2.5. Digestion of peptides with try

2.5. Digestion of peptides with trypsin
In-gel digestion of protein spots showing changes in intensity
was performed. For this task, the spots (ca. 2 mm) were manually
cut from the gel and placed on a micro-SPE plate containing
peptide affinity resin using the Montage® In-Gel digestZP kit
(Millipore, Bedford, USA). The digestion and vacuum elution
protocols were performed according to the manufacturer's
recommendations. In brief, a dye removal step using acetonitrile
was first employed, followed by tryptic digestion (using ca.
166 ng of enzyme for each spot). Then, a clean-up step was
carried out using 130 μL of 0.2% (v/v) TFA solution. Finally,
purified peptides were eluted from the resin using 20 μL of 0.1%
(v/v) TFA in 50% (v/v) acetonitrile solution. For vacuum elution, a
Multiscreen® Vacuum Manifold (Millipore) was used

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การย่อยเปปไทด์กับทริปซินในเจย่อยของโปรตีนแสดงการเปลี่ยนแปลงความเข้มได้ดำเนินการ สำหรับงานนี้ จุด (ca. มม.) ได้ด้วยตนเองตัดจากเจ และวางอยู่บนแผ่นไมโคร SPE ที่ประกอบด้วยใช้ชุดตัดต่อ®ในเจ digestZP เรซิ่นความสัมพันธ์เปปไทด์(มิลลิพอร์ กลาสโกว์ สหรัฐอเมริกา) การย่อยอาหารและดูดชะโปรโตคอลการดำเนินการตามของผู้ผลิตคำแนะนำ สั้น ขั้นตอนการกำจัดสีย้อมใช้ acetonitrileถูกครั้งแรกจ้าง ตาม ด้วย tryptic ย่อย (ใช้ ca166 ฉบับของเอนไซม์แต่ละจุด) แล้ว เป็นขั้นตอนการล้างดำเนินการโดยใช้ μL 130 ของ TFA 0.2% (v/v) ในที่สุดเปปไทด์บริสุทธิ์ถูก eluted จากเรซิ่นที่ใช้ μL 20 0.1%(v/v) TFA ใน 50% (v/v) acetonitrile สำหรับชะดูด ความMultiscreen ®ดูดมากมาย (มิลลิพอร์) ถูกใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การย่อยอาหารของเปปไทด์ที่มี trypsin ย่อยอาหารในเจลจุดโปรตีนที่แสดงการเปลี่ยนแปลงในความรุนแรงที่ได้ดำเนินการ สำหรับงานนี้จุด (แคลิฟอร์เนีย 2 มิลลิเมตร) ด้วยตนเองที่ถูกตัดออกจากเจลและวางไว้บนแผ่นไมโครเอสพีอีที่มีเรซินความสัมพันธ์เปปไทด์ที่ใช้ในMontage®เจลdigestZP ชุด(คฟอร์ดสหรัฐอเมริกา) การย่อยและดูดชะโปรโตคอลได้ดำเนินการตามของผู้ผลิตให้คำแนะนำ ในช่วงสั้น ๆ ที่มีขั้นตอนการกำจัดสีย้อมโดยใช้ acetonitrile ถูกจ้างมาก่อนตามด้วยการย่อยอาหาร tryptic (ใช้โดยประมาณ166 นาโนเอนไซม์สำหรับแต่ละจุด) จากนั้นเป็นขั้นตอนการทำความสะอาดขึ้นได้รับการดำเนินการโดยใช้ 130 ไมโครลิตร 0.2% (v / v) การแก้ปัญหา TFA สุดท้ายเปปไทด์บริสุทธิ์ถูกชะจากเรซินใช้ 20 ไมโครลิตร 0.1% (v / v) TFA 50% (v / v) การแก้ปัญหา acetonitrile สำหรับชะสูญญากาศเป็นManifold สูญญากาศMultiscreen® (ค) ถูกนำมาใช้