2.4. Enzyme activitiesSoluble inver

2.4. Enzyme activities
Soluble invertase activity (acid and alkaline) was extracted from
flavedo and albedo tissues according to Rosa et al. (2004) procedure.
Briefly, 1.5 g FW of powdered tissue was homogenised in a chilled
mortar and pestle with 5ml of 50mM sodium phosphate buffer
(pH 7.5) containing 5M MnSO4 and 1mM 2-mercaptoethanol.
The homogenate was centrifuged at 12,000×g for 15 min and the
pellet used as source of cell wall-bound invertase. The resulting
supernatant was precipitated with solid ammonium sulphate up
to 100% saturation. After stirring for 10 min, the solution was centrifuged
at 12,000×g for 15 min and the supernatant discarded.
The precipitate was resuspended in 10mM sodium acetate buffer
(pH 5.5) containing 1mM 2-mercaptoethanol and dialyzed during
60 min against two changes of the same buffer to provide
the soluble enzyme extract. Because of the extraction buffer did
not contain chelating agents, high salt concentrations or detergent
substances, the probability of extracting cell wall-bound invertase
activity is very low. Cell wall-bound invertase was obtained
by washing the remaining pellet five times with 10mM sodium
acetate buffer (pH 5.5) containing 1mM 2-mercaptoethanol. After
centrifugation at 12,000×g for 15 min the pellet was resuspended
in 10mM sodium acetate buffer (pH 5.5) containing 1mM 2-
mercaptoethanol and dialyzed during 3 h against two changes
of the same buffer to provide cell wall-bound invertase. To solubilise
cell wall-bound invertase, the cell wall preparation was
treated successively with the following extracting solutions: (a)
0.2M sodium phosphate buffer (pH 7.5) containing 1M NaCl and
1mM2-mercaptoethanol; (b) 0.2Msodium phosphate/sodium citrate
buffer (pH 8.5) containing 1mM2-mercaptoethanol; (c) 0.2M
sodium phosphate/sodium citrate buffer (pH 8.5) containing 1M
NaCl, 30mMEDTA, and 1mM2-mercaptoethanol; (d) 0.2Msodium
borate buffer (pH 8.5) containing 1mM 2-mercaptoethanol; (e)
Tween 20, 4% solution. Briefly, the cell wall suspension was centrifuged
at 3000×g for 10 min and resuspended for 30 min in each
extracting solution. After the last treatment, the cell wall suspension
was centrifuged at 3000×g for 10 min and the resulting pellet

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 กิจกรรมของเอนไซม์กิจกรรม invertase ละลายน้ำ (กรด และด่าง) ที่สกัดจากเนื้อเยื่อ albedo และ flavedo ตามขั้นตอนโรและ al. (2004)สั้น ๆ 1.5 g FW ของผงเนื้อเยื่อถูก homogenised ในที่เย็นโกร่งกับ 5ml 50mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์(pH 7.5) มี 5 เมตร MnSO4 และ 1 มม. 2-mercaptoethanolHomogenate ถูก centrifuged ที่ 12, 000 ซื้อ g สำหรับ 15 นาทีและเม็ดที่ใช้เป็นแหล่งของ invertase ผูกกับผนังเซลล์ การส่งผลsupernatant ถูกตกตะกอน ด้วยซัลเฟตแอมโมเนียแข็งค่าเพื่อความเข้ม 100% หลังจากกวนสำหรับ 10 นาที โซลูชัน centrifugedที่ 12, 000 ซื้อ g 15 นาทีและ supernatant ที่ละทิ้งPrecipitate ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม 10 มม.(pH 5.5) ประกอบด้วย 1 มม. 2-mercaptoethanol และ dialyzed ในระหว่าง60 นาทีกับสองการเปลี่ยนแปลงของบัฟเฟอร์เดียวกันเพื่อให้สารสกัดจากเอนไซม์ละลายน้ำ เนื่องจากสกัด บัฟเฟอร์ได้ไม่ประกอบด้วยตัวแทน chelating ความเข้มข้นของเกลือสูง หรือผงซักฟอกสาร ความน่าเป็นการสกัดผนังเซลล์ผูก invertaseกิจกรรมมีน้อยมาก ผนังเซลล์ผูก invertase กล่าวโดยซักเม็ดเหลือห้าครั้งกับโซเดียม 10 มม.acetate บัฟเฟอร์ (pH 5.5) มี 1 มม. 2-mercaptoethanol หลังจากcentrifugation ที่ 12, 000 ซื้อ g สำหรับ 15 นาทีเม็ดถูก resuspendedใน 10 มม.โซเดียม acetate บัฟเฟอร์ (pH 5.5) ประกอบด้วย 1 มม. 2 -mercaptoethanol และ dialyzed ระหว่าง h 3 การเปลี่ยนแปลงที่สองบัฟเฟอร์ที่เดียวให้ invertase ผูกกับผนังเซลล์ การ solubiliseถูกเตรียมผนังเซลล์ผนังเซลล์ผูก invertaseถือว่าติด ๆ กัน ด้วยโซลูชั่นการขยายต่อไปนี้: (a)0.2 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.5) ประกอบด้วย 1 M NaCl และ2 มม. 1-mercaptoethanol (b) 0.2Msodium ฟอสเฟต/โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 8.5) มี 1 มม. 2-mercaptoethanol (ค) 0.2Mโซเดียมฟอสเฟต/โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 8.5) ประกอบด้วย 1 เมตรNaCl, 30mMEDTA และ 1 มม. 2-mercaptoethanol (d) 0.2Msodiumborate บัฟเฟอร์ (pH 8.5) มี 1 มม. 2-mercaptoethanol (e)Tween 20 โซลูชัน 4% สั้น ๆ centrifuged การแขวนผนังเซลล์ที่ 3000 × g สำหรับ 10 นาที และ resuspended สำหรับ 30 นาทีในแต่ละแยกโซลูชั่น หลังการรักษาครั้งสุดท้าย แขวนผนังเซลล์มี centrifuged ที่ 3000 × g 10 นาทีและเม็ดได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 กิจกรรมของเอนไซม์กิจกรรม invertase ที่ละลายน้ำได้ (กรดและด่าง) ถูกสกัดจากเนื้อเยื่อflavedo และอัลเบโด้ตาม Rosa, et al (2004) ขั้นตอน. สั้น ๆ 1.5 กรัม FW ของเนื้อเยื่อผงถูก homogenised ในแช่เย็นครกและสากกับ5ml ของโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 50mm (pH 7.5) ที่มี 5? M MnSO4 และ 1 mM 2 mercaptoethanol. homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 × กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและเม็ดใช้เป็นแหล่งที่มาของเซลล์อินเวอร์ผูกพันผนัง ส่งผลให้ใสได้รับการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่มั่นคงขึ้นอิ่มตัว100% หลังจากที่กวนเป็นเวลา 10 นาที, การแก้ปัญหาที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่กรัม 12,000 × 15 นาทีและใสทิ้ง. ตะกอนที่ถูก resuspended ใน 10 mM โซเดียมบัฟเฟอร์อะซิเตท(pH 5.5) ที่มี 1 mM 2 mercaptoethanol และ dialyzed ในช่วง60 นาทีกับสองการเปลี่ยนแปลงของ บัฟเฟอร์เดียวกันเพื่อให้สารสกัดเอนไซม์ที่ละลายน้ำได้ เพราะของบัฟเฟอร์สกัดการไม่ได้มีตัวแทนคีเลต, ความเข้มข้นของเกลือสูงหรือผงซักฟอกสารน่าจะเป็นของการสกัดอินเวอร์ผูกพันผนังเซลล์กิจกรรมอยู่ในระดับต่ำมาก อินเวอร์เซลล์ผูกพันผนังที่ได้รับโดยการล้างเม็ดที่เหลืออีกห้าครั้งด้วยโซเดียม 10 mM บัฟเฟอร์อะซิเตท (pH 5.5) ที่มี 1 mM 2 mercaptoethanol หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 กรัม× 15 นาทีเม็ดที่ถูก resuspended ใน 10 mM โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (pH 5.5) ที่มี 1 mM 2- mercaptoethanol และ dialyzed ในช่วง 3 ชั่วโมงกับสองการเปลี่ยนแปลงของบัฟเฟอร์เดียวกันเพื่อให้เซลล์อินเวอร์ผูกพันผนัง เพื่อ solubilise เซลล์อินเวอร์ผูกพันผนังเตรียมผนังเซลล์ได้รับการรักษาอย่างต่อเนื่องต่อไปนี้การแก้ปัญหาการสกัด (ก) โซเดียม 0.2M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.5) ที่มีโซเดียมคลอไรด์และ 1M 1mM2-mercaptoethanol; (ข) ฟอสเฟต 0.2Msodium / โซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์(pH 8.5) ที่มี 1mM2-mercaptoethanol; (ค) 0.2M โซเดียมฟอสเฟต / โซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ (pH 8.5) ที่มี 1M โซเดียมคลอไรด์, 30mMEDTA และ 1mM2-mercaptoethanol; (ง) 0.2Msodium บัฟเฟอร์ borate (pH 8.5) ที่มี 1 mM 2 mercaptoethanol; (จ) Tween 20, การแก้ปัญหา 4% สั้น ๆ , ระงับผนังเซลล์ถูกหมุนเหวี่ยงที่3000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและ resuspended เป็นเวลา 30 นาทีในแต่ละวิธีการแก้ปัญหาการสกัด หลังจากการรักษาที่ผ่านมาระงับผนังเซลล์ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและส่งผลให้เม็ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . กิจกรรมต่างๆกิจกรรมละลายเอนไซม์อินเวอร์เทส
( กรดและด่าง ) สกัดจาก
ฟลาเวโดและเนื้อเยื่อผู้ทรยศตาม Rosa et al . ( 2547 ) ขั้นตอน .
สั้น 1.5 g FW ของผง homogenised ในเนื้อเยื่อแช่เย็น
ครกและสาก กับ ก 50 มม. โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.5 )
5 M และ  ที่มี mnso4 1mm อย่างเดียว .
แยกเป็นระดับที่ 12000 × G 15 นาทีและ
เม็ดใช้เป็นแหล่งของผนังเซลล์ผูกพันพัลวันพัลเก . ที่เกิดมาตกตะกอนด้วยแอมโมเนียม ซัลเฟตสูง

100 % ความเข้มแข็งขึ้น . หลังจากกวน 10 นาที ในสารละลายไฟฟ้า
ที่ 12 × G 15 นาทีและนำทิ้ง
ที่ถูก resuspended ใน 10mm โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์
( pH 55 ) ที่มีและ 1mm อย่างเดียวผ่านระหว่าง
60 นาทีกับสองการเปลี่ยนแปลงของบัฟเฟอร์เดียวกันเพื่อให้
ละลายเอนไซม์สกัดเข้มข้น เพราะบัฟเฟอร์สกัดทำ
ไม่ประกอบด้วยสารคีเลต ปริมาณเกลือสูงหรือผงซักฟอก
สาร ความน่าจะเป็นของการแยกผนังเซลล์ผูกพันพัลวันพัลเก
กิจกรรมต่ำมาก เซลล์ผนังเย็นได้
ผูกพัน