Plasmids are double-stranded circul

Plasmids are double-stranded circular DNA molecules that have the property of self-replication, independent of chromosomal DNA. In bacteria, they carry genes that specify a variety of host properties. In recent years, naturally occurring plasmids have been modified to produce new plasmids, which are used as cloning vehicles in recombinant DNA research. Although the presence of a plasmid in a bacterial cell may be detected genetically as a change in phenotype (e.g., resistance to a particular antibiotic), often it is necessary to isolate plasmid DNA for molecular studies, such as size determination, restriction enzyme mapping, and nucleotide sequencing, or for the construction of new hybrid plasmids. The degree of purification required depends upon the intended use. Highly purified material can be prepared by the "cleared lysate" method, which involves a long period of centrifugation in a dye-CsCl gradient. Less purified plasmid DNA is often satisfactory for recombinant DNA studies, and a large number of shorter and simpler methods have been developed. This chapter describes one such method that uses an alkaline extraction step. It is rapid enough to be used as a screening method, permitting 50-100 or more samples to be extracted in a few hours. The DNA is sufficiently pure to be digestible by restriction enzymes, an important advantage for screening. A preparative version that allows isolation of larger quantities of more highly purified material is also described.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Plasmids จะควั่นสองวงดีเอ็นเอโมเลกุลที่มีคุณสมบัติของการจำลองแบบด้วยตนเอง ของดีเอ็นเอเปลี่ยนของโครโมโซม ในแบคทีเรีย พวกเขามียีนที่ระบุสมบัติของโฮสต์ที่หลากหลาย ในปีล่าสุด ธรรมชาติเกิด plasmids มีการปรับเปลี่ยนการผลิตใหม่ plasmids ที่ใช้เป็นโคลนรถยนต์วิจัยควบรวมดีเอ็นเอ แม้ว่าการปรากฏตัวของ plasmid ในเซลล์แบคทีเรียอาจตรวจพบพันธุกรรมเป็นการเปลี่ยนแปลงในกนิน (เช่น ความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะเฉพาะ), มัก จะต้องแยก plasmid DNA สำหรับ ศึกษาโมเลกุล เช่นการกำหนดขนาด เอนไซม์จำกัดแผนที่ ลำดับของนิวคลีโอไทด์ หรือก่อสร้าง plasmids ไฮบริดสลีใหม่ ระดับความบริสุทธิ์ที่จำเป็นขึ้นอยู่กับการใช้ สามารถเตรียมวัสดุบริสุทธิ์สูง โดย "ล้าง lysate ของ" วิธีการ ซึ่งเกี่ยวข้องกับการหมุนเหวี่ยงใน CsCl ย้อมไล่ระดับสีเป็นเวลานาน Plasmid บริสุทธิ์น้อยกว่าดีเอ็นเอจะพอศึกษาควบรวมดีเอ็นเอ และตัวสั้นลง และง่ายวิธีได้รับการพัฒนา บทนี้อธิบายถึงวิธีที่ใช้ในขั้นตอนการสกัดอัลคาไลน์หนึ่งดังกล่าว ได้อย่างรวดเร็วพอที่จะใช้เป็นวิธีคัดกรอง อนุญาตให้ 50-100 หรือมากกว่าตัวอย่างจะถูกแยกในกี่ชั่วโมง ดีเอ็นเอบริสุทธิ์พอที่จะย่อย โดยเอนไซม์จำกัด ข้อได้เปรียบที่สำคัญสำหรับการคัดกรอง นอกจากนี้ยังมีอธิบายรุ่นกราให้แยกปริมาณวัสดุสะอาดอย่างมาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พลาสมิดเป็นเกลียวคู่ดีเอ็นเอโมเลกุลของวงกลมที่มีทรัพย์สินของตัวเองการจำลองแบบอิสระของโครโมโซม ในแบคทีเรียพวกเขาดำเนินการระบุยีนที่มีความหลากหลายของคุณสมบัติโฮสต์ ในปีที่ผ่านมาพลาสมิดธรรมชาติที่เกิดขึ้นได้รับการแก้ไขในการผลิตพลาสมิดใหม่ซึ่งจะใช้เป็นยานพาหนะในการวิจัยการโคลนดีเอ็นเอ แม้ว่าการปรากฏตัวของพลาสมิดในเซลล์ของแบคทีเรียอาจถูกตรวจพบพันธุกรรมเป็นการเปลี่ยนแปลงในฟีโนไทป์ (เช่นความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะโดยเฉพาะ) มักจะเป็นสิ่งที่จำเป็นในการแยกดีเอ็นเอพลาสมิดสำหรับการศึกษาในระดับโมเลกุลเช่นการกำหนดขนาดการทำแผนที่เอนไซม์ จำกัด , และเบื่อหน่ายลำดับหรือสำหรับการก่อสร้างของพลาสมิดไฮบริดใหม่ การศึกษาระดับปริญญาของการทำให้บริสุทธิ์ต้องขึ้นอยู่กับการใช้งานที่ต้องการ วัสดุบริสุทธิ์สูงสามารถจัดทำโดย "เคลียร์ lysate" วิธีการที่เกี่ยวข้องกับการเป็นเวลานานของการหมุนเหวี่ยงในการไล่ระดับสีย้อม CsCl พลาสมิดดีเอ็นเอบริสุทธิ์น้อยมักจะเป็นที่น่าพอใจสำหรับการศึกษาดีเอ็นเอและจำนวนมากของวิธีการที่สั้นและง่ายได้รับการพัฒนา บทนี้จะอธิบายวิธีการดังกล่าวหนึ่งที่ใช้เป็นขั้นตอนการสกัดอัลคาไลน์ มันเป็นไปอย่างรวดเร็วพอที่จะใช้เป็นวิธีการตรวจคัดกรองอนุญาต 50-100 หรือมากกว่ากลุ่มตัวอย่างที่จะสกัดในไม่กี่ชั่วโมง ดีเอ็นเอบริสุทธิ์พอที่จะย่อยโดยเอนไซม์ข้อ จำกัด ข้อได้เปรียบที่สำคัญสำหรับการตรวจคัดกรอง รุ่นเตรียมที่ช่วยให้การแยกปริมาณที่มากขึ้นของวัสดุอื่น ๆ อีกมากมายนอกจากนี้ยังมีความบริสุทธิ์สูงมีการอธิบาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พลาสมิดดีเอ็นเอโมเลกุลคู่เกลียววงกลมที่มีคุณสมบัติของตนเองแบบอิสระของโครโมโซม ดีเอ็นเอ ในแบคทีเรีย พวกเขาพกยีนที่กำหนดความหลากหลายของคุณสมบัติโฮสต์ ใน ปี ล่าสุด เกิดขึ้นตามธรรมชาติ ) มีการปรับเปลี่ยนการผลิตพลาสมิดใหม่ซึ่งจะใช้เป็นยานพาหนะในการการวิจัยดีเอ็นเอ แม้ว่าการปรากฏตัวของดีเอ็นเอในเซลล์แบคทีเรีย อาจต้องตรวจทางพันธุกรรม เช่น การเปลี่ยนแปลงในการ ( เช่น ความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะเฉพาะ ) มักจะมีความจําเป็นต้องแยกพลาสมิดดีเอ็นเอสำหรับการสร้างแบบจำลองโมเลกุล เช่น การคำนวณขนาดแผนที่และเอนไซม์จำกัด , ลำดับนิวคลีโอไทด์ , หรือการสร้างพลาสมิดลูกผสมใหม่ ระดับของการใช้ขึ้นอยู่กับวัตถุประสงค์การใช้งาน บริสุทธิ์สูงและวัสดุที่สามารถเตรียมได้โดยวิธีการ " ล้าง lysate " ซึ่งเกี่ยวข้องกับระยะเวลาที่ยาวนานของการปั่นเหวี่ยงในการย้อม CSCL ลาด . พลาสมิดดีเอ็นเอบริสุทธิ์น้อยมักจะเป็นที่น่าพอใจสำหรับการศึกษา DNA ของเซลล์ และ ตัวเลขขนาดใหญ่ของสั้นกว่าและง่ายกว่าวิธีการที่ได้รับการพัฒนา บทนี้จะอธิบายวิธีการหนึ่งดังกล่าวที่ใช้ขั้นตอนการสกัดด้วยด่าง มันเป็นอย่างรวดเร็วพอที่จะใช้เป็นวิธีคัดกรองอนุญาตให้ 50-100 ตัวอย่าง หรือมากกว่าที่จะสกัดในไม่กี่ชั่วโมง ดีเอ็นเออย่างบริสุทธิ์จะย่อยโดยเอนไซม์ที่เป็นประโยชน์ที่สำคัญสำหรับการคัดกรอง เป็นเบื้องต้นรุ่นที่ช่วยให้การแยกขนาดใหญ่ปริมาณของวัสดุที่บริสุทธิ์สูงยังอธิบาย