแทรก
และเวกเตอร์กระดูกสันหลังถูกขยายโดยความจงรักภักดีสูง PCR ที่มี 20 bp ถึง 50 bp ทับซ้อน
ภูมิภาคที่ 3 'และ / หรือ 5' ปลายทาง เศษเส้นตรงของเหล่านี้ถูกนำมาผสม equimolarly,
และ cyclised แล้วในการขยายการซ้อนทับกันเป็นเวลานานโดยไม่ต้องเพิ่ม PCR ไพร ส่งผลให้
ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มี multimers ดีเอ็นเอที่สามารถเปลี่ยนโดยตรงในสายพันธุ์เจ้าภาพ
ยอมพลาสมิดลูกผสมที่ต้องการ วิธีที่นำเสนอเป็นภาพโดยการสร้าง
Escherichia coli เวกเตอร์ร่วมแสดงออก ความเป็นไปได้ของวิธีการในแลคโตบาซิลลัส
ได้รับการตรวจสอบต่อไปโดยการประกอบ E. coli เวกเตอร์รถรับส่ง-แลคโตบาซิลลัส ผลการศึกษาพบ
ว่า 3-4 ชิ้นส่วนจะได้รับการพร้อมกันและใส่ได้อย่างแม่นยำในเวกเตอร์ใน
เพียง 2-3 วันโดยใช้วิธีการที่นำเสนอ ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงที่ยอมรับได้รับการ
พิจารณาผ่านการทดสอบสายพันธุ์โฮสต์; มากกว่า 95% ของอาณานิคมเป็นบวก
transformants ดังนั้นวิธีที่นำเสนอมีอำนาจเพียงพอสำหรับ highefficiency
แทรกดีเอ็นเอหลายเป็นพลาสมิดและมีความดีตามหลักวิชา
ที่มีศักยภาพการประยุกต์ใช้สำหรับการโคลนยีนและการแสดงออกของโปรตีนเพราะมันเป็นเรื่องง่ายและง่ายต่อการ
ดำเนินการที่มีความยืดหยุ่นและอัตราผลตอบแทนโคลนบวกสูง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บทความนี้อธิบายอย่างรวดเร็ว มีประสิทธิภาพสูง และหลากหลายวิธีการต่อเนื่องประกอบชิ้นส่วนดีเอ็นเอ
หลายเป็นเวกเตอร์ที่ตำแหน่งที่ต้องการ แทรกเศษ
และเวกเตอร์กระดูกสันหลังถูกขยายโดยวิธี PCR ที่มีความจงรักภักดีสูง 20 BP 50 BP ซ้อน
ภาคที่ 3 ดูแลและ / หรือ 5 นั้น แทร์มินี่ . เศษ linearised เหล่านี้มาผสม equimolarly
,แล้ว cyclised ในซ้อนกันโดยไม่ต้องเพิ่มส่วนขยายจาก PCR ไพรเมอร์ . ผลตรวจดีเอ็นเอ multimers
ผลิตภัณฑ์ที่สามารถแปลงโดยตรงในสายพันธุ์ที่ให้ผลผลิตที่โฮส
ที่ต้องการพลาสมิด วิธีการแสดงการ
เป็นเชื้อ Escherichia coli Co การแสดงออกของเวกเตอร์ ความเป็นไปได้ของวิธีการใน Lactobacillus
ยังตรวจสอบด้วยการประกอบ E . coli และ Lactobacillus รถเวกเตอร์ พบ
ที่สามถึงสี่เศษอาจจะพร้อมกัน และแน่นอนที่แทรกอยู่ในเวกเตอร์ใน
2 – 3 วัน โดยใช้วิธีการที่ได้นำเสนอ ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงที่ยอมรับได้คือ
กำหนดผ่านทดสอบสายพันธุ์ โฮสต์ มากกว่า 95% ของอาณานิคมเป็นพลาสมิดบวก

ดังนั้นวิธีการที่เสนออย่างเชี่ยวชาญสำหรับ highefficiency
แทรกหลายชิ้นส่วนดีเอ็นเอเข้าสู่พลาสมิดและมีทฤษฎีที่ดี
ใบสมัครที่มีศักยภาพสำหรับการโคลนยีนและการแสดงออกของโปรตีน เพราะมันง่าย ง่าย

ใช้ความยืดหยุ่นและผลผลิตโคลนบวกสูง