- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Expression ofchitinase genes by T.
Expression of
chitinase genes by T. gamsii 6085 and 6317 was measured by RT-PCR.
Pathogen/antagonist combinations were grown on OA at 24±2 uC,
12 h light/12 h darkness, and harvested when both colonies were
approx. 5 mm apart (before contact, BC), at contact (contact, C) and
after Trichoderma overgrew (5 mm) (after contact, AC) F. graminearum
or F. culmorum colonies. Trichoderma strains inoculated
against themselves, or alone, were used as controls and harvested at
the same time points. All combinations were made in triplicate. To
avoid the use of cellophane for these assays, peripheral hyphal zones
were harvested from each confrontation stage by directly cutting out
agar pieces, shock frozen in liquid nitrogen and stored at 280 uC.
Total RNA was isolated from agar, adapting a CTAB protocol available
at http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/summaries/TC1507-DNAextrc.pdf.
Briefly, agar pieces from three plates were ground in liquid N2 and
transferred to a small centrifuge tube (15 ml BD Falcon) kept on ice
and containing 2.4 ml extraction buffer (2% CTAB, 1.4 M NaCl,
20 mM EDTA pH 8, 100 mM Tris/HCl pH 8, 2% PVP 40 000)
with 1% b-mercaptoethanol. Tubes were mixed by vortexing.
Chloroform : isoamylalcohol 49 : 1 (1.6 ml) was added; the sample
was vortexed again then kept for 15 min on ice. The samples were then
vortexed and centrifuged for 10 min at 13 200 r.p.m. The upper layer
(~700 ml) was transferred to new tubes, adding 1 vol 2-propanol and
300 ml DEPC water (usually three or four tubes for each sample), and
incubated at 220 uC for at least 2 h. Samples were centrifuged for
30 min at 13 200 r.p.m. Pellets were washed in 70% ethanol, air-dried,
resuspended in DEPC water and pooled. The final RNA volume for
each sample was 100 ml. RNA samples were stored at 280 uC until use.
All RNA samples were treated with DNase I (Fermentas) and purified
using the RNeasy MinElute cleanup kit (Qiagen). RNA quality and
concentration were analysed by gel electrophoresis and measured by
using the Nanodrop ND-1000 (NanoDrop Technologies). For cDNA
production, 5 mg RNA per reaction was reverse transcribed using the
RevertAid H2 first strand cDNA synthesis kit (Fermentas) and
oligo(dT)18 primer according to the instructions provided by the
manufacturer. The RT-PCR amplification programne consisted of
1 min initial denaturation (94 uC), 25 cycles of amplification [1 min at
94 uC, 1 min at the primer-specific annealing temperature (Tm), 1 min
at 72 uC] and a final extension period of 7 min at 72 uC. Chitinase
gene-specific primers and their Tms were as follows: subgroup A
chitinase gene, ech42 according to Seidl et al. (2006), Tm 60 uC;
subgroup B chitinase gene, chit33 (fw 59-GCTCCTCAGTGCTTCTTCC-
39 and rv 59-GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); subgroup C
chitinase genes, Tm 60 uC (Matarese, 2010); tac1, tac4 and tac8, Tm
57 uC, (Gruber et al., 2011); N-acetylglucosaminidases, nag1, Tm 54 uC
and nag2 Tm 60 uC (Seidl et al., 2006). The tef1 gene, encoding
translation elongation factor 1-a, and the housekeeping gene gpdh
(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) were used as controls. All
the primers employed in this experiment were designed on T. atroviride
sequences due to the lack of information about the T. gamsii genome.
chitinase genes by T. gamsii 6085 and 6317 was measured by RT-PCR.
Pathogen/antagonist combinations were grown on OA at 24±2 uC,
12 h light/12 h darkness, and harvested when both colonies were
approx. 5 mm apart (before contact, BC), at contact (contact, C) and
after Trichoderma overgrew (5 mm) (after contact, AC) F. graminearum
or F. culmorum colonies. Trichoderma strains inoculated
against themselves, or alone, were used as controls and harvested at
the same time points. All combinations were made in triplicate. To
avoid the use of cellophane for these assays, peripheral hyphal zones
were harvested from each confrontation stage by directly cutting out
agar pieces, shock frozen in liquid nitrogen and stored at 280 uC.
Total RNA was isolated from agar, adapting a CTAB protocol available
at http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/summaries/TC1507-DNAextrc.pdf.
Briefly, agar pieces from three plates were ground in liquid N2 and
transferred to a small centrifuge tube (15 ml BD Falcon) kept on ice
and containing 2.4 ml extraction buffer (2% CTAB, 1.4 M NaCl,
20 mM EDTA pH 8, 100 mM Tris/HCl pH 8, 2% PVP 40 000)
with 1% b-mercaptoethanol. Tubes were mixed by vortexing.
Chloroform : isoamylalcohol 49 : 1 (1.6 ml) was added; the sample
was vortexed again then kept for 15 min on ice. The samples were then
vortexed and centrifuged for 10 min at 13 200 r.p.m. The upper layer
(~700 ml) was transferred to new tubes, adding 1 vol 2-propanol and
300 ml DEPC water (usually three or four tubes for each sample), and
incubated at 220 uC for at least 2 h. Samples were centrifuged for
30 min at 13 200 r.p.m. Pellets were washed in 70% ethanol, air-dried,
resuspended in DEPC water and pooled. The final RNA volume for
each sample was 100 ml. RNA samples were stored at 280 uC until use.
All RNA samples were treated with DNase I (Fermentas) and purified
using the RNeasy MinElute cleanup kit (Qiagen). RNA quality and
concentration were analysed by gel electrophoresis and measured by
using the Nanodrop ND-1000 (NanoDrop Technologies). For cDNA
production, 5 mg RNA per reaction was reverse transcribed using the
RevertAid H2 first strand cDNA synthesis kit (Fermentas) and
oligo(dT)18 primer according to the instructions provided by the
manufacturer. The RT-PCR amplification programne consisted of
1 min initial denaturation (94 uC), 25 cycles of amplification [1 min at
94 uC, 1 min at the primer-specific annealing temperature (Tm), 1 min
at 72 uC] and a final extension period of 7 min at 72 uC. Chitinase
gene-specific primers and their Tms were as follows: subgroup A
chitinase gene, ech42 according to Seidl et al. (2006), Tm 60 uC;
subgroup B chitinase gene, chit33 (fw 59-GCTCCTCAGTGCTTCTTCC-
39 and rv 59-GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); subgroup C
chitinase genes, Tm 60 uC (Matarese, 2010); tac1, tac4 and tac8, Tm
57 uC, (Gruber et al., 2011); N-acetylglucosaminidases, nag1, Tm 54 uC
and nag2 Tm 60 uC (Seidl et al., 2006). The tef1 gene, encoding
translation elongation factor 1-a, and the housekeeping gene gpdh
(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) were used as controls. All
the primers employed in this experiment were designed on T. atroviride
sequences due to the lack of information about the T. gamsii genome.
0/5000
Expression ofchitinase genes by T. gamsii 6085 and 6317 was measured by RT-PCR.Pathogen/antagonist combinations were grown on OA at 24±2 uC,12 h light/12 h darkness, and harvested when both colonies wereapprox. 5 mm apart (before contact, BC), at contact (contact, C) andafter Trichoderma overgrew (5 mm) (after contact, AC) F. graminearumor F. culmorum colonies. Trichoderma strains inoculatedagainst themselves, or alone, were used as controls and harvested atthe same time points. All combinations were made in triplicate. Toavoid the use of cellophane for these assays, peripheral hyphal zoneswere harvested from each confrontation stage by directly cutting outagar pieces, shock frozen in liquid nitrogen and stored at 280 uC.Total RNA was isolated from agar, adapting a CTAB protocol availableat http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/summaries/TC1507-DNAextrc.pdf.Briefly, agar pieces from three plates were ground in liquid N2 andtransferred to a small centrifuge tube (15 ml BD Falcon) kept on iceand containing 2.4 ml extraction buffer (2% CTAB, 1.4 M NaCl,20 mM EDTA pH 8, 100 mM Tris/HCl pH 8, 2% PVP 40 000)with 1% b-mercaptoethanol. Tubes were mixed by vortexing.Chloroform : isoamylalcohol 49 : 1 (1.6 ml) was added; the samplewas vortexed again then kept for 15 min on ice. The samples were thenvortexed and centrifuged for 10 min at 13 200 r.p.m. The upper layer(~700 ml) was transferred to new tubes, adding 1 vol 2-propanol and300 ml DEPC water (usually three or four tubes for each sample), andincubated at 220 uC for at least 2 h. Samples were centrifuged for30 min at 13 200 r.p.m. Pellets were washed in 70% ethanol, air-dried,resuspended in DEPC water and pooled. The final RNA volume foreach sample was 100 ml. RNA samples were stored at 280 uC until use.All RNA samples were treated with DNase I (Fermentas) and purifiedusing the RNeasy MinElute cleanup kit (Qiagen). RNA quality andconcentration were analysed by gel electrophoresis and measured byusing the Nanodrop ND-1000 (NanoDrop Technologies). For cDNAproduction, 5 mg RNA per reaction was reverse transcribed using theRevertAid H2 first strand cDNA synthesis kit (Fermentas) andoligo(dT)18 primer according to the instructions provided by themanufacturer. The RT-PCR amplification programne consisted of1 min initial denaturation (94 uC), 25 cycles of amplification [1 min at94 uC, 1 min at the primer-specific annealing temperature (Tm), 1 minat 72 uC] and a final extension period of 7 min at 72 uC. Chitinasegene-specific primers and their Tms were as follows: subgroup Achitinase gene, ech42 according to Seidl et al. (2006), Tm 60 uC;subgroup B chitinase gene, chit33 (fw 59-GCTCCTCAGTGCTTCTTCC-39 and rv 59-GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); subgroup Cchitinase genes, Tm 60 uC (Matarese, 2010); tac1, tac4 and tac8, Tm57 uC, (Gruber et al., 2011); N-acetylglucosaminidases, nag1, Tm 54 uCand nag2 Tm 60 uC (Seidl et al., 2006). The tef1 gene, encoding
translation elongation factor 1-a, and the housekeeping gene gpdh
(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) were used as controls. All
the primers employed in this experiment were designed on T. atroviride
sequences due to the lack of information about the T. gamsii genome.
translation elongation factor 1-a, and the housekeeping gene gpdh
(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) were used as controls. All
the primers employed in this experiment were designed on T. atroviride
sequences due to the lack of information about the T. gamsii genome.
การแปล กรุณารอสักครู่..
การแสดงออกของ
ยีนไคติเนสโดย T. gamsii 6085 และ 6317 โดยวัดจาก RT-PCR.
เชื้อโรค / ชุดที่ศัตรูได้รับการปลูกในโอเอที่ 24 ± 2 UC,
12 ชั่วโมงแสง / 12 ความมืดชั่วโมงและเก็บเกี่ยวเมื่อทั้งสองอาณานิคมอยู่
ประมาณ 5 มมออกจากกัน (ก่อนที่จะติดต่อ BC) ที่ติดต่อ (ที่ติดต่อ C) และ
หลังจากเชื้อรา Trichoderma overgrew (5 มม) (หลังการสัมผัส, AC) F. graminearum
หรือเอฟอาณานิคม culmorum สายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma เชื้อ
กับตัวเองหรือคนเดียวถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมและเก็บเกี่ยวที่
จุดในเวลาเดียวกัน รวมกันทั้งหมดได้ทำในเพิ่มขึ้นสามเท่า เพื่อ
หลีกเลี่ยงการใช้กระดาษแก้วสำหรับการตรวจเหล่านี้โซน hyphal อุปกรณ์ต่อพ่วง
ที่ได้รับจากการเก็บเกี่ยวในแต่ละขั้นตอนการเผชิญหน้าโดยตรงโดยการตัดออกจาก
ชิ้นวุ้น, ช็อตแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ 280 UC.
รวมอาร์เอ็นเอที่แยกได้จากวุ้นปรับโปรโตคอล CTAB ใช้ได้
ที่ http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/summaries/TC1507-DNAextrc.pdf.
สั้น ๆ วุ้นชิ้นจากสามแผ่นมาบดในของเหลว N2 และ
โอนไปยังหลอด centrifuge ขนาดเล็ก (ขนาด 15 มล BD เหยี่ยว) เก็บไว้ บนน้ำแข็ง
และมี 2.4 มลสารสกัด (2% CTAB, 1.4 M NaCl,
20 มม EDTA ค่า pH 8, 100 มิลลิ Tris / HCl ค่า pH 8, 2% PVP 40 000)
1% B-mercaptoethanol ท่อถูกผสมโดย vortexing.
คลอโรฟอร์ม: IsoamylAlcohol 49: 1 (1.6 ml) ถูกบันทึก; ตัวอย่าง
คือการ vortex อีกครั้งแล้วเก็บไว้นาน 15 นาทีบนน้ำแข็ง กลุ่มตัวอย่างเป็นแล้ว
การ vortex และปั่นเป็นเวลา 10 นาทีวันที่ 13 รอบต่อนาที 200 ชั้นบน
(~ 700 มล) ถูกย้ายไปหลอดใหม่เพิ่ม 1 ฉบับ 2 โพรและ
300 มลน้ำ DEPC (ปกติสามหรือสี่หลอดสำหรับแต่ละตัวอย่าง) และ
บ่มที่อุณหภูมิ 220 UC อย่างน้อย 2 ชั่วโมง ตัวอย่างที่ถูกปั่นสำหรับ
30 นาทีวันที่ 13 รอบต่อนาที 200 เม็ดถูกล้างในเอทานอล 70%, อากาศแห้ง,
resuspended ในน้ำ DEPC และรวบรวม ปริมาณ RNA สุดท้ายสำหรับ
แต่ละกลุ่มตัวอย่าง 100 มล ตัวอย่าง RNA ถูกเก็บไว้ที่ 280 UC จนใช้.
ตัวอย่าง RNA ทั้งหมดได้รับการรักษาด้วย DNase ฉัน (Fermentas) และบริสุทธิ์
โดยใช้ชุดการล้าง RNeasy MinElute (Qiagen) อาร์เอ็นเอที่มีคุณภาพและ
ความเข้มข้นที่ได้มาวิเคราะห์ด้วยวิธี gel electrophoresis และวัดโดย
ใช้ Nanodrop ND-1000 (NanoDrop เทคโนโลยี) สำหรับ cDNA
ผลิต 5 มอาร์เอ็นเอต่อปฏิกิริยาจะถูกคัดลอกกลับใช้
RevertAid H2 สาระชุดแรกสังเคราะห์ cDNA (Fermentas) และ
Oligo (dT) 18 ไพรเมอร์ตามคำแนะนำที่ได้รับจาก
ผู้ผลิต RT-PCR programne ขยายประกอบด้วย
1 นาที denaturation เริ่มต้น (94 UC) 25 รอบของการขยาย [1 นาทีที่
94 UC, 1 นาทีที่อุณหภูมิการหลอมรองพื้นเฉพาะ (TM) 1 นาที
ที่ 72 UC] และเป็นครั้งสุดท้าย ขยายระยะเวลา 7 นาทีที่ 72 UC ไคติเนส
ไพรยีนที่เฉพาะเจาะจงและ Tms ของพวกเขามีดังนี้กลุ่มย่อย
ยีนไคติเนส, ech42 ตาม Seidl และคณะ (2006), Tm 60 UC;
กลุ่มย่อยยีนไคติเน B, chit33 (FW 59 GCTCCTCAGTGCTTCTTCC-
39 และ rv 59 GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); กลุ่มย่อย C
ยีนไคติเนส, Tm 60 UC (Matarese, 2010); tac1, tac4 และ tac8, Tm
57 UC (กรูเบอร์และคณะ, 2011.); N-acetylglucosaminidases, nag1, Tm 54 UC
และ nag2 Tm 60 UC (Seidl et al., 2006) ยีน tef1 การเข้ารหัส
การยืดตัวแปลปัจจัยที่ 1 และ gpdh ยีนทำความสะอาด
(dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม ทั้งหมด
ไพรเมอร์ที่ใช้ในการทดลองนี้ได้รับการออกแบบใน T. atroviride
ลำดับเนื่องจากขาดข้อมูลเกี่ยวกับจีโนม T. gamsii
ยีนไคติเนสโดย T. gamsii 6085 และ 6317 โดยวัดจาก RT-PCR.
เชื้อโรค / ชุดที่ศัตรูได้รับการปลูกในโอเอที่ 24 ± 2 UC,
12 ชั่วโมงแสง / 12 ความมืดชั่วโมงและเก็บเกี่ยวเมื่อทั้งสองอาณานิคมอยู่
ประมาณ 5 มมออกจากกัน (ก่อนที่จะติดต่อ BC) ที่ติดต่อ (ที่ติดต่อ C) และ
หลังจากเชื้อรา Trichoderma overgrew (5 มม) (หลังการสัมผัส, AC) F. graminearum
หรือเอฟอาณานิคม culmorum สายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma เชื้อ
กับตัวเองหรือคนเดียวถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมและเก็บเกี่ยวที่
จุดในเวลาเดียวกัน รวมกันทั้งหมดได้ทำในเพิ่มขึ้นสามเท่า เพื่อ
หลีกเลี่ยงการใช้กระดาษแก้วสำหรับการตรวจเหล่านี้โซน hyphal อุปกรณ์ต่อพ่วง
ที่ได้รับจากการเก็บเกี่ยวในแต่ละขั้นตอนการเผชิญหน้าโดยตรงโดยการตัดออกจาก
ชิ้นวุ้น, ช็อตแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ 280 UC.
รวมอาร์เอ็นเอที่แยกได้จากวุ้นปรับโปรโตคอล CTAB ใช้ได้
ที่ http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/summaries/TC1507-DNAextrc.pdf.
สั้น ๆ วุ้นชิ้นจากสามแผ่นมาบดในของเหลว N2 และ
โอนไปยังหลอด centrifuge ขนาดเล็ก (ขนาด 15 มล BD เหยี่ยว) เก็บไว้ บนน้ำแข็ง
และมี 2.4 มลสารสกัด (2% CTAB, 1.4 M NaCl,
20 มม EDTA ค่า pH 8, 100 มิลลิ Tris / HCl ค่า pH 8, 2% PVP 40 000)
1% B-mercaptoethanol ท่อถูกผสมโดย vortexing.
คลอโรฟอร์ม: IsoamylAlcohol 49: 1 (1.6 ml) ถูกบันทึก; ตัวอย่าง
คือการ vortex อีกครั้งแล้วเก็บไว้นาน 15 นาทีบนน้ำแข็ง กลุ่มตัวอย่างเป็นแล้ว
การ vortex และปั่นเป็นเวลา 10 นาทีวันที่ 13 รอบต่อนาที 200 ชั้นบน
(~ 700 มล) ถูกย้ายไปหลอดใหม่เพิ่ม 1 ฉบับ 2 โพรและ
300 มลน้ำ DEPC (ปกติสามหรือสี่หลอดสำหรับแต่ละตัวอย่าง) และ
บ่มที่อุณหภูมิ 220 UC อย่างน้อย 2 ชั่วโมง ตัวอย่างที่ถูกปั่นสำหรับ
30 นาทีวันที่ 13 รอบต่อนาที 200 เม็ดถูกล้างในเอทานอล 70%, อากาศแห้ง,
resuspended ในน้ำ DEPC และรวบรวม ปริมาณ RNA สุดท้ายสำหรับ
แต่ละกลุ่มตัวอย่าง 100 มล ตัวอย่าง RNA ถูกเก็บไว้ที่ 280 UC จนใช้.
ตัวอย่าง RNA ทั้งหมดได้รับการรักษาด้วย DNase ฉัน (Fermentas) และบริสุทธิ์
โดยใช้ชุดการล้าง RNeasy MinElute (Qiagen) อาร์เอ็นเอที่มีคุณภาพและ
ความเข้มข้นที่ได้มาวิเคราะห์ด้วยวิธี gel electrophoresis และวัดโดย
ใช้ Nanodrop ND-1000 (NanoDrop เทคโนโลยี) สำหรับ cDNA
ผลิต 5 มอาร์เอ็นเอต่อปฏิกิริยาจะถูกคัดลอกกลับใช้
RevertAid H2 สาระชุดแรกสังเคราะห์ cDNA (Fermentas) และ
Oligo (dT) 18 ไพรเมอร์ตามคำแนะนำที่ได้รับจาก
ผู้ผลิต RT-PCR programne ขยายประกอบด้วย
1 นาที denaturation เริ่มต้น (94 UC) 25 รอบของการขยาย [1 นาทีที่
94 UC, 1 นาทีที่อุณหภูมิการหลอมรองพื้นเฉพาะ (TM) 1 นาที
ที่ 72 UC] และเป็นครั้งสุดท้าย ขยายระยะเวลา 7 นาทีที่ 72 UC ไคติเนส
ไพรยีนที่เฉพาะเจาะจงและ Tms ของพวกเขามีดังนี้กลุ่มย่อย
ยีนไคติเนส, ech42 ตาม Seidl และคณะ (2006), Tm 60 UC;
กลุ่มย่อยยีนไคติเน B, chit33 (FW 59 GCTCCTCAGTGCTTCTTCC-
39 และ rv 59 GGGAATGCCGACAAGAAGC-39); กลุ่มย่อย C
ยีนไคติเนส, Tm 60 UC (Matarese, 2010); tac1, tac4 และ tac8, Tm
57 UC (กรูเบอร์และคณะ, 2011.); N-acetylglucosaminidases, nag1, Tm 54 UC
และ nag2 Tm 60 UC (Seidl et al., 2006) ยีน tef1 การเข้ารหัส
การยืดตัวแปลปัจจัยที่ 1 และ gpdh ยีนทำความสะอาด
(dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม ทั้งหมด
ไพรเมอร์ที่ใช้ในการทดลองนี้ได้รับการออกแบบใน T. atroviride
ลำดับเนื่องจากขาดข้อมูลเกี่ยวกับจีโนม T. gamsii
การแปล กรุณารอสักครู่..
การแสดงออกของยีนไคติเนสโดย gamsii
1 6317 และวัดโดย RT-PCR .
เชื้อโรค / 20 ชุดปลูกใน OA ที่ 24 ± 2 UC
12 H แสง / 12 ชั่วโมง ความมืด และเก็บเกี่ยวเมื่อทั้งอาณานิคมได้ถูก
ประมาณ 5 มม. กัน ( ก่อนติดต่อ BC ) ที่ติดต่อ ( ติดต่อ ซี ) และเชื้อรา
หลังกริยาช่องที่ 2 ของ overgrow ( 5 มม. ) ( หลังจากติดต่อ AC ) F graminearum
หรือ F . culmorum อาณานิคมเชื้อ Trichoderma สายพันธุ์
กับตัวเอง หรือคนเดียว ที่ใช้ควบคุมและเก็บเกี่ยว
จุดเวลาเดียวกัน ชุดทั้งหมดให้ทั้งสามใบ
หลีกเลี่ยงการใช้กระดาษแก้วสำหรับวิธีเหล่านี้พ่วง , โซนลดลง
เก็บจากแต่ละขั้นเผชิญหน้าโดยตรงโดยการตัดออก
ชิ้นวุ้น , ช็อตแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บที่ 280
UC .อาร์เอ็นเอทั้งหมดได้จากวุ้น ปรับเป็นใช้ได้
ctab โปรโตคอล http : / / จีเอ็มโอ CRL . jrc EC . ยุโรป อียู / สรุป / tc1507 dnaextrc . pdf .
สั้น , วุ้นชิ้นจากสามแผ่นดินในไนโตรเจนเหลวและถูกโอนไปยังหลอด centrifuge
เล็ก ( BD Falcon 15 ml ) เก็บไว้ บนน้ำแข็ง
2.4 ml และการสกัดที่มีบัฟเฟอร์ ( 2% ctab 1.4 M NaCl
20 mM EDTA pH 8 , 100 มิลลิเมตรต่อ / HCl pH 8 , 2% PVP 40 000 )
1 % b-mercaptoethanol . หลอดผสมโดย vortexing .
คลอโรฟอร์ม : isoamylalcohol 49 : 1 ( 1.6 ml ) ถูกเพิ่ม ; ตัวอย่าง
คือ vortexed อีกครั้งแล้วเก็บ 15 นาทีบนน้ำแข็ง จำนวนแล้ว
vortexed ไฟฟ้า 10 นาทีที่ 13 200 r.p.m.
ชั้นบน ( ~ 700 มล. ) ไปเป็นหลอดใหม่ เพิ่มโพรพานอล 1 ฉบับและ
300 มล. depc น้ำ ( ปกติสามหรือสี่หลอดสำหรับแต่ละตัวอย่าง )
และบ่มที่อุณหภูมิ 220 UC อย่างน้อย 2 ชั่วโมง จำนวนระดับสำหรับ
30 นาทีที่ 13 200 r.p.m. เม็ดถูกล้างในเอทานอล 70% และอากาศแห้ง
resuspended ใน depc น้ำและพู . ปริมาณ RNA สุดท้าย
แต่ละตัวอย่างจำนวน 100 มิลลิลิตร ซึ่งเก็บไว้ที่ 280 UC จนใช้ .
ตัวอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้รับการรักษาด้วยการตรวจหา ADNase ผม ( fermentas ) และบริสุทธิ์ใช้ทำความสะอาด rneasy
minelute ชุด ( เพิ่ม )ซึ่งคุณภาพและปริมาณวิเคราะห์โดยเจล
และวัดโดยใช้ nanodrop nd-1000 ( nanodrop เทคโนโลยี ) สำหรับการผลิต cDNA
RNA 5 มิลลิกรัม ต่อปฏิกิริยาย้อนกลับ และใช้
revertaid H2 แรกเกลียวยีนสังเคราะห์ชุด ( fermentas ) และ โอลิโก
( DT ) 18 รองพื้นตามคำแนะนำที่ให้โดย
ผู้ผลิตprogramne ( RT-PCR )
1 ( เริ่มต้นมิน ( 94 UC ) , 25 รอบ นาทีที่ 94 ( [ 1
UC 1 นาทีที่รองพื้นเฉพาะอุณหภูมิการอบอ่อน ( TM ) , 1 นาทีที่ 72
UC ] และสุดท้ายขยายระยะเวลา 7 นาทีที่ 72 เป็นต้น . - ชนิดของยีนที่เฉพาะเจาะจง
งานดังนี้ : กลุ่มย่อยเป็น
( ยีน ech42 ตาม seidl et al . ( 2006 ) , TM 60 เป็นต้น ;
กลุ่มย่อย B ยีนไคติเนส chit33 ( FW , 59-gctcctcagtgcttcttcc -
39 และ RV 59-gggaatgccgacaagaagc-39 ) ; กลุ่มย่อย C
( ยีนตัว 60 เป็นต้น ( matarese 2010 ) ; tac1 tac4 tac8 , และ TM
57 UC ( Gruber et al . , 2011 ) n-acetylglucosaminidases nag1 TM , 54 ฯลฯ
nag2 tm 60 และ UC ( seidl et al . , 2006 ) การ tef1 ยีนเข้ารหัส
แปลยืดตัวปัจจัยกระเทียมดอง และแม่บ้าน gpdh
ยีน( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ) ที่ใช้ควบคุม ทั้งหมดที่ใช้ในการทดลองนี้ได้ทำการ
ออกแบบใน ต. atroviride
ลำดับเนื่องจากการขาดข้อมูลเกี่ยวกับจีโนม ต. gamsii .
1 6317 และวัดโดย RT-PCR .
เชื้อโรค / 20 ชุดปลูกใน OA ที่ 24 ± 2 UC
12 H แสง / 12 ชั่วโมง ความมืด และเก็บเกี่ยวเมื่อทั้งอาณานิคมได้ถูก
ประมาณ 5 มม. กัน ( ก่อนติดต่อ BC ) ที่ติดต่อ ( ติดต่อ ซี ) และเชื้อรา
หลังกริยาช่องที่ 2 ของ overgrow ( 5 มม. ) ( หลังจากติดต่อ AC ) F graminearum
หรือ F . culmorum อาณานิคมเชื้อ Trichoderma สายพันธุ์
กับตัวเอง หรือคนเดียว ที่ใช้ควบคุมและเก็บเกี่ยว
จุดเวลาเดียวกัน ชุดทั้งหมดให้ทั้งสามใบ
หลีกเลี่ยงการใช้กระดาษแก้วสำหรับวิธีเหล่านี้พ่วง , โซนลดลง
เก็บจากแต่ละขั้นเผชิญหน้าโดยตรงโดยการตัดออก
ชิ้นวุ้น , ช็อตแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บที่ 280
UC .อาร์เอ็นเอทั้งหมดได้จากวุ้น ปรับเป็นใช้ได้
ctab โปรโตคอล http : / / จีเอ็มโอ CRL . jrc EC . ยุโรป อียู / สรุป / tc1507 dnaextrc . pdf .
สั้น , วุ้นชิ้นจากสามแผ่นดินในไนโตรเจนเหลวและถูกโอนไปยังหลอด centrifuge
เล็ก ( BD Falcon 15 ml ) เก็บไว้ บนน้ำแข็ง
2.4 ml และการสกัดที่มีบัฟเฟอร์ ( 2% ctab 1.4 M NaCl
20 mM EDTA pH 8 , 100 มิลลิเมตรต่อ / HCl pH 8 , 2% PVP 40 000 )
1 % b-mercaptoethanol . หลอดผสมโดย vortexing .
คลอโรฟอร์ม : isoamylalcohol 49 : 1 ( 1.6 ml ) ถูกเพิ่ม ; ตัวอย่าง
คือ vortexed อีกครั้งแล้วเก็บ 15 นาทีบนน้ำแข็ง จำนวนแล้ว
vortexed ไฟฟ้า 10 นาทีที่ 13 200 r.p.m.
ชั้นบน ( ~ 700 มล. ) ไปเป็นหลอดใหม่ เพิ่มโพรพานอล 1 ฉบับและ
300 มล. depc น้ำ ( ปกติสามหรือสี่หลอดสำหรับแต่ละตัวอย่าง )
และบ่มที่อุณหภูมิ 220 UC อย่างน้อย 2 ชั่วโมง จำนวนระดับสำหรับ
30 นาทีที่ 13 200 r.p.m. เม็ดถูกล้างในเอทานอล 70% และอากาศแห้ง
resuspended ใน depc น้ำและพู . ปริมาณ RNA สุดท้าย
แต่ละตัวอย่างจำนวน 100 มิลลิลิตร ซึ่งเก็บไว้ที่ 280 UC จนใช้ .
ตัวอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้รับการรักษาด้วยการตรวจหา ADNase ผม ( fermentas ) และบริสุทธิ์ใช้ทำความสะอาด rneasy
minelute ชุด ( เพิ่ม )ซึ่งคุณภาพและปริมาณวิเคราะห์โดยเจล
และวัดโดยใช้ nanodrop nd-1000 ( nanodrop เทคโนโลยี ) สำหรับการผลิต cDNA
RNA 5 มิลลิกรัม ต่อปฏิกิริยาย้อนกลับ และใช้
revertaid H2 แรกเกลียวยีนสังเคราะห์ชุด ( fermentas ) และ โอลิโก
( DT ) 18 รองพื้นตามคำแนะนำที่ให้โดย
ผู้ผลิตprogramne ( RT-PCR )
1 ( เริ่มต้นมิน ( 94 UC ) , 25 รอบ นาทีที่ 94 ( [ 1
UC 1 นาทีที่รองพื้นเฉพาะอุณหภูมิการอบอ่อน ( TM ) , 1 นาทีที่ 72
UC ] และสุดท้ายขยายระยะเวลา 7 นาทีที่ 72 เป็นต้น . - ชนิดของยีนที่เฉพาะเจาะจง
งานดังนี้ : กลุ่มย่อยเป็น
( ยีน ech42 ตาม seidl et al . ( 2006 ) , TM 60 เป็นต้น ;
กลุ่มย่อย B ยีนไคติเนส chit33 ( FW , 59-gctcctcagtgcttcttcc -
39 และ RV 59-gggaatgccgacaagaagc-39 ) ; กลุ่มย่อย C
( ยีนตัว 60 เป็นต้น ( matarese 2010 ) ; tac1 tac4 tac8 , และ TM
57 UC ( Gruber et al . , 2011 ) n-acetylglucosaminidases nag1 TM , 54 ฯลฯ
nag2 tm 60 และ UC ( seidl et al . , 2006 ) การ tef1 ยีนเข้ารหัส
แปลยืดตัวปัจจัยกระเทียมดอง และแม่บ้าน gpdh
ยีน( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ) ที่ใช้ควบคุม ทั้งหมดที่ใช้ในการทดลองนี้ได้ทำการ
ออกแบบใน ต. atroviride
ลำดับเนื่องจากการขาดข้อมูลเกี่ยวกับจีโนม ต. gamsii .
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- แต่ถ้าจะให้หล่อมากกว่านี้ต้องไม่มีหนวดเค
- Hm okay İF i be silent, can u finish it
- ออกให้ 10,000บาท
- According to internal change of AE accou
- acknowledge and take action
- ใกล้ถึงหรือยัง
- คำพูดของคุณ ทำให้ฉันตกหลุมรัก
- If the drive from my house to the port t
- ไม่ว่าพรุ่งนี้จะเป็นอย่างฉันพร้อมจะรับมั
- Table 6 summarizes the results of gender
- สกรีน
- เธอรู้สึกผิดหวัง
- My sister is looking for.
- ตอนนี้เปลี่ยนเป็น พลเอกประยุทธ จันทร์โอช
- He cannot be held ransom by man. He is n
- ด่านเขมร
- but i go to BKK many times
- aqua
- ที่นั่นอากาศดีไหม
- เราไปหาอะไรทานและคุยกันไปด้วยดีไหม
- From simulation, plot for output voltage
- aqua
- ฉันรู้สึกเจ็บคอ
- historical precedent.
