Studies have shown that plant tissu

Studies have shown that plant tissues grown in vitro are vulnerable to certain degrees of genetic variations. Under the presence of potent PGR like TDZ and prolonged exposure to it, chances of induction of heritable somaclonal variations within the regenerated plantlets get increased. Furthermore, various reports are there which advocate that explants treated with TDZ develop somaclonal variability within the regenerants ( Chen et al., 1998). In commercial as well as conservation programs, such variabilities are proposed to be of much importance compared to that of heritable variations (Roy et al., 2012). In the present study, RAPD and SCoT markers were used to assess the genetic variations in the micropropagated plantlets. A total of 80 RAPD primers were screened; out of which, 13 primers gave reproducible bands. However for assessment of genetic stability of the regenerated plantlets, 7 primers which resulted in clear, unambiguous, consistently reproducible uniform and scorable bands were considered and scored. A total of 27 bands were scored; out of which, only 3 bands were polymorphic, while the rest were monomorphic (Table 3). The number of bands varied from 2 (OPK-4; OPB-1) to 6 (OPA-11) (Fig. 2A; Table 2) and their Rp value ranged from 3.66 (OPB-1) to 10 (OPH-19). The PIC value of the RAPD marker system was 0.92 ( Table 3). Using SCoT, a total of 35 primers were screened for assessment of the genetic stability of the regenerated plantlets and among them 15 primers resulted in clear, unambiguous, consistently reproducible uniform and scorable bands. A total of 57 bands were scored; out of which, only 2 bands were polymorphic, while the rest were monomorphic (Table 3). The number of bands varied from 4 (S25, S4) to 12 (S5) (Fig. 3B; Table 2) and their Rp value ranged from 4 (S25) to 12 (S5). The PIC value of the SCoT marker system was 0.76. The pooled RAPD and SCoT matrix data produced a total of 84 bands, of which 79 fragments were monomorphic (94.04%) with an average of 3.81 bands per primer ( Table 3). The PIC, correlation and determination coefficients of the pooled marker data were 0.82, 0.51 and 0.27, respectively, subsequently indicating a good fit. The Rp and PIC values indicate the efficiency of the primers used and also of the molecular marker used. Both RAPD and SCoT reveal the robustness of the marker systems which is further corroborated by the findings of Bhattacharyya et al. (2013). The degree of variability detected within the propagated plants has been found to be very less (5.95%). However workers have reported higher variability in regeneration protocols using TDZ; RAPD profiling revealed 17% dissimilarity in apple (Modgil et al., 2005). Similarly, Khoddamzadeh (2010) reported the existence of 17% genetic variability in P. bellina using RAPD among the regenerants raised from TDZ treatment at 3 mg/l. On the other hand, lesser degree of genetic variability among the regenerated plantlets has been reported in some other orchids propagated through in vitro propagation using TDZ as PGR ( Ferreira et al., 2006). The percentage of genetic variability recorded in this study was lower than those induced by TDZ in other orchids which is in agreement with the findings of Ferreira et al. (2006). RAPD technique has been extensively used to assess genetic variability generated by in vitro techniques ( Chen et al., 1998, Devi et al., 2013, Ferreira et al., 2006, Khoddamzadeh, 2010 and Roy et al., 2012); however, the successful assessment of RAPD profiles generated requires validation through repeated experiments. Thus, the degree of variability detected by RAPD technique needs to be crosschecked by using another marker system (Goto et al., 1998). In fact, sometimes RAPD fails to reveal changes in the repetitive regions of the genome of some species (Palombi and Damiano, 2002). However, it can be used for rapid evaluation of clonal variability within the micropropagated plants, by random scanning of the whole genome. On the other hand, SCoT markers reveal the genetic diversity at gene levels thus increasing the possibility of finding new alleles among a given germplasm collection making the variations revealed by it much more precise (Collard and Mackill, 2009). The quantification of polymorphic loci is an important parameter used in the genetic fidelity analysis of a population. In the present study, pooled RAPD and SCoT matrix revealed 79 out of 84 bands to be monomorphic (94.04%) whereas 5 bands were polymorphic (5.95%) showing a high degree of genetic stability within the in vitro propagated plants. Jaccard's distance matrix ranged from 0.97 to 1.00 revealing a higher degree of genetic relatedness which is also supported by the quantification data of the polymorphic loci and the findings of Roy et al. (2012) in C. giganteum. Our findings are further supported by the observations of other workers ( Devi et al., 2013, Ferreira et al., 2006, Lakshmanan et al., 2007 and Roy et al., 2012). The significance of the present findings in this study is further justified by the obtained PIC and Rp values of the primers used in the study which are significant with the optimal PIC ( Smith et al., 1997) and Rp values ( Prevost and Wilkinson, 1999). These two parameters determine the effectiveness of the markers used in the fingerprinting assay and consequently the novelty of the techniques used. This was further justified by the findings in the Mantel test where the value of correlation coefficient between RAPD and SCoT markers was significant (r = 0.51) and the value of determination coefficient was also high (r2 = 0.26) signifying that the two markers identically utilize the existing variation of the D. nobile genome.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การศึกษาได้แสดงว่า เนื้อเยื่อพืชที่ปลูกในเสี่ยงบางองศาของความแตกต่างทางพันธุกรรม ภายใต้สถานะของ PGR มีศักยภาพเช่น TDZ และเปิดรับแสงนานจะ ได้รับการเพิ่มโอกาสของการเหนี่ยวนำของ heritable somaclonal รูปภายใน regenerated plantlets นอกจากนี้ รายงานต่าง ๆ มีที่สนับสนุนว่า explants รับ TDZ พัฒนา somaclonal สำหรับความผันผวนภายใน regenerants (Chen et al., 1998) ในเชิงพาณิชย์รวมทั้งโปรแกรมการอนุรักษ์ variabilities ดังกล่าวมีการนำเสนอ มีความสำคัญมากเปรียบเทียบกับรูปแบบ heritable (รอยเอ็ด al., 2012) ในการศึกษาปัจจุบัน เครื่องหมายอาร์เอพีดีและสกอตแลนด์ถูกใช้เพื่อประเมินรูปแบบทางพันธุกรรมใน micropropagated plantlets มีฉายจำนวนไพรเมอร์อาร์เอพีดี 80 ออกจากที่ ไพรเมอร์ 13 ให้วงจำลอง อย่างไรก็ตาม สำหรับการประเมินความมั่นคงทางพันธุกรรมของ regenerated plantlets ไพรเมอร์ 7 ซึ่งส่งผลให้ใส ชัดเจน จำลองอย่างต่อเนื่องสม่ำเสมอ และ scorable วง พิจารณา และคะแนน จำนวนวง 27 ได้คะแนน ออกจากที่ เพียง 3 วงมี polymorphic ในขณะที่ส่วนเหลือได้ monomorphic (ตาราง 3) จำนวนวงดนตรีที่แตกต่างกันจาก 2 (OPK-4 OPB-1) ถึง 6 (OPA-11) (Fig. 2A ตารางที่ 2) และค่า Rp ของพวกเขาอยู่ในช่วงจาก 3.66 (OPB 1) 10 (OPH-19) ค่ารูปภาพของระบบเครื่องหมายอาร์เอพีดีเป็น 0.92 (ตาราง 3) ใช้สกอตแลนด์ จำนวนไพรเมอร์ 35 ถูกฉายสำหรับประเมินความมั่นคงทางพันธุกรรม ของ regenerated plantlets และใน หมู่พวกเขาไพรเมอร์ที่ 15 ให้ชัดเจน ชัดเจน จำลองอย่างต่อเนื่องสม่ำเสมอ และ scorable วง ได้คะแนนทั้งหมดของวง 57 ออกจากที่ เพียง 2 วงมี polymorphic ในขณะที่ส่วนเหลือได้ monomorphic (ตาราง 3) จำนวนวงดนตรีหลากหลาย 4 (S25, S4) 12 (S5) (Fig. 3B ตารางที่ 2) และค่า Rp ของพวกเขาอยู่ในช่วงตั้งแต่ 4 (S25) เป็น 12 (S5) ค่ารูปภาพของระบบเครื่องหมายสกอตแลนด์ถูก 0.76 รวมอาร์เอพีดีและสกอตแลนด์เมตริกซ์ข้อมูลผลิตจำนวน 84 วง ซึ่งกระจายตัว 79 มี monomorphic (94.04%) โดยเฉลี่ย 3.81 วงต่อรองพื้น (ตาราง 3) PIC ความสัมพันธ์ และความมุ่งมั่นที่มีสัมประสิทธิ์ของข้อมูลที่รวมเครื่องหมาย$ 0.82, 0.51 และ 0.27 ตามลำดับ ในเวลาต่อมาบ่งชี้ดีพอดี ค่า Rp และ PIC บ่งชี้ประสิทธิภาพ ของไพรเมอร์ที่ใช้ และ การใช้เครื่องหมายโมเลกุล อาร์เอพีดีและสกอตแลนด์แสดงเสถียรภาพของระบบเครื่องที่เป็น corroborated ต่อไป โดยผลการวิจัยของ Bhattacharyya et al. (2013) พบระดับความแปรผันที่พบในพืชเผยแพร่จะ น้อยมาก (5.95%) อย่างไรก็ตาม ผู้ปฏิบัติงานมีรายงานสำหรับความผันผวนสูงในโปรโตคอลฟื้นฟูใช้ TDZ สร้างโพรไฟล์อาร์เอพีดีเปิดเผย dissimilarity 17% ในแอปเปิ้ล (Modgil et al., 2005) ในทำนองเดียวกัน Khoddamzadeh (2010) รายงานมีอยู่ 17% ความแปรผันทางพันธุกรรมใน P. bellina ใช้อาร์เอพีดีระหว่าง regenerants ขึ้นจากรักษา TDZ ที่ 3 mg/l บนมืออื่น ๆ ปริญญาน้อยความแปรผันทางพันธุกรรมระหว่าง regenerated plantlets ได้รับรายงานในกล้วยอื่น ๆ ที่เผยแพร่ผ่านการเผยแพร่การเพาะเลี้ยงใช้ TDZ เป็น PGR (Ferreira et al., 2006) เปอร์เซ็นต์ของความแปรผันทางพันธุกรรมที่ถูกบันทึกไว้ในการศึกษานี้ได้ต่ำกว่าที่เหนี่ยวนำ โดย TDZ ในกล้วยไม้อื่น ๆ ซึ่งยังคงพบของ Ferreira et al. (2006) เทคนิคอาร์เอพีดีได้อย่างกว้างขวางใช้เพื่อประเมินความแปรผันทางพันธุกรรมที่สร้างขึ้น โดยเทคนิคการเพาะเลี้ยง (Chen et al., 1998, al. เทวีร้อยเอ็ด 2013, Ferreira et al., 2006, Khoddamzadeh, 2010 และรอยเอ็ด al., 2012); อย่างไรก็ตาม การประเมินความสำเร็จของอาร์เอพีดีโพรไฟล์ที่สร้างขึ้นจำเป็นต้องสอบผ่านการทดลองซ้ำ ดังนั้น ระดับความแปรผันที่ตรวจพบ โดยเทคนิคอาร์เอพีดีต้องเป็น crosschecked โดยใช้ระบบเครื่องหมายอื่น (ไปร้อยเอ็ด al., 1998) ในความเป็นจริง บางครั้งอาร์เอพีดีล้มเหลวในการเปิดเผยการเปลี่ยนแปลงในภูมิภาคซ้ำของจีโนมของบางชนิด (Palombi และ Damiano, 2002) อย่างไรก็ตาม จะสามารถใช้สำหรับการประเมินอย่างรวดเร็วของความแปรผัน clonal ภายในพืช micropropagated โดยสุ่มสแกนของกลุ่มทั้งหมด บนมืออื่น ๆ สกอตแลนด์เครื่องหมายแสดงความหลากหลายทางพันธุกรรมที่ยีนระดับการเพิ่มของหา alleles ใหม่ระหว่างชุด germplasm กำหนดทำให้รูปแบบที่เปิดเผยโดยแม่นยำมาก (Collard และ Mackill, 2009) นับของ polymorphic loci เป็นพารามิเตอร์สำคัญที่ใช้ในการวิเคราะห์คุณภาพทางพันธุกรรมของประชากร ในการศึกษาปัจจุบัน เมตริกซ์อาร์เอพีดีและสกอตแลนด์รวม 79 จากวง 84 เป็น monomorphic (94.04%) ในขณะที่ 5 วงมี polymorphic (5.95%) ที่เปิดเผยแสดงระดับสูงของทางพันธุกรรมความมั่นคงภายในเพาะเลี้ยงพืชที่เผยแพร่ อยู่ในช่วงจาก 0.97 เพื่อให้เปิดเผยข้อมูลในระดับที่สูงของ relatedness พันธุกรรมซึ่งยังได้รับการสนับสนุน โดยข้อมูลนับของ polymorphic loci และผลการวิจัยของรอยเอ็ด al. (2012) ใน C. giganteum 1.00 เมทริกซ์ระยะของ Jaccard ผลการวิจัยของเราเพิ่มเติมสนับสนุน โดยข้อสังเกตของคนอื่น (เทวีร้อยเอ็ด al., 2013, Ferreira et al., 2006 กร et al., 2007 และรอยเอ็ด al., 2012) ความสำคัญของการนำเสนอผลการวิจัยในการศึกษานี้เป็นธรรม โดยได้รับรูปภาพและ Rp ค่าของไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาที่สำคัญ มีรูปภาพที่ดีที่สุด (Smith et al., 1997) และค่า Rp (Prevost และ Wilkinson, 1999) เพิ่มเติม พารามิเตอร์เหล่านี้สองตรวจสอบประสิทธิภาพของเครื่องหมายที่ใช้ในการทดสอบ fingerprinting และดังนั้นนวัตกรรมของเทคนิคที่ใช้ นี้เป็นธรรมเพิ่มเติม โดยค้นพบในการทดสอบหิ้งที่ค่าของสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ระหว่างเครื่องหมายอาร์เอพีดีและสกอตแลนด์ได้อย่างมีนัยสำคัญ (r = 0.51) และค่าของสัมประสิทธิ์ความมุ่งมั่นสูง (r2 = 0.26) บ่งบอกว่า เครื่องหมายที่สองเหมือนกันใช้รูปแบบที่มีอยู่ของจีโนมไบล์ D.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การศึกษาพบว่าเนื้อเยื่อพืชที่ปลูกในหลอดทดลองที่เสี่ยงต่อการองศาบางอย่างของการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรม ภายใต้การปรากฏตัวของ PGR ที่มีศักยภาพเช่น TDZ และสัมผัสเป็นเวลานานที่จะได้โอกาสในการเหนี่ยวนำของการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมภายในเซลล์ร่างกายต้นสร้างใหม่ได้รับการเพิ่มขึ้น นอกจากนี้รายงานต่างๆที่จะมีชิ้นส่วนที่สนับสนุนการรับการรักษาด้วย TDZ พัฒนาความแปรปรวนของเซลล์ร่างกายภายในเพาะนี้ (Chen et al., 1998) ในเชิงพาณิชย์เช่นเดียวกับโปรแกรมการอนุรักษ์ variabilities ดังกล่าวจะเสนอให้มีความสำคัญมากเมื่อเทียบกับที่ของการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรม (รอย et al., 2012) ในการศึกษาปัจจุบัน RAPD และเครื่องหมายชาวสกอตถูกนำมาใช้ในการประเมินการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมในเนื้อเยื่อของต้นกล้า ทั้งหมด 80 ไพรเมอร์อาร์เอพีถูกคัดเลือก; ออกจากที่ 13 ไพรเมอร์ให้วงดนตรีที่ทำซ้ำได้ อย่างไรก็ตามสำหรับการประเมินของความมั่นคงทางพันธุกรรมของต้นกล้าสร้างใหม่ 7 ไพรเมอร์ซึ่งส่งผลให้ชัดเจนโปร่งใสทำซ้ำอย่างต่อเนื่องสม่ำเสมอและวงดนตรีที่ได้รับการพิจารณา scorable และคะแนน ทั้งหมด 27 วงดนตรีที่ถูกยิง; ออกจากที่เพียง 3 วงดนตรีที่เป็น polymorphic ในขณะที่ส่วนที่เหลือเป็น monomorphic (ต​​ารางที่ 3) จำนวนวงดนตรีที่แตกต่างกันจาก 2 (OPK-4; OPB-1) ถึง 6 (OPA-11) (รูปที่ 2A. ตารางที่ 2) และความคุ้มค่ารูเปียห์ของพวกเขาตั้งแต่ 3.66 (OPB-1) ถึง 10 (OPH-19) . ค่า PIC ของระบบเครื่องหมาย RAPD เป็น 0.92 (ตา​​รางที่ 3) การใช้สกอตทั้งหมด 35 ไพรเมอร์ที่ได้รับการคัดกรองการประเมินผลของความมั่นคงทางพันธุกรรมของต้นกล้าสร้างใหม่และในหมู่พวกเขา 15 ไพรเมอร์ส่งผลให้เกิดความชัดเจนโปร่งใสทำซ้ำอย่างต่อเนื่องสม่ำเสมอและวงดนตรีที่ scorable รวม 57 วงดนตรีที่ถูกยิง; ออกจากที่เพียง 2 วงดนตรีที่เป็น polymorphic ในขณะที่ส่วนที่เหลือเป็น monomorphic (ต​​ารางที่ 3) จำนวนวงดนตรีที่แตกต่างกันจาก 4 (S25, S4) ถึง 12 (S5) (รูป 3B. ตารางที่ 2) และความคุ้มค่ารูเปียห์ของพวกเขาตั้งแต่ 4 (S25) ถึง 12 (S5) ค่า PIC ของระบบเครื่องหมายชาวสกอตเป็น 0.76 RAPD รวบรวมข้อมูลและเมทริกซ์ชาวสกอตที่ผลิตจำนวน 84 วงที่ 79 เศษเป็น monomorphic (94.04%) มีค่าเฉลี่ยของวงดนตรีที่ 3.81 ต่อไพรเมอร์ (ตารางที่ 3) รูปที่มีความสัมพันธ์และความมุ่งมั่นสัมประสิทธิ์ของข้อมูลเครื่องหมายสำรองเป็น 0.82, 0.51 และ 0.27 ตามลำดับต่อมาแสดงให้เห็นเป็นแบบที่ดี ค่ารูเปียห์และ PIC บ่งบอกถึงประสิทธิภาพของไพรเมอร์ที่ใช้และของเครื่องหมายโมเลกุลที่ใช้ ทั้งสอง RAPD และชาวสกอตเปิดเผยความทนทานของระบบเครื่องหมายที่มีการยืนยันต่อไปโดยผลการวิจัยของ Bhattacharyya et al, (2013) ระดับของความแปรปรวนที่ตรวจพบภายในโรงงานขยายพันธุ์ที่ได้รับพบว่ามีมากน้อย (5.95%) อย่างไรก็ตามคนงานได้มีการรายงานความแปรปรวนที่สูงขึ้นในการฟื้นฟูโดยใช้โปรโตคอล TDZ; โปรไฟล์ดีเอ็นเอเผย 17% ความแตกต่างกันในแอปเปิ้ล (Modgil et al., 2005) ในทำนองเดียวกัน Khoddamzadeh (2010) รายงานการดำรงอยู่ของความแปรปรวนทางพันธุกรรม 17% ในพี Bellina ใช้ RAPD หมู่เพาะที่เกิดขึ้นจากการรักษา TDZ ที่ 3 มิลลิกรัม / ลิตร ในทางกลับกันในระดับที่น้อยกว่าของความแปรปรวนทางพันธุกรรมของต้นกล้าสร้างใหม่ที่ได้รับการรายงานในบางกล้วยไม้อื่น ๆ ที่แพร่กระจายผ่านการขยายพันธุ์ในหลอดทดลองโดยใช้ TDZ เป็น PGR (Ferreira et al., 2006) ร้อยละของความแปรปรวนทางพันธุกรรมที่บันทึกไว้ในการศึกษาครั้งนี้ต่ำกว่าที่เกิดจาก TDZ ในกล้วยไม้อื่น ๆ ที่อยู่ในข้อตกลงกับผลการวิจัยของ Ferreira et al, (2006) เทคนิคอาร์เอพีได้รับการใช้อย่างกว้างขวางในการประเมินความแปรปรวนทางพันธุกรรมที่เกิดจากในหลอดทดลองเทคนิค (Chen et al, 1998, เทพ et al, 2013, Ferreira et al, 2006 Khoddamzadeh 2010 และรอย et al, 2012....); แต่การประเมินความสำเร็จในการสร้างโปรไฟล์ดีเอ็นเอต้องมีการตรวจสอบผ่านการทดลองซ้ำแล้วซ้ำอีก ดังนั้นระดับของความแปรปรวนที่ตรวจพบโดยเทคนิค RAPD จะต้องมีการ crosschecked โดยใช้ระบบเครื่องหมายอื่น (ไป et al., 1998) ในความเป็นจริงบางครั้ง RAPD ล้มเหลวที่จะเปิดเผยการเปลี่ยนแปลงในภูมิภาคซ้ำของจีโนมบางชนิด (Palombi และ Damiano, 2002) แต่ก็สามารถนำมาใช้สำหรับการประเมินผลอย่างรวดเร็วของความแปรปรวน clonal ภายในเนื้อเยื่อของพืชโดยการสแกนแบบสุ่มของทั้งจีโนม บนมืออื่น ๆ เครื่องหมายชาวสกอตเผยให้เห็นความหลากหลายทางพันธุกรรมในระดับยีนซึ่งจะเป็นการเพิ่มความเป็นไปได้ในการหาอัลลีลคอลเลกชันใหม่ในหมู่เชื้อพันธุกรรมที่ได้รับการทำรูปแบบเปิดเผยโดยมันได้อย่างแม่นยำมากขึ้น (กระหล่ำปลีและ Mackill 2009) ปริมาณของตำแหน่ง polymorphic เป็นตัวแปรที่สำคัญที่ใช้ในการวิเคราะห์ความจงรักภักดีทางพันธุกรรมของประชากร ในการศึกษาปัจจุบัน pooled RAPD และเมทริกซ์ชาวสกอตเผย 79 จาก 84 วงดนตรีที่จะเป็น monomorphic (94.04%) ในขณะที่ 5 วงดนตรีที่เป็น polymorphic (5.95%) แสดงให้เห็นถึงระดับสูงของความมั่นคงทางพันธุกรรมภายในในหลอดทดลองขยายพันธุ์พืช เมทริกซ์ระยะ Jaccard ของอยู่ในช่วง 0.97-1.00 เผยให้เห็นระดับสูงของความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมที่ได้รับการสนับสนุนโดยข้อมูลปริมาณของตำแหน่ง polymorphic และผลการวิจัยของรอย et al, (2012) ใน C. giganteum ผลการวิจัยของเราได้รับการสนับสนุนเพิ่มเติมจากการสังเกตของคนงานอื่น ๆ (เทพ et al., 2013 Ferreira et al., 2006 Lakshmanan et al., 2007 และรอย et al., 2012) ความสำคัญของการค้นพบที่อยู่ในการศึกษาครั้งนี้เป็นธรรมต่อไปโดยได้รับ PIC และค่ารูเปียห์ของไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาที่มีความสำคัญกับที่ดีที่สุดรูป (สมิ ธ et al., 1997) และค่ารูเปียห์ (Prevost และวิลกินสัน, 1999 ) ทั้งสองพารามิเตอร์ตรวจสอบประสิทธิภาพของตัวบ่งชี้ที่ใช้ในการทดสอบการพิมพ์ลายนิ้วมือและทำให้มีความแปลกใหม่ของเทคนิคที่ใช้ นี้ได้รับการพิสูจน์ต่อไปโดยผลการวิจัยในการทดสอบ Mantel ที่ค่าของค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ระหว่าง RAPD และเครื่องหมายชาวสกอตอย่างมีนัยสำคัญ (r = 0.51) และมูลค่าของค่าสัมประสิทธิ์ความมุ่งมั่นก็ยังสูง (r2 = 0.26) แสดงว่าทั้งสองเครื่องหมายเหมือนกันใช้ รูปแบบที่มีอยู่ของดีจีโนมบิเล่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มีการศึกษาแสดงให้เห็นว่าเนื้อเยื่อพืชที่ปลูกในหลอดทดลอง มีความเสี่ยงต่อระดับ การเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรม ภายใต้สถานะของต้า pgr ชอบดัดแปลง และเปิดรับแสงนานแล้ว โอกาสของการเปลี่ยนแปลงที่สามารถเหนี่ยวนำกลไกภายในต้นได้รับเพิ่มขึ้น นอกจากนี้รายงานต่างๆที่สนับสนุนว่ามีเนื้อเยื่อที่ได้รับการดัดแปลงพัฒนากลไกภายใน regenerants ( Chen et al . , 1998 ) ในโปรแกรมเชิงพาณิชย์ ตลอดจนอนุรักษ์ เช่น ผันเป็นเสนอเป็นของสำคัญมากเมื่อเทียบกับที่ของรูปแบบสามารถ ( รอย et al . , 2012 ) ในการศึกษาครั้งนี้เทคนิค RAPD และหริภุญชัยเครื่องหมายถูกใช้เพื่อประเมินความหลากหลายทางพันธุกรรมใน micropropagated ได้ดีที่สุด ทั้งหมด 80 RAPD primers ออกมี ; ที่ 13 ไพรเมอร์ที่ให้แถบซ้ํา อย่างไรก็ตาม สำหรับการประเมินความมั่นคงทางพันธุกรรมของต้นได้ 7 ชนิดที่ทำให้ชัดเจน , ชัดเจน , ชุด ) อย่างต่อเนื่องและวงดนตรี scorable ได้รับการพิจารณาและให้คะแนน .ทั้งหมด 27 วงคะแนน ; ของที่เพียง 3 วง ( polymorphic , ในขณะที่ส่วนที่เหลือเป็น monomorphic ( ตารางที่ 3 ) จำนวนของแถบที่แตกต่างกันจาก 2 ( opk-4 ; opb-1 ) ถึง 6 ( opa-11 ) ( รูปที่ 2A ; ตาราง 2 ) และค่า RP ของพวกเขาระหว่าง 3.66 ( opb-1 ) ถึง 10 ( oph-19 ) ค่าเครื่องหมาย RAPD และรูปภาพของระบบเท่ากับ 0.92 ( ตารางที่ 3 ) ชาวสก็อตที่ใช้ ,ทั้งหมด 35 ชนิดคัดกรองประเมินเสถียรภาพทางพันธุกรรมของต้นและในหมู่พวกเขาได้ 15 ชนิด ส่งผลให้ชัดเจน , ชัดเจน , ชุด ) อย่างต่อเนื่องและวงดนตรี scorable . ทั้งหมด 57 วงคะแนน ; ออกซึ่งมี 2 วง ( polymorphic , ในขณะที่ส่วนที่เหลือเป็น monomorphic ( ตารางที่ 3 ) จำนวนวงดนตรีหลากหลายจาก 4 ( S25 S4 , ) 12 ( S5 ) ( ภาพประกอบ3B ; ตาราง 2 ) และค่า RP ของพวกเขาตั้งแต่ 4 ( S25 ) 12 ( S5 ) ค่ารูประบบเครื่องหมายชาวสก็อตที่ดูแล รวมเทคนิค RAPD และข้อมูลหริภุญชัย Matrix ผลิตรวม 84 วง ซึ่งมีชิ้นส่วนถูก monomorphic ( 94.04 % ) โดยเฉลี่ย 3.81 วงต่อ ไพรเมอร์ ( ตารางที่ 3 ) รูป สหสัมพันธ์ และการวิเคราะห์ข้อมูลโดยรวมเครื่องหมายเท่ากับ 0.82 , 0.51 และ 0.27 ,ตามลำดับ ภายหลังแสดงพอดี RP และค่ารูปบ่งชี้ประสิทธิภาพของรองพื้นที่ใช้ และยัง ของเครื่องหมายโมเลกุลที่ใช้ ทั้งเทคนิค RAPD และลอยนวล เผยความแข็งแกร่งของเครื่องหมายระบบ ซึ่งเป็นการเพิ่มเติมยืนยันโดยผล bhattacharyya et al . ( 2013 ) ระดับของความแปรปรวนที่ตรวจพบภายในขยายพันธุ์พืชที่ได้รับพบได้น้อยมาก ( 595% ) อย่างไรก็ตาม แรงงาน ได้รายงานความแปรปรวนสูงในการฟื้นฟูโปรโตคอลใช้ TDZ ; เพียงร้อยละ 17 ในแอปเปิ้ลจะเปิดเผยข้อมูล ( modgil et al . , 2005 ) ในทํานองเดียวกัน khoddamzadeh ( 2553 ) รายงานการดำรงอยู่ของ 17% การผันแปรทางพันธุกรรมในหน้า bellina โดยใช้ RAPD ของ regenerants เพิ่มขึ้น จากการรักษายอดที่ 3 มิลลิกรัม / ลิตร บนมืออื่น ๆระดับน้อยของความแปรปรวนทางพันธุกรรมของต้นกลับมาได้รับการรายงานในกล้วยไม้บางอื่น ๆผ่านการใช้ไปในการดัดแปลงเป็น pgr ( Ferreira et al . , 2006 ) เปอร์เซ็นต์ของการผันแปรทางพันธุกรรมการบันทึกไว้ในการศึกษาต่ำกว่ายอดในอื่น ๆของกล้วยไม้ ซึ่งสอดคล้องกับผลการวิจัยของ แฟร์ไรร่า และ อัล ( 2006 )เทคนิค RAPD ได้ถูกใช้อย่างกว้างขวางเพื่อประเมินความแปรปรวนทางพันธุกรรมที่เกิดจากการเพาะเทคนิค ( Chen et al . , 1998 , เทวี et al . , 2013 , เฟร์ et al . , 2006 , khoddamzadeh 2010 และรอย et al . , 2012 ) อย่างไรก็ตาม การประเมินความสำเร็จของการสร้างโปรไฟล์ด้วยซ้ำ ต้องผ่านการทดลอง ดังนั้นระดับของความแปรปรวนพบโดยเทคนิค RAPD ต้อง crosschecked โดยใช้เครื่องหมายระบบอื่น ( Goto et al . , 1998 ) ในความเป็นจริง บางครั้งเพียงล้มเหลวในการเปิดเผยการเปลี่ยนแปลงในภูมิภาคซ้ำของพันธุกรรมบางชนิด ( และ palombi ดอมีอาโน่ , 2002 ) อย่างไรก็ตาม มันสามารถใช้สำหรับการประเมินอย่างรวดเร็วของรูปแบบความแปรปรวนภายใน micropropagated พืชโดยการสแกนของจีโนมทั้งหมด บนมืออื่น ๆ , หริภุญชัยเครื่องหมายเปิดเผยความหลากหลายทางพันธุกรรมในระดับยีน ดังนั้น การเพิ่มความเป็นไปได้ของการค้นหาอัลลีลใหม่ในหมู่คอลเลกชันได้รับพันธุกรรมทำให้รูปแบบที่พบมากที่แม่นยำมากขึ้น ( ผู้สื่อข่าว และ แม็คคิล , 2009 )ส่วนปริมาณของที่มีสถานะเป็นพารามิเตอร์ที่ใช้ในการวิเคราะห์พันธุกรรมความจงรักภักดีของประชากร ในการศึกษาด้านเทคนิค RAPD และหริภุญชัยเมทริกซ์พบ 79 จาก 84 วงจะ monomorphic ( 94.04 % ) ในขณะที่มีจำนวน 5 แถบ ( 5.95 % ) แสดงระดับสูงของความมั่นคงทางพันธุกรรมภายในการเพาะขยายพันธุ์พืช คือระยะห่างระหว่าง Jaccard เมทริกซ์ 0.97% 100 เปิดเผยระดับสูงของพันธุกรรมสัมพันธ์ซึ่งได้รับการสนับสนุนโดยปริมาณข้อมูลจำนวนของตำแหน่งและพบรอย et al . ( 2012 ) ในซี giganteum . ผลการวิจัยของเรามีการสนับสนุนเพิ่มเติมโดยการสังเกตของคนงานอื่น ๆ ( เทวี et al . , 2013 , เฟร์ et al . , 2006 อาจมองเห็นได้ที่ et al . , 2007 และรอย et al . , 2012 )ความสำคัญของการวิจัยปัจจุบันในการศึกษาเพิ่มเติมเป็นธรรมโดยได้รับรูปและค่า RP ของไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษา ซึ่งมีผลกับรูปที่เหมาะสม ( Smith et al . , 1997 ) และค่านิยม ( เพรโวสต์ และฟิลิปปินส์ วิลกินสัน , 1999 )สองพารามิเตอร์ที่ศึกษาประสิทธิภาพของเครื่องหมายที่ใช้ในการตรวจสอบลายนิ้วมือในดังนั้นนวัตกรรมของเทคนิคที่ใช้ นี้ยังชอบธรรมโดยการค้นพบในหิ้งทดสอบที่ค่าของสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ระหว่างเทคนิค RAPD และหริภุญชัยเครื่องหมายอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( r = 0.51 ) และค่าสัมประสิทธิ์การตัดสินใจยังสูง ( R2 = 026 ) แสดงว่าทั้งสองเครื่องหมายเหมือนกันใช้ที่มีอยู่ รูปแบบของจีโนม D . โนบิเล่ .