PCR Amplification of 16S rRNA and S

PCR Amplification of 16S rRNA and Sequence Analysis Genomic DNA from each isolate was used as a template for amplifying the 16s RNA gene fragment by PCR using forward primer 27F(5' GAGTTTGATC MTGGCTCAG 3') and reverse primer 1492r(5'-GGTTACCTTGTTAC GACTT-3'). The 50 ul PCR mixture consisted of 25 Hl DreamTaq Green PCR Master Mix 2 x(Thermoscien tific), 2 ul Genomic DNA, 1 HM of each primer and 21 ul nuclease-free water. The reaction was carried out accordin to Gronemeyer et al. [13] in a Esco Swift M MaxPro Thermal cycler. More specifically, PCR cycle steps were as follows: initial denaturation a 95 °C for 4 min. 35 cycles at 95 oc for 1 min, 50 °C for 30 s and 72 °C for 1 min, and final extension at 72 oC for 10 min and holding at 4 °C. The products were separated by electrophoresis in agarose gels stained with ethidium bromide and visualized under UV light. Purification and sequencing PCR fragments were carried out at Inqaba Biotec(Pretoria, South Africa).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขยาย PCR 16S rRNA และวิเคราะห์ลำดับ Genomic DNA จากแต่ละแยกใช้เป็นแม่แบบสำหรับมือ 16s อาร์เอ็นเอยีนส่วน โดยใช้รองพื้นไปข้างหน้า 27F PCR (5' GAGTTTGATC MTGGCTCAG 3) และกลับพื้น 1492r (5'-GGTTACCTTGTTAC GACTT-3') ส่วนผสม PCR 50 ul ประกอบด้วย x(Thermoscien tific) Hl DreamTaq เขียว PCR หลักผสม 2 25, 2 ul Genomic DNA, HM 1 แต่ละพื้น และน้ำฟรี nuclease ul 21 ทำปฏิกิริยาออก accordin เพื่อ Gronemeyer et al. [13] ใน cycler เอสโก Swift M MaxPro ร้อน อื่น ๆ โดยเฉพาะ PCR วงจรขั้นตอนมีดังนี้: denaturation เริ่มต้น 95 ° C สำหรับ 4 นาที 35 รอบที่ 95 องศาเซลเซียสใน 1 นาที 50 ° C สำหรับ 30 s และ 72 องศาเซลเซียสใน 1 นาที และส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสใน 10 นาทีและถือที่ 4 องศาเซลเซียส ผลิตภัณฑ์ถูกคั่น ด้วย electrophoresis ใน agarose เจสีกับโบรไมด์ ethidium และ visualized ภายใต้แสง UV ฟอกและบางส่วนของ PCR ลำดับได้ดำเนินออกที่ Inqaba Biotec(Pretoria, South Africa)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขยาย PCR ของ 16S rRNA และวิเคราะห์ลำดับจีโนมดีเอ็นเอจากแยกแต่ละคนถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบสำหรับปรากฏการณ์ 16s ส่วนยีน RNA PCR โดยใช้ไพรเมอร์ไปข้างหน้า 27 (5 'GAGTTTGATC MTGGCTCAG 3') และย้อนกลับ 1492r ไพรเมอร์ (5'-GGTTACCTTGTTAC GACTT- 3) 50 ยู PCR ส่วนผสมประกอบด้วย 25 Hl DreamTaq สีเขียว PCR โทผสม 2 x (Tific Thermoscien) 2 ยูจีโนมดีเอ็นเอ 1 HM ของแต่ละไพรเมอร์และ 21 ยู Nuclease น้ำฟรี ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการไป Accordin Gronemeyer et al, [13] ใน Esco Swift M Maxpro Cycler ความร้อน โดยเฉพาะอย่างยิ่งขั้นตอนวงจร PCR มีดังนี้ denaturation เริ่มต้น 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาที 35 รอบที่ 95 oc เวลา 1 นาที 50 ° C เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีและการถือครองที่ 4 ° C ผลิตภัณฑ์ที่ถูกแยกจากกันโดย electrophoresis ในเจล agarose ย้อมด้วย ethidium bromide และมองเห็นภายใต้แสงยูวี การทำให้บริสุทธิ์และเศษ PCR ลำดับได้ดำเนินการใน Inqa​​ba ไบโอเทค (Pretoria, แอฟริกาใต้)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยีน 16S rRNA และการสื่อสารการวิเคราะห์ลำดับเบสดีเอ็นเอจากแต่ละแยก ถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับยีน 16S RNA amplifying เบสโดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ 27f ไปข้างหน้า ( 5 ' gagtttgatc mtggctcag 3 ' ) และย้อนกลับ ไพรเมอร์ 1492r ( 5 ' - ggttaccttgttac gactt-3 ' ) 50 เทคนิคผสม จำนวน 25 , UL dreamtaq สีเขียว PCR Master Mix 2 x ( thermoscien tific UL genomic DNA ) , 2 ,1 หาของแต่ละสีและ 21 UL นิวเคลียสฟรีน้ำ ปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการ Accordin เพื่อ gronemeyer et al . [ 13 ] ใน ESCO Swift M แม็กซ์โปร Thermal cycler . มากขึ้นโดยเฉพาะรอบ PCR ขั้นตอนดังนี้ ( เริ่มต้นที่ 95 องศา C เป็นเวลา 4 นาที 35 รอบ 95 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที , 50 ° C เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที และเบอร์สุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที และอยู่ที่ 4 องศาผลิตภัณฑ์ที่แยกได้จากตัวอย่างในกาโรสเจลเปื้อนทิเดียมโบรไมด์และมองเห็นภายใต้แสงยูวี การทำให้บริสุทธิ์และเศษจากการทดลองที่ inqaba ไบโอเทค ( พริทอเรีย , แอฟริกาใต้ )