Antimicrobial activity using well d

Antimicrobial activity using well diffusion agar
assay (WDAA) and adherence assay
Potential probiotic strains were tested for their
antagonistic activity using the well diff usion agar
assay (WDAA) (4) against 3 target strains: V.
parahaemolyticus ATCC17802, V. alginolyticus
ATCC17749, and V. alginolyticus (IFL) (12).
Pathogenic bacterial strains were grown in 10 mL
of nutrient broth and cultured for 24 h on nutrient
agar at 30 °C. Th e colonies from pure culture were
suspended in 10 mL of physiological medium and
well mixed for 5 min, and 1 mL of this was spread
over the Mueller-Hinton agar (MHA) plates and
incubated for 30 min at 37 °C. Previously isolated
Bacillus strains were incubated in marine broth (24
h, 30 °C) and incorporated into pour plates. Wells
were cut into the agar and fi lled with 100 μL of the
marine broth isolate. The presence of antimicrobial
metabolites produced by the isolate inhibited
the growth of the pathogen, producing a zone of
inhibition around the well (4).
The adhesion ability of Bacillus strains grown in
Trypticase soy broth (TSB, Bio-Rad, France) was
determined using a semiquantitative adherence assay
on 96-well tissue culture plates (Nunc, Roskilde,
Denmark), as described previously (13,14). Briefl y,
following overnight incubation at 37 °C, the optical
density at 595 nm (OD595) of the bacteria was
measured. An overnight culture grown in TSB at
37 °C was diluted to 1:100 in TSB with 2% (w/v)
glucose. A total of 200 μL of these cell suspensions
were transferred to a U-bottomed 96-well microtiter
plate (Nunc). Each strain was tested in triplicate. The
plates were incubated aerobically at 37 °C for 24 h.
The cultures were removed, and the microtiter wells
were washed twice with phosphate-buff ered saline
(PBS) (7 mmol/L Na2HPO4, 3 mmol/L NaH2PO4,

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ดีโดยใช้อาหารเลี้ยงเชื้อแพร่ทดสอบ (WDAA) และการทดสอบการยึดมั่นในสายพันธุ์โปรไบโอติกที่อาจเกิดขึ้นได้มีการทดสอบของพวกเขาสำหรับกิจกรรมปฏิปักษ์ใช้usion ต่างกันวุ้นทดสอบ(WDAA) (4) กับ 3 สายพันธุ์เป้าหมาย: V. parahaemolyticus ATCC17802, V. alginolyticus ATCC17749, โวลต์และ alginolyticus (IFL) (12). สายพันธุ์แบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคได้รับการปลูกใน 10 มิลลิลิตรของน้ำซุปและสารอาหารเพาะเลี้ยงเป็นเวลา24 ชั่วโมงในสารอาหารเลี้ยงเชื้อที่อุณหภูมิ30 องศาเซลเซียส อาณานิคมจ Th จากเชื้อบริสุทธิ์ที่ถูกระงับใน 10 มิลลิลิตรของสื่อทางสรีรวิทยาและผสมกันเป็นเวลา5 นาทีและ 1 มิลลิลิตรนี้ถูกแพร่กระจายในช่วงMueller-Hinton agar (หมา) จานและบ่มเป็นเวลา30 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ก่อนหน้านี้ที่แยกสายพันธุ์ Bacillus ถูกบ่มในน้ำซุปทะเล (24 ชั่วโมง 30 ° C) และรวมอยู่ในเทแผ่น เวลส์ถูกตัดลงไปในอาหารเลี้ยงเชื้อและสาย lled 100 ไมโครลิตรของแยกน้ำซุปทะเล การปรากฏตัวของยาต้านจุลชีพสารที่ผลิตโดยแยกยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรค, การผลิตโซนของการยับยั้งรอบเดียว (4). ความสามารถในการยึดเกาะของสายพันธุ์ Bacillus ปลูกในTrypticase น้ำซุปถั่วเหลือง (TSB, Bio-Rad ฝรั่งเศส) ถูกกำหนดโดยใช้การวิเคราะห์เชิงกึ่งปริมาณการยึดมั่นใน 96 หลุมจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ (Nunc, กิลด์, เดนมาร์ก) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (13,14) Briefl Y, ต่อไปในชั่วข้ามคืนบ่มที่ 37 ° C, แสงความหนาแน่นที่595 นาโนเมตร (OD595) ของแบคทีเรียที่ถูกวัด วัฒนธรรมค้างคืนที่ปลูกใน TSB ที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียสถูกเจือจาง 1: 100 ใน TSB มี 2% (w / v) น้ำตาลกลูโคส รวม 200 ไมโครลิตรของสารแขวนลอยเซลล์เหล่านี้ถูกโอนไปยังU-ต่ำสุด 96 หลุมไมโครแผ่น(Nunc) แต่ละสายพันธุ์ได้รับการทดสอบในเพิ่มขึ้นสามเท่า แผ่นถูกบ่มออกซิเจนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง. วัฒนธรรมถูกถอดออกและบ่อไมโครถูกล้างครั้งที่สองที่มีฟอสเฟตหนัง ered น้ำเกลือ (พีบีเอส) (7 มิลลิโมล / ลิตร Na2HPO4 3 มิลลิโมล / ลิตร NaH2PO4,

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ใช้คือ agar
assay ( wdaa ) และการทดสอบศักยภาพโปรไบโอติกสายพันธุ์
ทดสอบพันธุกรรมของพวกเขา
ใช้ดี Diff usion วุ้น
assay ( wdaa ) ( 4 ) กับ 3 เป้าหมายสายพันธุ์ : V .

atcc17749 ต้ atcc17802 , V . alginolyticus , V . alginolyticus ( IFL ) ( 12 )
เชื้อโรคแบคทีเรียเติบโตใน 10 ml
ของน้ำสารอาหารและเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อยู่บน NUMB3RS
ที่ 30 องศา จากวัฒนธรรมบริสุทธิ์เป็นอาณานิคม TH E
แขวนลอยใน 10 มิลลิลิตรทางสรีรวิทยาขนาดกลางและ
ผสมเป็นเวลา 5 นาทีและ 1 มิลลิลิตรนี้แพร่กระจาย
เหนือมุลเลอร์ ฮินตัน ( MHA ) และแผ่น
บ่ม 30 นาทีที่ 37 องศา แยก
ก่อนหน้านี้ Bacillus สายพันธุ์ เลี้ยงในน้ำซุปทะเล ( 30 ° C 24
, h ) และรวมอยู่ในเทใส่จานบ่อ
ถูกตัดเป็นวุ้นและ Fi ฆ่า 100 μ l
ซุปทะเลแยก . การปรากฏตัวของสารต้านจุลชีพที่ผลิตโดยแยก

ยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรค สร้างโซนของ
ยับยั้งรอบดี ( 4 ) .
การความสามารถของ Bacillus สายพันธุ์ที่ปลูกใน
trypticase ซุปถั่วเหลือง ( TSB ชีวภาพราด , ฝรั่งเศส ) ถูกกำหนดใช้ในการทดสอบย้อนหลัง

ในจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ( 96 ดีขณะนี้ , Roskilde , เดนมาร์ก ,
) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 13,14 ) ย่อ Y ,
ต่อไปนี้คืนบ่มที่ 37 ° C , Optical
ความหนาแน่นที่ 595 nm ( od595 ) ของแบคทีเรีย
วัด วัฒนธรรมที่ค้างคืนที่ปลูกใน TSB 37 ° C
เจือจาง 100 ใน TSB 2 % ( w / v )
กลูโคส รวม 200 μแขวนลอยเซลล์เหล่านี้
l ของถูกย้ายไป u-bottomed 96 ดีไมโคร
จาน ( ขณะนี้ ) แต่ละสายพันธุ์ถูกทดสอบทั้งสามใบ
แผ่นถูกบ่มที่ 37 ° C aerobically 24 H .
วัฒนธรรมถูกเอาออก และหลุมบ่อ
ถูกล้างสองครั้งกับควายเรด เกลือฟอสเฟต
( PBS ) ( 7 mmol / L na2hpo4 3 nah2po4 มิลลิโมล / ลิตร ,