ig. 2Molecular weight and digestibi

ig. 2Molecular weight and digestibility of fungal DNA prepared with the new method from mycelium grown in submerged culture.
Lanes 2, 7, 12, 17, 22 and 27 show DNA fromN. lolii, A. niger, A. flavus, P. citrinum, F. graminarumandR. nigricanes, respectively, incubated
under the same condition as used for restriction digests, but in the absence of restriction enzymes. Lanes 3–6 show DNA fromN. lolii,
lanes 8–11 DNA from A. niger,lanes 13–16 DNA from A. flavus,lanes 18–21 DNA from P. citrinum,lanes 23–26 DNA from
F. graminarumand lanes 28–31 DNA fromR. nigricanes, cut with EcoRI,HindIII,SalI andBamHI, respectively. Lanes 1 and 32 show
XV (Boehringer Mannheim) molecular weight marker
involved phenol/chloroform extraction of powdered
mycelium in buffer (200 mmol/l Tris-HCl, 250 mmol/l
NaCl, 25 mmol/l EDTA, 0·5% w/v SDS pH 8·5) and the
method of Byrd et al., (1990) which involved phenol/chloroform extraction of the supernatant following proteinase K treatment of powdered mycelium in buffer
(50 mmol/l Tris-HCl, 150 mmol/l EDTA, 1% w/v sodium
lauryl sarcosine pH 8·0).

Determination of DNA yield
DNA was determined by a fluorometric assay, using Hoechst
dye 33258 (Brunket al. 1979) and a TKO 100 Mini Fluorometer (Hoeffer).

Digestion with restriction enzymes
Each digestion (1 h at 37 °C) contained, in a total volume of
20ml, 1–2mg DNA, 1mg bovine serum albumin, 20 U of
restriction enzyme and 2ml of the 10×buffer supplied with
the enzyme (Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany).
To assess autodegradation of DNA, a DNA sample was also
incubated under the same conditions but in the absence of
restriction enzyme. The entire digest was loaded onto a 0·5%
w/v agarose gel containing TBE buffer (89 mmol/l Tris,
89 mmol/l boric acid, 2·5 mmol/l EDTA pH 8·3) and electrophoresis performed at 1·0 V cm
−1
for 20 h at 22 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ig 2Molecular น้ำหนักและ digestibility เอ็นเชื้อราด้วยวิธีการใหม่จาก mycelium ที่เติบโตในวัฒนธรรมที่น้ำท่วมถนนหนทางที่ 2, 7, 12, 17, 22 และ 27 แสดง fromN ดีเอ็นเอ lolii, A. ไนเจอร์ A. flavus, P. citrinum, F. graminarumandR nigricanes ตามลำดับ incubatedเดียวกันภายใต้เงื่อนไขที่ใช้ สำหรับจำกัด digests แต่ของเอนไซม์จำกัด ถนนหนทาง 3-6 แสดง fromN ดีเอ็นเอ loliiถนนหนทางดีเอ็นเอ 8 – 11 จากอ.ไนเจอร์ ถนนหนทางดีเอ็นเอ 13-16 จาก A. flavus ดีเอ็นเอ 18-21 ถนนหนทางจาก P. citrinum ดีเอ็นเอ 23-26 ถนนหนทางจากF. graminarumand 28 – 31 ถนนหนทางดีเอ็นเอ fromR nigricanes ตัด ด้วย EcoRI, HindIII, andBamHI สลี่ ตามลำดับ 1 ถนนหนทางและแสดง 32XV (มันน์ไฮม์ Boehringer) น้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายผงสกัดวางเกี่ยวข้องคลอโรฟอร์มmycelium ในบัฟเฟอร์ (200 mmol/l ตรี-HCl, 250 mmol/lNaCl, 25 EDTA mmol/l, 0·5% w/v SDS ค่า pH 8·5) และวิธีของ Byrd et al., (1990) ซึ่งเกี่ยวข้องกับการสกัดวาง/คลอโรฟอร์มรักษา proteinase K ต่อ supernatant ของ mycelium ผงในบัฟเฟอร์(50 mmol/l ทริสเรทติ้ง HCl, 150 mmol/l EDTA, 1% w/v โซเดียมlauryl sarcosine pH 8·0)กำหนดผลผลิตดีเอ็นเอดีเอ็นเอถูกกำหนด โดยวิเคราะห์ fluorometric ใช้อย่างไร Hoechstย้อม 33258 (Brunket al. 1979) และแบบ TKO 100 มินิ Fluorometer (Hoeffer)ย่อยอาหาร ด้วยเอนไซม์จำกัดแต่ละย่อยอาหาร (1 h ที่ 37 ° C) มีอยู่ ปริมาณรวมของ20ml, 1 – 2mg DNA มิลลิกรัม 1 วัว serum albumin, 20 U ของเอนไซม์จำกัดและ 2ml ของบัฟเฟอร์ 10 ซื้อมาด้วยเอนไซม์ (Boehringer มา มา เยอรมนี)การประเมิน autodegradation ของดีเอ็นเอ ตัวอย่างดีเอ็นเอยังเป็นincubated ภาย ใต้เงื่อนไขเดียวกัน แต่ในกรณีเอนไซม์จำกัด แยกย่อยทั้งหมดถูกโหลดลง 0·5%w/v agarose เจมี TBE บัฟเฟอร์ (89 mmol/l ตรีกรด boric mmol/l 89, EDTA 2·5 mmol/l ค่า pH 8·3) และ electrophoresis ทำที่ซม 1·0 V−1สำหรับ h 20 ที่ 22 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ig น้ำหนัก 2Molecular และการย่อยได้ของดีเอ็นเอของเชื้อราที่ปรุงด้วยวิธีการใหม่จากเส้นใยเจริญเติบโตในวัฒนธรรมจมอยู่ใต้น้ำ.
Lanes 2, 7, 12, 17, 22 และ 27 แสดงดีเอ็นเอ fromN lolii ไนเจอร์เอ flavus เอพี citrinum เอฟ graminarumandR nigricanes ตามลำดับบ่ม
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกับที่ใช้ในการย่อยสลายข้อ จำกัด แต่ในกรณีที่ไม่มีข้อ จำกัด ของเอนไซม์ เลน 3-6 แสดงดีเอ็นเอ fromN lolii,
เลน 8-11 ดีเอ็นเอจากไนเจอร์เอเลน 13-16 ดีเอ็นเอจาก A. flavus เลน 18-21 ดีเอ็นเอจากพี citrinum เลน 23-26 ดีเอ็นเอจาก
เอฟ เลน graminarumand 28-31 ดีเอ็นเอ fromR nigricanes ตัดกับ EcoRI, HindIII, สาลี่ andBamHI ตามลำดับ ช่องทางที่ 1 และ 32 แสดง
XV (Boehringer Mannheim) เครื่องหมายน้ำหนักโมเลกุล
ที่เกี่ยวข้องกับฟีนอล / สกัดคลอโรฟอร์มของผง
เส้นใยในบัฟเฟอร์ (200 มิลลิโมล / ลิตร Tris-HCl 250 มิลลิโมล / ลิตร
โซเดียมคลอไรด์ 25 มิลลิโมล / ลิตร EDTA, 0 · 5% w / วีพีเอช SDS 8 · 5) และ
วิธีการของเบิร์ด et al. (1990) ที่เกี่ยวข้องกับการฟีนอล / สกัดคลอโรฟอร์มของสารละลายต่อไปนี้โปรรักษา K ของเส้นใยผงในบัฟเฟอร์
(50 มิลลิโมล / ลิตร Tris-HCl 150 มิลลิโมล / ลิตร EDTA, 1% w / v โซเดียม
lauryl sarcosine ค่า pH 8 · 0). การกำหนดผลผลิตดีเอ็นเอดีเอ็นเอถูกกำหนดโดยการทดสอบฟลูออโรโดยใช้ Hoechst ย้อม 33258 (Brunket al. 1979) และ TKO 100 มินิ fluorometer (Hoeffer). การย่อยอาหารด้วย ข้อ จำกัด เอนไซม์ย่อยอาหารแต่ละ (1 ชั่วโมงที่ 37 ° C) ที่มีอยู่ในปริมาณรวมของ20ml ดีเอ็นเอ 1-2mg, ซีรั่มอัลบูมิวัว 1mg 20 U ของเอนไซม์ จำกัด และ 2ml 10 ×บัฟเฟอร์มาพร้อมกับเอนไซม์ (Boehringer Mannheim , ไฮม์, เยอรมนี). เพื่อประเมิน autodegradation ของดีเอ็นเอตัวอย่างดีเอ็นเอก็บ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน แต่ในกรณีที่ไม่มีเอนไซม์ จำกัด ย่อยทั้งหมดถูกโหลดลง 0 · 5% w / v agarose เจลที่มีบัฟเฟอร์ TBE (89 มิลลิโมล / ลิตร Tris, 89 มิลลิโมล / ลิตรกรดบอริก, 2 · 5 มิลลิโมล / ลิตรค่า pH EDTA 8 · 3) และอิเล็กดำเนินการวันที่ 1 · 0 V ซม. -1 เป็นเวลา 20 ชั่วโมงที่ 22 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

IG . 2molecular น้ำหนักและการย่อยได้ของราดีเอ็นเอด้วยวิธีใหม่จากเส้นใยเพาะจม
เลน 2 , 7 , 12 , 17 , 22 และ 27 แสดงดีเอ็นเอ fromn . lolii , A . niger , A . flavus , หน้า citrinum , F . graminarumandr . nigricanes ตามลำดับบ่ม
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกับที่ใช้ในการย่อยสลาย แต่ในกรณีที่ไม่มีเอนไซม์ . เลน 3 – 6 แสดงดีเอ็นเอ fromn .lolii
เลน , 8 – 11 ดีเอ็นเอจาก A . niger , เลน 13 – 16 ดีเอ็นเอจาก A . flavus , เลนส์ 18 – 21 ดีเอ็นเอจากหน้า citrinum เส้นทาง 23 – 26 ดีเอ็นเอจาก
F . graminarumand เลน 28 31 ดีเอ็นเอ fromr . nigricanes ตัดด้วย - , , andbamhi สาลี่ ตามลำดับ เลน 1 และ 32
XV ( Boehringer Mannheim ) แสดงเครื่องหมายโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับฟีนอล /
คลอโรฟอร์มสกัดผง
เส้นใยในบัฟเฟอร์ ( 200 mmol / L หรือ HCl ,250 มิลลิโมล / ลิตร
ขนาด 25 มิลลิโมล / ลิตร EDTA , 0 ด้วย 5 % W / V SDS pH 8 ด้วย 5 ) และ
วิธีเบิร์ด et al . , ( 1990 ) ซึ่งเกี่ยวข้องกับฟีนอล / คลอโรฟอร์มการสกัดนำต่อไปนี้การรักษา K โปรตีนผงเส้นใยในบัฟเฟอร์
( 50 มิลลิโมล / ลิตรทั้งนี้ HCL 150 มิลลิโมล / ลิตร EDTA , 1% w / v โซเดียมลอริลซาร์โคซีนด้วย pH 8
0 )

หาดีเอ็นเอดีเอ็นเอผลผลิต
ถูกกำหนดโดย fluorometric assay โดยใช้ Hoechst
สี 33258 ( brunket อัล 1979 ) และทีเคโอ 100 มินิ ฟลู โรมิเตอร์ ( hoeffer ) .

ตัดด้วยเอนไซม์ในการย่อยอาหาร (
1 H ที่ 37 ° C ) ที่มีอยู่ในปริมาตรรวมของ
หลอด ดีเอ็นเอ Nicotinell 1 – 1mg , อัลบูมิน 20
U ของเอนไซม์จำกัด 2ml ของ 10 ×และบัฟเฟอร์ให้กับ
เอนไซม์ ( Boehringer Mannheim Mannheim , เยอรมนี )
3 autodegradation ของดีเอ็นเอ , DNA ยัง
โดยภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน แต่ในกรณีที่ไม่มี
เอนไซม์จำกัด . ที่ย่อยทั้งหมดถูกโหลดลงด้วย 5 %
0 W / V เจลที่มีทีบีบัฟเฟอร์ ( 89 mmol / L นอกจากนี้
89 มิลลิโมล / ลิตรกรดบอริก 2 ด้วย 5 mmol / L ตามลำดับพีเอช 8 ด้วยวิธีที่ 1 และ 3 ) แสดงด้วย 0 V − 1 cm

20 H ที่ 22 องศา