Pooled hepatopancreases of Pacific

Pooled hepatopancreases of Pacific white shrimp were obtained from the Sea wealth frozen food Co., Ltd., Songkhla province. Samples were placed in polyethylene bag and imbedded in a polystyrene box containing ice with an ice/sample ratio of 2:1 (w/w) during transportation for approximately 2 h. Upon arrival, the samples were stored at −18 °C until use, but not longer than 1 month.

Prior to extraction of proteases, hepatopancreases of Pacific white shrimp were powdered in liquid nitrogen. Samples were then defatted by stirring in three volumes of acetone at −20 °C for 30 min according to the method of Kishimura and Hayashi (2002). The homogenate was filtered in vacuo on Whatman No. 1 filter paper (Whatman International Ltd., Maidstone, England). The residue obtained was then stirred in two volumes of acetone at −20 °C for another 30 min, and then the residue was left at room temperature until dried and free of acetone odour.

To prepare the crude extract, acetone powder was suspended in 10 mM Tris–HCl, pH 8.0 containing 1 mM CaCl2 at a ratio of 1:50 (w/v) and stirred continuously at 4 °C for 3 h. The suspension was centrifuged for 10 min at 4 °C at 10,000×g to remove the tissue debris using a refrigerated centrifuge (Beckman Coulter, Avanti J-E Centrifuge, Fullerton, CA, USA). The supernatant was lyophilised using a SCANVAC CoolSafe™ freeze-dryer (CoolSafe 55, ScanLaf A/S, Lynge, Denmark). Before use, the lyophilised sample (10 g) was dissolved with 50 ml of cold distilled water (4 °C) and the solution is referred to as “crude extract”.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Hepatopancreases รวมของกุ้งขาวได้รับจากทะเลอีกมากมายให้แช่แข็งอาหาร Co., Ltd. จังหวัดสงขลา ตัวอย่างมีอยู่ในถุงพลาสติก และฝังตัวในกล่องโฟมที่ประกอบด้วยน้ำแข็ง ด้วยอัตราส่วนน้ำแข็ง/ตัวอย่าง 2:1 (w/w) ในระหว่างการขนส่งสำหรับประมาณ 2 h เมื่อมาถึง ตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ −18 ° C จนถึงใช้ แต่ไม่เกิน 1 เดือนก่อนสกัด proteases, hepatopancreases ของกุ้งขาวมีผงในไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างที่แล้วสกัดไขมันทาง โดยกวนในสามปริมาณของอะซีโตนที่ −20 ° C สำหรับ 30 นาทีตามวิธีของ Kishimura และฮายาชิ (2002) Homogenate มีกรองใน vacuo บนกระดาษกรอง Whatman No. 1 (Whatman อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด เมดสโตน อังกฤษ) สารตกค้างที่ได้รับแล้วได้ถูกกวนในสองปริมาณของอะซีโตนที่ −20 ° C ในอีก 30 นาที และสารตกค้างถูกทิ้งที่อุณหภูมิห้องจนกว่าจะแห้ง และไม่มีกลิ่นอะซีโตนการเตรียมสารสกัดหยาบ อะซิโตนแป้งถูกหยุดชั่วคราวใน 10 มม.ตรี – HCl, pH 8.0 mM 1 CaCl2 ที่อัตราส่วน 1:50 (w/v) ที่ประกอบด้วย และกวนอย่างต่อเนื่องที่ 4 ° C สำหรับ 3 h การระงับได้ centrifuged สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ° C 10, 000 ซื้อ g เอาเศษเนื้อเยื่อที่ใช้เครื่องหมุนเหวี่ยงควบคุมอุณหภูมิ (Beckman Coulter เครื่องหมุนเหวี่ยง J-E เรียนโรส ฟูลเลอร์ตัน CA, USA) Supernatant ถูก lyophilised ใช้เป็น SCANVAC CoolSafe ™หยุดเป่า (CoolSafe 55, ScanLaf a/s, Lynge เดนมาร์ก) ก่อนใช้ ตัวอย่าง lyophilised (10 g) ถูกส่วนยุบกับ 50 ml ของน้ำกลั่นเย็น (4 ° C) และโซลูชั่นจะเรียกว่า "สารสกัดหยาบ"

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Pooled hepatopancreases กุ้งขาวแปซิฟิกที่ได้รับจากความมั่งคั่งทะเลแช่แข็งอาหาร จำกัด จังหวัดสงขลา ตัวอย่างถูกวางไว้ในถุงพลาสติกชนิดและฝังในกล่องโฟมที่มีน้ำแข็งที่มีน้ำแข็ง / อัตราส่วนตัวอย่าง 2: 1 (w / w) ในระหว่างการขนส่งประมาณ 2 ชั่วโมง เมื่อมาถึงตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ที่ -18 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน แต่ไม่เกิน 1 เดือน. ก่อนที่จะมีการสกัดโปรตีเอส, hepatopancreases กุ้งขาวแวนถูกผงในไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างโปรตีนแล้วโดยกวนในสามเล่มของอะซีโตนที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีตามวิธีการของ Kishimura และฮายาชิ (2002) homogenate ถูกกรองในสุญญากาศในเบอร์หมายเลข 1 กระดาษกรอง (เบอร์อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด เมดสโตนอังกฤษ) ที่เหลือได้ถูกกวนแล้วในสองเล่มของอะซีโตนที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอีก 30 นาทีและจากนั้นที่เหลือถูกทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องจนแห้งและปราศจากกลิ่นอะซิโตน. เพื่อเตรียมความพร้อมสารสกัดผงอะซีโตนถูกระงับใน 10 มิลลิ Tris-HCl, pH 8.0 ที่มี 1 มิลลิ CaCl2 ในอัตราส่วน 01:50 (ที่ w / v) และกวนอย่างต่อเนื่องที่ 4 ° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง ที่ถูกระงับการปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ° C ที่ 10,000 × g เพื่อเอาเศษเนื้อเยื่อโดยใช้เครื่องหมุนเหวี่ยงตู้เย็น (Beckman Coulter, JE Avanti เครื่องปั่นเหวี่ยง Fullerton, CA, USA) สารละลายที่ได้รับการ lyophilised ใช้ SCANVAC CoolSafe ™แช่แข็งเครื่องเป่า (CoolSafe 55, ScanLaf A / S, Lynge, เดนมาร์ก) ก่อนที่จะใช้ตัวอย่าง lyophilised (10 กรัม) ก็เลือนหายไป 50 มล. น้ำกลั่นเย็น (4 ° C) และการแก้ปัญหาที่ถูกเรียกว่า "สารสกัดจากน้ำมันดิบ"

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รวม hepatopancreases ของกุ้งขาวแปซิฟิก ได้จากความมั่งคั่งทะเลแช่แข็งอาหาร จำกัด จังหวัดสงขลา ตัวอย่างอยู่ในถุงพลาสติก และฝังอยู่ในกล่องสไตรีนที่มีน้ำแข็งกับน้ำแข็ง / ตัวอย่างในอัตราส่วน 2 : 1 ( w / w ) ในระหว่างการขนส่ง ประมาณ 2 ชั่วโมง เมื่อมาถึงจำนวน 18 ° C อุณหภูมิ−จนกว่าจะใช้ แต่ ไม่เกิน 1 เดือน

ก่อนแยกทาง hepatopancreases ของ , กุ้งขาวมีผงในไนโตรเจนเหลว จำนวน 3 เล่ม แล้วสกัดด้วยกวนในอะซิโตนที่ 20 −° C นาน 30 นาทีตามวิธีการของ kishimura และ ฮายาชิ ( 2002 ) โดยแยกเป็นกรองใน vacuo บน whatman 1 ไส้กรองกระดาษ ( whatman อินเตอร์เนชั่นแนล , Maidstone , อังกฤษ )กากที่ได้มาแล้วกวนสองเล่ม 20 ° C สำหรับ บริษัท เวสเทิร์น อีก 30 นาที แล้วทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องจนกากแห้ง และฟรี สำหรับกลิ่น

เตรียมสารสกัดอะซีโตน , ผงแขวนลอยใน 10 มม. นอกจากนี้ – HCl , pH 8.0 มี 1 มิลลิเมตร ผลิตที่ อัตราส่วน 1 : 50 ( w / v ) และคนอย่างต่อเนื่องใน 4 ° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงระงับได้ระดับ 10 นาทีที่ 4 ° C ที่ 10 × G เพื่อเอาเนื้อเยื่อเศษที่ใช้เหวี่ยงเย็น ( Beckman Coulter ลุกขึ้น j-e centrifuge , Fullerton , CA , USA ) และน่าน เป็น lyophilised ใช้ scanvac coolsafe ™ตรึงแห้ง ( coolsafe 55 , scanlaf A / S lynge , เดนมาร์ก ) ก่อนใช้งานการ lyophilised ตัวอย่าง ( 10 กรัม ) ละลายกับน้ำเย็น 50 มิลลิลิตร ( 4 ° C ) และโซลูชันเรียกว่า " แยก " ดิบ