2.3. Preparation of protein for liq

2.3. Preparation of protein for liquid-chromatography tandem mass spectrometry (LC–MS/MS)

Protein preparation was carried out using a method proposed by Le Bihan et al. (2011). Ten mg of DSPC was resuspended in 50 μl of distilled water (dH2O), followed by denaturation with 250 μl of 8 M urea and dilution with 950 μl dH2O, prior to trichloroacetic acid (TCA) precipitation with 310 μl of 100% TCA, 1250 μl methanol and 625 μl chloroform. Samples were vortex-mixed and incubated (4 °C, 10 min) before centrifugation (4500g, 4 °C, 10 min). The top phase was removed before adding 1 ml methanol. The sample was vortex mixed before centrifugation (4500×g, 4 °C, 10 min), the supernatants were removed and the solid sample washed twice with 1 ml acetone, centrifuged at 10,000g, at 4 °C for 5 min, and dried under vacuum. Then, the sample was resuspended in 100 μl dH2O.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. เตรียมโปรตีนควบคู่ของเหลว chromatography รเมท (LC – MS/MS)การเตรียมโปรตีนที่ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการนำเสนอโดย Le Bihan et al. (2011) DSPC สิบมิลลิกรัมถูก resuspended ใน μl 50 ของน้ำกลั่น (dH2O), ตาม ด้วยแปรสภาพด้วย μl 250 ยูเรีย 8 เมตรและเจือจาง ด้วย 950 μl dH2O ก่อนฝนกรด trichloroacetic (TCA) กับ 310 μl 100% TCA เมทานอ μl 1250 และ 625 μl คลอโรฟอร์ม ตัวอย่างถูกผสม vortex และรับการกก (4 ° C, 10 นาที) ก่อนที่จะหมุนเหวี่ยง (4500g, 4 ° C, 10 นาที) ขั้นตอนด้านบนถูกเอาออกก่อนที่จะเพิ่มเมทานอล 1 มิลลิลิตร ตัวอย่างวนผสมก่อนหมุนเหวี่ยง (4500 × g, 4 ° C, 10 นาที), supernatants ถูกเอาออก และตัวอย่างไม้ล้าง ด้วยอะซิโตน 1 ml สอง จากที่ 10, 000 กรัม ที่ 4 ° C 5 นาที และอบแห้งภายใต้สุญญากาศ แล้ว ตัวอย่างคือ resuspended ใน 100 μl dH2O

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 เตรียมความพร้อมของโปรตีนสำหรับของเหลวโครมาตีคู่มวลสาร (LC-MS / MS)

เตรียมโปรตีนได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการที่เสนอโดย Le Bihan et al, (2011) สิบมิลลิกรัม DSPC ถูก resuspended ใน 50 ไมโครลิตรของน้ำกลั่น (dH2O) ตามด้วยการสูญเสียสภาพธรรมชาติ 250 ไมโครลิตรของ 8 เมตรยูเรียและเจือจางด้วย 950 ไมโครลิตร dH2O ก่อนที่จะมีกรดไตรคลอโร (TCA) เร่งรัด 310 ไมโครลิตรของแท้ 100% TCA, 1250 เมทานอลและไมโครลิตร 625 ไมโครลิตรคลอโรฟอร์ม กลุ่มตัวอย่างเป็นน้ำวนผสมและบ่ม (4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที) ก่อนที่จะหมุนเหวี่ยง (4500G, 4 ° C, 10 นาที) ขั้นตอนด้านบนจะถูกลบออกก่อนที่จะเพิ่ม 1 มิลลิลิตรเมทานอล กลุ่มตัวอย่างเป็นน้ำวนผสมก่อนที่จะหมุนเหวี่ยง (4500 ×กรัม 4 ° C, 10 นาที), supernatants ถูกถอดออกและกลุ่มตัวอย่างที่เป็นของแข็งล้างครั้งที่สองกับ 1 มิลลิลิตรอะซีโตนหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและแห้ง ภายใต้สูญญากาศ จากนั้นกลุ่มตัวอย่างถูก resuspended ใน 100 ไมโครลิตร dH2O

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การเตรียมโปรตีนสำหรับ liquid chromatography ตีคู่มวลสาร ( LC ) MS / MS )การเตรียมโปรตีนได้ โดยใช้วิธีการที่เสนอโดยเลอ bihan et al . ( 2011 ) มก. 10 dspc คือ resuspended 50 μ L ของน้ำกลั่น ( dh2o ) ตามมาด้วย ( 250 μลิตร 8 M ยูเรียและระดับ 950 μผม dh2o ก่อนที่กรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) ตกตะกอนด้วยμ 310 ลิตร 100 % TCA , 1250 μชั้นเมทานอลและ 625 μชั้นคลอโรฟอร์ม จำนวนวนผสมบ่ม ( 4 ° C , 10 นาที ) ก่อนปั่น ( 4500g 4 ° C , 10 นาที ) ขั้นตอนด้านบนจะถูกลบออกก่อนที่จะเพิ่ม 1 มิลลิลิตรเมธานอล ตัวอย่าง Vortex ผสมก่อนปั่น ( 4500 × g 4 ° C , 10 นาที ) , supernatants ถูกถอดออกและซักสองตัวอย่างของแข็ง 1 มิลลิลิตร อะซิโตน ระดับที่ 10000g ที่ 4 ° C เป็นเวลา 5 นาที และอบแห้งภายใต้สูญญากาศ แล้ว จำนวน resuspended 100 μผม dh2o .