The slices were processed through standard protocols
of immunohistochemistry with minor modifications (Singh
et al., 2011). Briefly, following 3% H2O2 quenching endogenous
peroxidase, the slices were repaired in microwave to
further expose nuclear antigens. Rabbit anti-ER (1:200,
Santa Cruz, USA), rabbit anti-ER (1:200, BIOSS, China),
rabbit anti-PR (1:200, BIOSS, China) were used to coincubate
with the slices for 2 h at 37 ◦C. IgG marked by biotin
(1:200) and SABC hypersensitivity reagent kit were bought
from Beijing Zhongshan Golden Bridge Reagent Company.
Negative contrast slices were treated with the same measures
as above except that the first antibodies was replaced
with normal rabbit serum IgG. Binding specificity and
purity of all antibodies had been tested by Western blotting.
The immune positive products were tan in the immunohistochemically
stained slices while the negative contrast
slices could not be stained. Stained slices randomly choosen
from each specimen were photographed in random visual
fields at high magnification (400×). The images were then
analysed with Image Pro-Plus 4.5, the average optical density
(AOD) of positive area was obtained to evaluate the
stained level of cells and reflect the quantity of target antigen.
At least 10 specimens from each of six animals were
examined for all investigations.
The slices were processed through standard protocolsof immunohistochemistry with minor modifications (Singhet al., 2011). Briefly, following 3% H2O2 quenching endogenousperoxidase, the slices were repaired in microwave tofurther expose nuclear antigens. Rabbit anti-ER (1:200,Santa Cruz, USA), rabbit anti-ER (1:200, BIOSS, China),rabbit anti-PR (1:200, BIOSS, China) were used to coincubatewith the slices for 2 h at 37 ◦C. IgG marked by biotin(1:200) and SABC hypersensitivity reagent kit were boughtfrom Beijing Zhongshan Golden Bridge Reagent Company.Negative contrast slices were treated with the same measuresas above except that the first antibodies was replacedwith normal rabbit serum IgG. Binding specificity andpurity of all antibodies had been tested by Western blotting.The immune positive products were tan in the immunohistochemicallystained slices while the negative contrastslices could not be stained. Stained slices randomly choosenfrom each specimen were photographed in random visualfields at high magnification (400×). The images were thenanalysed with Image Pro-Plus 4.5, the average optical density(AOD) of positive area was obtained to evaluate thestained level of cells and reflect the quantity of target antigen.At least 10 specimens from each of six animals wereexamined for all investigations.
การแปล กรุณารอสักครู่..

ชิ้นที่ถูกประมวลผลผ่านโปรโตคอลมาตรฐาน
ของ immunohistochemistry มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (Singh
et al., 2011) สั้น ๆ ดังต่อไปนี้ 3% H2O2 ดับภายนอก
peroxidase ชิ้นได้รับการซ่อมแซมในไมโครเวฟที่จะ
เปิดเผยต่อแอนติเจนนิวเคลียร์ กระต่ายต่อต้าน ER? (1: 200,
ซานตาครูซ, ประเทศสหรัฐอเมริกา), กระต่ายต่อต้าน ER? (1: 200 BIOSs, จีน)
กระต่ายต่อต้านประชาสัมพันธ์ (1: 200 BIOSs, จีน) ถูกนำมาใช้เพื่อ coincubate
กับชิ้นเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ◦C IgG ทำเครื่องหมายด้วยไบโอติน
(1: 200) และ SABC ชุดน้ำยาแพ้ถูกซื้อ
จากปักกิ่ง Zhongshan สะพานโกลเด้ บริษัท Reagent.
ชิ้นตรงกันข้ามลบได้รับการรักษาด้วยมาตรการเดียวกัน
กับข้างต้นยกเว้นว่าแอนติบอดีแรกก็ถูกแทนที่
ด้วยซีรั่มกระต่ายปกติ IgG มีผลผูกพันเฉพาะเจาะจงและ
ความบริสุทธิ์ของแอนติบอดีทุกคนจะได้รับการทดสอบโดยวิธี western blotting.
ผลิตภัณฑ์บวกภูมิคุ้มกันเป็นสีน้ำตาลใน immunohistochemically
ชิ้นสีในขณะที่มีความคมชัดในเชิงลบ
ชิ้นไม่สามารถย้อมสี ชิ้นสีเลือกได้สุ่ม
จากแต่ละชิ้นงานถูกถ่ายภาพในภาพสุ่ม
สาขาที่กำลังขยายสูง (400 ×) ภาพที่ถูกแล้ว
วิเคราะห์ด้วยภาพ Pro-Plus 4.5 ความหนาแน่นแสงเฉลี่ย
(AOD) ในแดนบวกที่ได้รับการประเมิน
ระดับสีของเซลล์และสะท้อนให้เห็นถึงปริมาณของแอนติเจนเป้าหมาย.
อย่างน้อย 10 ตัวอย่างจากแต่ละหกสัตว์ที่ถูก
ตรวจสอบ สำหรับการตรวจสอบทั้งหมด
การแปล กรุณารอสักครู่..

ชิ้นที่ถูกประมวลผลผ่านมาตรฐานโปรโตคอล
ของหลอดที่มีการแก้ไขเล็กน้อย ( Singh
et al . , 2011 ) สั้น ๆต่อไปนี้ 3 % แบตดับภายใน
ทั้งชิ้นถูกซ่อมแซมในไมโครเวฟ
เพิ่มเติมเปิดเผยนิวเคลียร์แอนติเจน กระต่ายต่อต้าน ( 1:200
เอ้อ , ซานตาครูซ , USA ) , กระต่าย ( 1:200 bioss anti เอ้อ , จีน ) ,
กระต่าย anti PR ( 1:200 bioss , ,จีน ) ถูกใช้เพื่อ coincubate
กับชิ้น 2 ชั่วโมง 37 ◦ C IgG ที่มีไบโอติน
( 1:200 ) และชุดรีเอเจนต์ 1 sabc ซื้อ
จากปักกิ่ง Zhongshan สะพานโกลเด้น โครงสร้างบริษัท
ลบความคมชัดชิ้นได้รับการรักษาด้วยมาตรการเดียวกัน
ข้างบน ยกเว้นว่าแอนติบอดีแรกแทนที่
กับกระต่าย กลุ่มปกติ เซรั่ม ความจำเพาะและ
ผูกพันความบริสุทธิ์ของแอนติบอดีที่ได้รับการทดสอบโดย Western blotting .
ภูมิคุ้มกันบวกผลิตภัณฑ์แทนใน immunohistochemically
เปื้อนชิ้นในขณะที่ชิ้นคมชัด
ลบจะ ได้ ไม่ เลอะเทอะ ย้อมชิ้นสุ่มเลือก
จากแต่ละตัวอย่างถูกถ่ายภาพในสาขาทัศนศิลป์
สุ่มขยายสูง ( 400 × ) ภาพแล้วภาพ
วิเคราะห์ด้วยโปรพลัส 4.5 ,
ความหนาแน่นแสงเฉลี่ย ( AOD ) ของพื้นที่บวกได้ประเมินระดับเซลล์
เปื้อนและสะท้อนให้เห็นถึงปริมาณแอนติเจนเป้าหมาย
อย่างน้อย 10 ตัวอย่าง จากแต่ละหกสัตว์
ตรวจสอบสำหรับการตรวจสอบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
