For detection of the agonism action

For detection of the agonism action of the compounds, the
[
35S]GTPcS binding assay was performed at 30 C for 40 min (for
D1 and D2) or 20 min (for 5-HT1A) in reaction buffer containing
50 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 100 mM NaCl, and
1 mM DL-dithiothreitol (DTT). The assay mixture (200 lL) con-
tained 20 lg (for D2) or 30 lg (for D1 and 5-HT1A) of membrane
protein, 0.1 nM [35S]GTPcS, and 40 lM guanosine triphosphate
(GDP) with various concentration of the compound. The antago-
nism effects of the compounds were tested in the existence of
100 lM SKF38393 for D1 or quinpirole for D2 receptor. Nonspecific
binding was measured in the presence of 100 lM 50-guanylimid-
odiphosphate (Gpp(NH)p). The reaction was terminated by addi-
tion of 3 mL of ice-cold washing buffer (50 mM Tris, pH 7.5,
5 mM MgCl2, 1 mM EDTA, and 100 mM NaCl) and was rapidly fil-
tered with GF/C glass fiber filters (Whatman) and rinsed three
times. Filters were dried and radioactivity was determined by li-
quid scintillation counting.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการตรวจสอบของการดำเนินการ agonism ของสารประกอบที่
[
35S] GTPcS ผูกพันทดสอบได้ดำเนินการวันที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาที (สำหรับ
D1 และ D2) หรือ 20 นาที (5-HT1A) ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มี
ขนาด 50 มมทริสพีเอช 7.5 5 มิลลิ MgCl2 1 มิ EDTA, 100 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์และ
1 มิลลิ DL-dithiothreitol (DTT) การทดสอบสารผสม (200 LL) ง
tained 20 LG (สำหรับ D2) หรือ 30 LG (สำหรับ D1 และ 5 HT1A) ของเมมเบรน
โปรตีน 0.1 นาโนเมตร [35S] GTPcS และ 40 LM guanosine triphosphate
(จีดีพี) ที่มีความเข้มข้นต่างๆของ สารประกอบ antago-
ผลกระทบ nism ของสารที่ถูกทดสอบในการดำรงอยู่ของ
100 LM SKF38393 สำหรับ D1 หรือ D2 quinpirole สำหรับรับ เชิญชม
ผลผูกพันวัดในการปรากฏตัวของ 100 LM 50 guanylimid-
odiphosphate (Gpp (NH) P) ปฏิกิริยาถูกยกเลิกโดยแก้ที่ดีนอกจาก
การของ 3 มลของบัฟเฟอร์เย็นซักผ้า (50 mM Tris พีเอช 7.5,
5 มิลลิ MgCl2 1 มิ EDTA และ 100 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์) และได้รับการอย่างรวดเร็ว fil-
tered กับ GF ใยแก้ว / C ฟิลเตอร์ (Whatman) และล้างสาม
ครั้ง กรองแห้งและกัมมันตภาพรังสีถูกกำหนดโดย li-
นับประกายชาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับการตรวจสอบของ agonism การกระทําของสารประกอบที่[35s ] gtpcs ผูกพันโดยกระทำที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาที ( สำหรับD1 และ D2 ) หรือ 20 นาที ( สำหรับ 5-ht1a ) ในบัฟเฟอร์ที่มีปฏิกิริยา50 มม. โดย pH 7.5 , MgCl2 5 มม. 1 mM EDTA NaCl 100 มิลลิเมตร และบัตรแข็ง DL 1 มม. ( 20 ) วิเคราะห์ส่วนผสม ( 200 - ll ) คอนtained 20 LG ( D2 ) หรือ 30 บาท ( สำหรับ D1 และ 5-ht1a ) ของเมมเบรนโปรตีน 0.1 nm [ 35s ] gtpcs กัวโนซีน ไตรฟอสเฟต และ 40 โดย( GDP ) ที่มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของสารประกอบ การ antago -nism ผลของสารทดสอบในการดำรงอยู่ของ100 LM skf38393 สำหรับ D1 หรือ D2 quinpirole สำหรับรีเซพเตอร์ ไม่จำเพาะรวมวัดในการแสดงตนของ guanylimid 50 - 100 โดยodiphosphate ( GPP ( NH ) P ) ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดย addi -ผ่าน 3 ml เย็นล้างบัฟเฟอร์ ( 50 มม. โดย pH 7.5 ,ชุด 5 มม. 1 mM EDTA และ 100 mM NaCl ) และ WiFi - อย่างรวดเร็วtered GF / C กับตัวกรองใยแก้ว ( whatman ) และล้างสามครั้ง ตัวกรองแห้งและกัมมันตภาพรังสีถูกกำหนดโดย Li -บริการข้อมูลนับ