2.6.2. Toluidine blue stainingDepar

2.6.2. Toluidine blue staining
Deparaffinized dehydrated sections were stained in a fresh solution
of toluidine blue (final concentration 0.1%) for 20 min. Slides
were washed several times in water and then dried overnight.
Sections were dehydrated in 96% ethanol, subsequently cleared in
xylene and mounted in Permount medium under cover glass.
3. Results and discussion
3.1. Effect of microbial challenge on the change in number of
bacteria in the coelomic cavity and the gut
Earthworms were kept on moist paper towels for a period of
three days to minimize the number of microorganisms in the
coelom and to empty the gut. This group was used as a negative
control. The numbers of bacteria in the coelomic fluid and gut
homogenate of non-stimulated earthworms were estimated. Even
in the absence of soil, earthworms still possess a significant population
of microorganisms in the coelom and in the alimentary
tract. The number of bacteria in the coelomic fluid was approximately
5.81
105 per milliliter. The number of bacteria in gut
homogenate was approximately 3.69
106 per milliliter, more than
six times higher amount than in the coelomic fluid. The numbers of
bacteria in the coelom are kept under control by various mechanisms
such as antimicrobial factors (Joskova et al., 2009; Lassegues
et al., 1989; Prochazkova et al., 2006) and phagocytic cells (Dales
and Kalac, 1992). To confirm the presence of bacteria in the
coelomic cavity in situ, histological sections were stained with toluidine
blue (Fig. 1-I). Bacteria appear as clusters of dark blue dots in
the space of the coelom.
In earthworms subjected to high microbial load, we observed
increased numbers of microorganisms in both the coelom and the
gut (Fig. 1-II). The relative fold change of CFU in the coelomic fluid
reached a maximum on the third day after the administration of
E. coli O55, B. subtilis W23, and S. cerevisiae S288 into the environment.
E. coli and S. cerevisiae stimulations showed the highest
impact on the increase of CFUs in the coelomic fluid (150- and 330-
fold increases, respectively). Stimulation with B. subtilis affected the
number of CFUs in the coelomic fluid to lesser extent (6,5-fold increase).
This result can be explained by the presence of antimicrobial
proteins, such as lysozyme (Joskova et al., 2009), that inhibit
the growth of Gram-positive bacteria in the coelomic fluid. An
increased relative fold change of CFU in the gut was detected,
similarly to the coelomic fluid, after three days of E. coli, B. subtilis,
and S. cerevisiae challenge. However, the increase in the number of
CFUs in the gut is much lower in comparison with the coelomic
fluid. The range of change varies between twenty to thirty-five-fold
higher in comparison with naïve worms. The populations of microorganisms
in the gut appear to remain less affected after microbial
administration compared to the populations in the coelomic
fluid. This result should be attributed to the higher basal number of
microorganisms in the digestive tract suggested to be tightly
associated with the intestinal wall of earthworms (Singleton et al.,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6.2 toluidine สีย้อมสีส่วนอบ deparaffinized ภาพในการแก้ปัญหาใหม่ของ toluidine สีฟ้า (สุดท้ายความเข้มข้น 0.1%) สำหรับภาพนิ่ง 20 นาทีล้างหลายครั้งในน้ำ และอบแห้งข้ามคืนส่วนถูกอบแห้งใน 96% เอทานอล ล้างในเวลาต่อมาพาราและ Permount เมาท์ในกลางแก้วภายใต้การปก3. ผล และการอภิปราย3.1. ผลของจุลินทรีย์ท้าทายการเปลี่ยนแปลงในจำนวนแบคทีเรียในลำไส้และช่อง coelomicไส้เดือนถูกเก็บไว้บนกระดาษชื้นเป็นระยะเวลาสามวันจะลดจำนวนของจุลินทรีย์ในการcoelom และล้างลำไส้ กลุ่มนี้ใช้เป็นรูปปฏิเสธการควบคุม จำนวนแบคทีเรียในน้ำ coelomic และลำไส้homogenate ของไส้เดือนที่ไม่ถูกกระตุ้นได้โดยประมาณ แม้ในการขาดงานของดิน ไส้เดือนยังมีประชากรสำคัญของจุลินทรีย์ ใน coelom ใน และที่ทางเดินอาหารทางเดิน จำนวนแบคทีเรียในน้ำ coelomic ถูกประมาณขึ้น 5.81 105 ต่อมิลลิเมตร จำนวนแบคทีเรียในลำไส้homogenate ถูกประมาณ 3.69 106 ต่อมิลลิเมตร มากกว่าหกครั้งยอดเงินสูงกว่าในน้ำ coelomic หมายเลขของแบคทีเรียใน coelom ถูกเก็บไว้ภายใต้การควบคุม โดยกลไกต่าง ๆเช่นปัจจัยต้านจุลชีพ (Joskova et al. 2009 Lassegueset al. 1989 Prochazkova et al. 2006) และเซลล์ phagocytic (ยานยนต์และ Kalac, 1992) เพื่อยืนยันการมีอยู่ของเชื้อแบคทีเรียในการcoelomic โพรงในแหล่งกำเนิด ลักษณะส่วนภาพ ด้วย toluidineสีฟ้า (รูปที่ 1-ฉัน) แบคทีเรียปรากฏเป็นกลุ่มของจุดสีฟ้าเข้มในพื้นที่ของ coelomภายใต้การโหลดสูงจุลินทรีย์ไส้เดือน สังเกตเพิ่มจำนวนจุลินทรีย์ใน coelom ในทั้งสองและลำไส้ (รูป 1-II) การเปลี่ยนแปลงสัมพัทธ์พับของอาหรับในน้ำ coelomicถึงสูงสุดในวันสามหลังจากการบริหารงานของE. coli O55, B. subtilis W23 และ S. cerevisiae S288 ในสภาพแวดล้อมพบ e. coli และ S. cerevisiae ดูดสูงที่สุดผลกระทบต่อการเพิ่มขึ้นของ CFUs น้ำ coelomic (150 -และ 330-พับเพิ่มขึ้น ตามลำดับ) กระตุ้น ด้วย B. subtilis ผลการจำนวนของ CFUs ในของเหลว coelomic จะน้อย (6, 5 พับเพิ่ม)สามารถอธิบายผลของสารต้านจุลชีพโดยโปรตีน เช่น lysozyme การถูก (Joskova et al. 2009), ที่ยับยั้งการเติบโตของแบคทีเรียในน้ำ coelomic มีพบพับสัมพัทธ์เพิ่มขึ้นการเปลี่ยนแปลงของอาหรับในลำไส้คล้ายกับของเหลว coelomic หลังจากสามวันของ E. coli, B. subtilisและ S. cerevisiae ท้าทาย อย่างไรก็ตาม การเพิ่มขึ้นของจำนวนCFUs ในลำไส้มีน้อยเมื่อเปรียบเทียบกับการ coelomicของเหลว ช่วงของการเปลี่ยนแปลงไประหว่างยี่สิบถึงสามสิบห้าพับสูงเมื่อเปรียบเทียบกับเวิร์มหน่อมแน้ม ประชากรของจุลินทรีย์ในลำไส้จะ ยังคงได้รับผลกระทบน้อยจากจุลินทรีย์เมื่อเทียบกับประชากรใน coelomic การจัดการของเหลว ผลนี้ควรถือสูงแรกเริ่มจำนวนจุลินทรีย์ในระบบทางเดินอาหารที่แนะนำให้แน่นเกี่ยวข้องกับผนังลำไส้ของไส้เดือน (แบบ et al.,

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6.2 toluidine สีฟ้าย้อมสี
Deparaffinized ส่วนแห้งมีการย้อมในการแก้ปัญหาความสดใหม่
ของ toluidine สีฟ้า (ความเข้มข้นสุดท้าย 0.1%) สำหรับ 20 นาที สไลด์
ถูกล้างหลายครั้งในน้ำและแห้งแล้วในชั่วข้ามคืน.
ส่วนก็แห้งในเอทานอล 96%, ล้างในภายหลัง
ไซลีนและติดตั้งในกลาง Permount ภายใต้ฝาครอบแก้ว.
3 ผลการค้นหาและการอภิปราย
3.1 ผลกระทบของความท้าทายของจุลินทรีย์จากการเปลี่ยนแปลงจำนวนของ
แบคทีเรียในช่องภายในตัวและลำไส้
ไส้เดือนถูกเก็บไว้บนกระดาษชื้นเป็นระยะเวลา
สามวันในการลดจำนวนของจุลินทรีย์ในที่
coelom และเพื่อล้างลำไส้ กลุ่มนี้ถูกนำมาใช้เป็นเชิงลบ
การควบคุม จำนวนของแบคทีเรียในภายในตัวของเหลวและลำไส้
homogenate ของไส้เดือนดินที่ไม่ใช่การกระตุ้นอยู่ที่ประมาณ แม้
ในกรณีที่ไม่มีดินไส้เดือนดินยังคงมีความสำคัญประชากร
ของจุลินทรีย์ใน coelom และในทางเดินอาหาร
ทางเดิน จำนวนแบคทีเรียในน้ำภายในตัวอยู่ที่ประมาณ
5.81? ต่อ 105 มิลลิลิตร จำนวนแบคทีเรียในลำไส้
homogenate ประมาณ 3.69? ต่อมิลลิลิตร 106 มากกว่า
จำนวนหกครั้งสูงกว่าในของเหลวภายในตัว ตัวเลขของ
แบคทีเรียใน coelom จะถูกเก็บไว้ภายใต้การควบคุมโดยกลไกต่างๆ
เช่นปัจจัยต้านจุลชีพ (Joskova et al, 2009;. Lassegues
et al, 1989;. Prochazkova et al, 2006.) และเซลล์ phagocytic (เดลส์
และ Kalac, 1992) . เพื่อยืนยันการปรากฏตัวของแบคทีเรียในที่
โพรงภายในตัวในแหล่งกำเนิดส่วนเนื้อเยื่อย้อมด้วยสี toluidine
สีฟ้า (รูป. 1-i) เชื้อแบคทีเรียที่ปรากฏเป็นกลุ่มของจุดสีฟ้าเข้มใน
พื้นที่ของ coelom ได้.
ในไส้เดือนยัดเยียดให้โหลดจุลินทรีย์สูงเราสังเกต
จำนวนของจุลินทรีย์ที่เพิ่มขึ้นทั้งใน coelom และ
ลำไส้ (รูป. 1-II) การเปลี่ยนแปลงเท่าญาติของโคโลนีในน้ำภายในตัว
สูงสุดในวันที่สามหลังจากที่การบริหารงานของ
อี coli O55 บี subtilis W23 และ S. cerevisiae S288 สู่สิ่งแวดล้อม.
อี coli และ S. cerevisiae กระตุ้นแสดงให้เห็นสูงสุด
ส่งผลกระทบต่อการเพิ่มขึ้นของ CFUs ในของเหลวภายในตัว (ที่ 150 และ 330-
เพิ่มขึ้นเท่าตามลำดับ) กระตุ้นกับบี subtilis ได้รับผลกระทบ
จำนวน CFUs ในของเหลวภายในตัวไปในระดับน้อย (6,5 เท่าเพิ่มขึ้น).
ผลที่ได้นี้สามารถอธิบายได้ด้วยการปรากฏตัวของยาต้านจุลชีพ
โปรตีนเช่นไลโซไซม์ (Joskova et al., 2009) ที่ยับยั้งการ
เจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกในของเหลวภายในตัว
เปลี่ยนแปลงเท่าเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบของโคโลนีในลำไส้ได้รับการตรวจพบ
ในทำนองเดียวกันกับของเหลวภายในตัวหลังจากสามวันของเชื้อ E. coli, B. subtilis,
และ S. cerevisiae ท้าทาย อย่างไรก็ตามการเพิ่มขึ้นในจำนวนของที่
CFUs ในลำไส้ที่ต่ำกว่ามากเมื่อเทียบกับภายในตัว
ของของเหลว ช่วงของการเปลี่ยนแปลงแตกต่างกันระหว่าง 20-35 เท่า
สูงกว่าในการเปรียบเทียบกับเวิร์มไร้เดียงสา ประชากรของจุลินทรีย์
ในลำไส้ปรากฏว่ายังคงได้รับผลกระทบน้อยหลังจากจุลินทรีย์
บริหารเมื่อเทียบกับประชากรในภายในตัว
ของเหลว ผลที่ได้นี้ควรนำมาประกอบกับจำนวนฐานที่สูงขึ้นของ
จุลินทรีย์ในระบบทางเดินอาหารแนะนำให้แน่น
ที่เกี่ยวข้องกับผนังลำไส้ของไส้เดือนดิน (Singleton et al.,

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดาวน์โหลด . โทลูอิดีนสีฟ้า .deparaffinized แห้งบางส่วนถูกย้อมในโซลูชั่นสดสีฟ้า ( สุดท้ายของโทลูอิดีนความเข้มข้น 0.1% ) 20 นาที ภาพนิ่งเคยล้างหลายครั้งในน้ำและแห้งข้ามคืนส่วนที่เคยแห้งในแอลกอฮอล์ 96% และล้างในไซลีนและติดตั้งใน permount ขนาดกลางภายใต้ฝาครอบกระจก3 . ผลและการอภิปราย3.1 . ผลของความท้าทายของการเปลี่ยนแปลงจำนวนแบคทีเรียในช่องปากและ coelomic อุทรไส้เดือนถูกเก็บไว้บนผ้าขนหนูกระดาษชื้นสำหรับรอบระยะเวลา3 วัน เพื่อลดจำนวนเชื้อจุลินทรีย์ในมาตงค์และล้างไส้ กลุ่มนี้เคยเป็นลบควบคุม ตัวเลขของแบคทีเรียในของเหลวและไส้ coelomicอนไม่น่าเร้าใจ ไส้เดือน คือประมาณ แม้ในการขาดของดิน ไส้เดือนยังมีประชากรของจุลินทรีย์ในทางเดินอาหารในช่องว่างภายในลำตัวและเดิน จำนวนแบคทีเรียในของเหลว coelomic คือประมาณ5.81 105 ต่อมิลลิลิตร จำนวนแบคทีเรียในกระเพาะอาหารอนประมาณ 3.69 106 ต่อมิลลิลิตร มากกว่าหกครั้ง ปริมาณที่สูงมากขึ้นกว่าในของเหลว coelomic . ตัวเลขของแบคทีเรียในช่องว่างภายในลำตัวจะถูกเก็บไว้ภายใต้การควบคุมโดยกลไกต่าง ๆเช่นปัจจัยต้านจุลชีพ ( joskova et al . , 2009 ; lassegueset al . , 1989 ; prochazkova et al . , 2006 ) และเซลล์ฟาโกไซโตซิส ( เดลส์และ kalac , 1992 ) เพื่อยืนยันการปรากฏตัวของเชื้อแบคทีเรียในหอคำในแหล่งกำเนิดที่พบบางส่วนถูกย้อมด้วยโทลูอิดีน ,สีฟ้า ( รูปที่ 1-i ) กลุ่มของแบคทีเรียปรากฏเป็นจุดสีฟ้าเข้มในพื้นที่ของมาตงค์ .จุลินทรีย์ในไส้เดือนภายใต้โหลดสูง เราสังเกตตัวเลขที่เพิ่มขึ้นของจุลินทรีย์ ทั้งในช่องว่างภายในลำตัวและไส้ใน ( รูปที่ 1-ii ) ญาติพับเปลี่ยนเซลล์ใน coelomic ของไหลถึงสูงสุดในวันที่สามหลังจากการบริหารงานของE . coli o55 , B . subtilis w23 และ S . cerevisiae s288 สู่สิ่งแวดล้อมE . coli และ S . cerevisiae ตัวกระตุ้นให้สูงสุดผลกระทบที่เพิ่มขึ้นของ cfus ใน coelomic ของไหล ( 150 - 330 -พับเพิ่มขึ้นตามลำดับ ) B . subtilis มีผลต่อการกระตุ้นด้วยจำนวน cfus ในของเหลว coelomic จะน้อยกว่าขอบเขต ( 6,5-fold เพิ่ม )ผลที่ได้นี้สามารถอธิบายได้โดยการแสดงตนของจุลชีพโปรตีน เช่น ไลโซไซม์ ( joskova et al . , 2009 ) ที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกในของเหลว coelomic . เป็นเพิ่มญาติพับเปลี่ยนเซลล์ในลำไส้ถูกตรวจพบในทํานองเดียวกันกับของเหลว coelomic หลังจากสามวันของ B . subtilis , E . coli ,และ S . cerevisiae ท้าทาย อย่างไรก็ตาม การเพิ่มจำนวนของcfus ในกระเพาะจะลดลงมากเมื่อเทียบกับ coelomicของไหล ช่วงของการเปลี่ยนแปลงที่แตกต่างกันระหว่างยี่สิบถึงสามสิบห้าพับสูงกว่าในการเปรียบเทียบกับไตได้หนอน ประชากรของจุลินทรีย์ในอุทร ปรากฏ ยังคงน้อยกว่าผลกระทบหลังจากที่จากจุลินทรีย์การบริหารเปรียบเทียบกับประชากรใน coelomicของไหล ผลนี้น่าจะเกิดจากที่สูงกว่าแรกเริ่มจำนวนจุลินทรีย์ในระบบทางเดินอาหารแนะนำให้แน่นที่เกี่ยวข้องกับผนังลำไส้ของไส้เดือนดิน ( Singleton et al . ,