(touchdown 72e65 C), followed by a

(touchdown 72e65 C), followed by a 72 C extension step for
45 s, followed by 28e35 cycles (different between primer sets)
with a constant annealing temperature of 65 C for 30 s and a
final step of 72 C for 4 min. PCR products were subjected to
electrophoresis in 2 % agarose gels.
Penicillium isolates (n ¼ 148) collected through air sampling
in London were tested by PCR using the four designed primer
sets to ascertain primer specificity by observing for overlapping
positives. To further confirm primer sensitivity and
analyse Penicillium diversity, ITS regions from these 148 isolates
were sequenced and assigned to species using the basic
local alignment search tool (BLAST http://blast.ncbi.nlm.nih.
gov/). Primer sets were also tested for efficacy when performing
PCR direct from fungal conidia using an amended
protocol (Aufauvre-Brown et al. 1993). Conidia from sample
isolates were transferred direct into the PCR reactions by
placing a pipette tip briefly in contact with an isolate colony
from an agar plate and dipping into the reaction well. Conidia
were also transferred directly into the PCR reactions from
water backups of stored fungal isolates by the addition of 2 ml
of backup water instead of the isolate DNA extract.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

(เหรียญ 72e65 C), ไปมาแล้วตอนขยาย 72 C สำหรับ45 s ตาม 28e35 รอบ (ที่แตกต่างกันระหว่างชุดรองพื้น)มีค่าคงเป็นการอบเหนียวอุณหภูมิ 65 C สำหรับ 30 s และขั้นตอนสุดท้ายที่ผลิตภัณฑ์ PCR 4 นาที 72 C ถูกต้องelectrophoresis ในเจ 2% agarosePenicillium แยก (n ¼ 148) รวบรวม โดยสุ่มตัวอย่างอากาศในลอนดอนได้ทดสอบ โดย PCR โดยใช้สีรองพื้นการออกแบบ 4ชุดตรวจ specificity รองพื้น โดยการสังเกตการซ้อนทับกันทำงานผิดพลาด ยืนยันเพิ่มเติม รองพื้นความไว และวิเคราะห์ความหลากหลายของ Penicillium ของภูมิภาคจากแยกนี้ 148ชนิดตามลำดับ และกำหนดให้ใช้พื้นฐานเครื่องมือค้นหาท้องถิ่นตำแหน่ง (ระเบิด http://blast.ncbi.nlm.nihgov /) ชุดรองพื้นยังทดสอบสำหรับประสิทธิภาพการPCR โดยตรงจาก conidia เชื้อราที่ใช้การแก้ไขโพรโทคอล (Aufauvre-สีน้ำตาลและ al. 1993) Conidia จากตัวอย่างแยกถูกโอนย้ายโดยตรงลงในปฏิกิริยา PCR โดยวางเคล็ดเปตต์สั้น ๆ กับโคโลนีแยกจากแผ่นการ agar และจุ่มลงในปฏิกิริยาที่ดี Conidiaยังมีการถ่ายโอนโดยตรงลงในปฏิกิริยา PCR จากน้ำสำรองเก็บไว้แยกเชื้อราด้านนอก 2 mlน้ำสำรองแทนการแยกดีเอ็นเอแยก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

(ทัชดาวน์ 72e65? C) ตามด้วย 72 ขั้นตอนการขยาย C เป็นเวลา
45 วินาทีตามด้วย 28e35 รอบ (ที่แตกต่างกันระหว่างชุดไพรเมอร์)
ที่มีอุณหภูมิการอบคงที่ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30
วินาทีและขั้นตอนสุดท้ายของ72 องศาเซลเซียสสำหรับ 4 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR
ถูกยัดเยียดให้อิเลค2% เจล agarose.
Penicillium ไอโซเลท (n ¼ 148)
ที่รวบรวมได้จากการเก็บตัวอย่างอากาศในกรุงลอนดอนได้รับการทดสอบโดยวิธีPCR ใช้สี่ได้รับการออกแบบไพรเมอร์ชุดเพื่อยืนยันความจำเพาะไพรเมอร์โดยการสังเกตสำหรับที่ทับซ้อนกันบวก เพื่อเป็นการยืนยันความไวไพรเมอร์และวิเคราะห์ความหลากหลาย Penicillium ภูมิภาค ITS จากนี้ 148 ไอโซเลทมีลำดับขั้นตอนและมอบหมายให้สายพันธุ์โดยใช้พื้นฐานเครื่องมือในการค้นหาการจัดตำแหน่งในท้องถิ่น (BLAST http:. //blast.ncbi.nlm.nih gov /) ชุดไพรเมอร์ได้รับการทดสอบยังมีประสิทธิภาพเมื่อดำเนินการPCR โดยตรงจากสปอร์ของเชื้อราซึ่งแก้ไขเพิ่มเติมโดยใช้โปรโตคอล(Aufauvre-Brown et al. 1993) สปอร์จากตัวอย่างสายพันธุ์ถูกย้ายโดยตรงในปฏิกิริยา PCR โดยวางปลายปิเปตในเวลาสั้นๆ ในการติดต่อกับอาณานิคมแยกจากจานเลี้ยงเชื้อและจุ่มลงปฏิกิริยากัน conidia ถูกย้ายโดยตรงในปฏิกิริยา PCR จากการสำรองข้อมูลของเชื้อราน้ำที่เก็บไว้แยกโดยนอกเหนือจาก2 มิลลิลิตรน้ำสำรองแทนการแยกสารสกัดดีเอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

( ทัชดาวน์ 72e65  c ) ตามด้วย 72  C ส่วนขยายขั้นตอน
45 วินาที ตามด้วยรอบ 28e35 ( ความแตกต่างระหว่างชุดไพรเมอร์ )
กับคงที่อุณหภูมิการอบอ่อนที่ 65  C เป็นเวลา 30 วินาทีและ
ขั้นตอนสุดท้ายของ 72  C เป็นเวลา 4 นาที ซึ่งผลิตภัณฑ์จะถูก
electrophoresis ใน 2 % เจล ( .
Penicillium สายพันธุ์ ( N ¼ 148 ) การเก็บรวบรวมตัวอย่างอากาศ
ในลอนดอนถูกตรวจสอบโดยวิธี PCR โดยใช้สี่ออกแบบไพรเมอร์รองพื้น
ชุดให้ความจำเพาะโดยการสังเกตสำหรับ
แจ้งที่ทับซ้อนกัน เพื่อเพิ่มเติมความไวและยืนยันแนวทาง
วิเคราะห์ความหลากหลาย Penicillium ของภูมิภาคนี้เป็นลำดับ
148 ไอโซเลทและมอบหมายให้สายพันธุ์โดยใช้พื้นฐาน
ท้องถิ่นจัดเครื่องมือค้นหา ( http : / / ระเบิดระเบิด ncbi . nlm . nih gov .
/ )ชุดรองพื้นยังทดสอบประสิทธิภาพเมื่อดำเนินการโดยตรงจากเชื้อราโคนิ

ใช้แก้ไขปรับปรุงพิธีสาร ( aufauvre สีน้ำตาล et al . 1993 ) ผลการศึกษาจากตัวอย่าง
ไอโซเลทถูกโอนโดยตรงในปฏิกิริยา PCR โดย
วางปิเปตทิปสั้นๆในการติดต่อกับอาณานิคม
แยกจาก agar plate และจุ่มลงไปในปฏิกิริยาด้วย โคนิ
ยังโอนได้โดยตรงในการตรวจปฏิกิริยาจาก
น้ำสำรองเก็บไว้แยกเชื้อรา โดยนอกเหนือจาก 2 ml
น้ำสำรองแทนการแยกสกัดดีเอ็นเอ