Primers used were as described prev

Primers used were as described previously [14,15]. PCR was performed in a 25 μl reaction mixture containing 1× PCR buffer, 1 U Taq polymerase (Invitrogen Corporation), 20 ng of each primer pair, 1.5 mmol/l MgCl2, 200 μmol/l each dNTP and 50 ng of DNA template.
PCR thermocycling (conducted in TProfessional standard thermocycler; Biometra GmbH) conditions were as follows: 95 °C for 5 min; 35 cycles of 95 °C for 60 s, 56–62 °C (depending on Tm of the primer pair) for 45 s and 72 °C for 45 s; and a final step of 72 °C for 5 min.
Then 5 μl aliquots of the amplicons were digested with 5 U of the appropriate restriction endonuclease in a 10 μl reaction volume at 37 °C for 3 h. A 5 μl aliquot from each of the reaction mixture was analyzed by 3% agarose gel-electrophoresis, and the DNA fragments were stained with ethidium bromide and visualized under UV light.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไพรเมอร์ที่ใช้ได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [14,15] ทำ PCR ในปฏิกิริยา 25 μl ที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ PCR × 1, 1 U Taq พอลิเมอเรส (Invitrogen Corporation), 20 ฉบับของแต่ละคู่ไพรเมอร์ 1.5 mmol/l MgCl2, 200 ไมโครโมล/ลิตรละ dNTP และ 50 ฉบับของดีเอ็นเอแม่แบบ เทอร์โม゚ PCR (ดำเนินการใน TProfessional มาตรฐาน thermocycler Biometra GmbH) เงื่อนไขมีดังนี้: 95 ° C เป็นเวลา 5 นาที รอบ 35 95 ° c 60 s, 56-62 ° C (ขึ้นอยู่กับ Tm ของคู่ไพรเมอร์) สำหรับ s และ 72 ° C สำหรับ 45 45 s และขั้นสุดท้ายของ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที แล้ว 5 aliquots μl ของ amplicons ถูกย่อยสลาย ด้วย 5 U ของ endonuclease จำกัดที่เหมาะสมในโวลุ่มปฏิกิริยา μl 10 ที่ 37 ° C เป็นเวลา 3 ชม Μl 5 ทั้งจากของผสมปฏิกิริยาถูกวิเคราะห์ โดย 3% agarose เจอิ และชิ้นส่วนดีเอ็นเอถูกย้อม ด้วยโบรไมด์ ethidium ดู และภายใต้แสงยูวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไพรเมอร์ที่ใช้ถูกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [14,15] PCR ที่ได้ดำเนินการใน 25 ไมโครลิตรผสมปฏิกิริยาที่มี 1 ×บัฟเฟอร์ PCR 1 U Taq โพลิเมอร์ (Invitrogen คอร์ปอเรชั่น) 20 NG ของแต่ละคู่ไพรเมอร์ 1.5 มิลลิโมล / ลิตร MgCl2 200 ไมโครโมล / ลิตรแต่ละ dNTP และ 50 NG ของแม่แบบดีเอ็นเอ
PCR thermocycling (ดำเนินการใน TProfessional thermocycler มาตรฐาน Biometra GmbH) เงื่อนไขมีดังนี้ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที; 35 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 วินาที, 56-62 ° C (ขึ้นอยู่กับ Tm คู่ไพรเมอร์) 45 และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 วินาที และขั้นตอนสุดท้ายของ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที.
แล้ว 5 aliquots ไมโครลิตรของ amplicons ถูกย่อยด้วย 5 U ของ endonuclease ข้อ จำกัด ที่เหมาะสมในปริมาณ 10 ไมโครลิตรปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชั่วโมง หาร 5 ไมโครลิตรจากแต่ละผสมปฏิกิริยาถูกวิเคราะห์โดย 3% agarose เจลอิเลคและชิ้นส่วนดีเอ็นเอถูกย้อมด้วย ethidium bromide และมองเห็นภายใต้แสงยูวี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไพรเมอร์ใช้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 14,15 ] ร่วมแสดงใน 25 μ L ปฏิกิริยาผสมที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ PCR 1 × 1 วูทัค Polymerase ( Invitrogen Corporation ) 20 นาโนแต่ละ primer คู่ 1.5 mmol / L ชุด 200 μ mol / L แต่ละ dntp และ 50 ของแม่แบบดีเอ็นเอ( 1 ) ผื่นแดงใน tprofessional มาตรฐานเทอร์มอไซเคล ์ ; biometra GmbH ) เงื่อนไขดังนี้ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาที ; 35 รอบ 95 องศา C นาน 60 วินาที , 56 และ 62 องศา C ( ขึ้นอยู่กับ TM ของไพรเมอร์คู่ ) 45 และ 72 ° C เป็นเวลา 45 วินาที และขั้นตอนสุดท้ายของ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาทีแล้ว 5 μผมเฉยๆของ amplicons ถูกย่อยด้วย 5 U ของเอนโดนิวคลีเอสจำกัดที่เหมาะสมใน 10 μปฏิกิริยาปริมาณที่ 37 ° C ชั้น 3 ซ. 5 μ L ส่วนลงตัวจากแต่ละปฏิกิริยาผสมโดยใช้ 3 % ( gel electrophoresis และย้อมด้วยคู่ดีเอ็นเอเป็นโบรไมด์และมองเห็นภายใต้ แสงยูวี