Total protein samples (200 mg) were

Total protein samples (200 mg) were loaded on 12% of SDSpolyacrylamide
gel electrophoresis, and transferred onto a 0.45 mm
nitrocellulose membrane (Bio-Rad, 162-0115). Membrane was
blocked at room temperature for 1 h with 5% non-fat milk in 1X
TBS-T, and then washed with 1% non-fat milk in 1X TBS-T. Membrane
was incubated at 4 °C for overnight with primary antibodies.
After thrice washing in 1% non-fat milk in 1X TBS-T for each
5 mins, membrane was incubated at room temperature for 1–2 h
with secondary horseradish peroxidase-conjugated antibodies
followed by washing with 1X TBS-T thrice for each 10 min. Protein
band was developed by Supersignal West Dura Extended Duration
Substrate kit (Thermo) and detected using a Fusion FX CCD camera
(Fisher Biotec). GAPDH was used to normalize protein loading.
Protein expression level was expressed as a relative ratio to
GPADH.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างโปรตีนทั้งหมด (200 mg) ถูกโหลดจาก 12% ของ SDSpolyacrylamideเจอิ และโอนย้ายไปยังมี 0.45 มม.ไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน (Bio-ล้อ 162-0115) มีเมมเบรนบล็อกที่อุณหภูมิห้องสำหรับ h 1 กับนมปลอดไขมัน 5% ใน 1 XTBS-T และจากนั้น ล้าง ด้วยน้ำนมปลอดไขมัน 1% ใน 1 X TBS-ต. เมมเบรนมี incubated ที่ 4 ° C สำหรับค้างคืนกับแอนติบอดีหลักหลังจากล้างเลยนมปลอดไขมัน 1% ใน 1 T TBS X สำหรับแต่ละ5 นาที เมมเบรนมี incubated อุณหภูมิห้องสำหรับ 1-2 ชมมีแอนติบอดีผันฮอสดิชรองตาม ด้วยการล้างด้วย 1 TBS X-T เลยสำหรับ 10 นาทีแต่ละโปรตีนวงได้รับการพัฒนา โดย Supersignal ตะวันตกดูร่าขยายระยะเวลาชุดพื้นผิว (เทอร์โม) และตรวจพบใช้กล้อง CCD FX ฟิวชั่น(Biotec ฟิชเชอร์) ใช้ GAPDH ปกติโปรตีนโหลดระดับโปรตีนในนิพจน์ถูกแสดงเป็นอัตราส่วนสัมพันธ์กับGPADH

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างโปรตีนรวม (200 มก.) ได้รับการโหลดใน 12% ของ SDSpolyacrylamide
gel electrophoresis และโอนไปยัง 0.45 มม
เมมเบรนไนโตรเซลลูโลส (Bio-Rad, 162-0115) เมมเบรนที่ถูก
บล็อกไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับนม 5% ไม่มีไขมันใน 1X
TBS-T และจากนั้นล้างด้วยนม 1% ไม่มีไขมันใน 1X TBS-T เมมเบรน
ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสสำหรับค้างคืนกับแอนติบอดีหลัก.
หลังจากล้างสามครั้งในนมไม่มีไขมัน 1% ใน 1X TBS-T สำหรับแต่ละ
5 นาทีเมมเบรนได้รับการบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1-2 ชั่วโมง
กับมะรุม peroxidase-ผันรอง แอนติบอดี
ตามด้วยการล้างด้วย 1X TBS-T สามครั้งสำหรับแต่ละ 10 นาที โปรตีน
วงดนตรีได้รับการพัฒนาโดย Supersignal ตะวันตก Dura ขยายระยะเวลา
ของพื้นผิว Kit (เทอร์โม) และตรวจพบการใช้กล้องฟิวชั่นที่ CCD FX
(ฟิชเชอร์ไบโอเทค) GAPDH ถูกใช้ในการโหลดปกติโปรตีน.
ระดับการแสดงออกของโปรตีนที่ถูกแสดงเป็นสัดส่วนเทียบกับ
GPADH

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างโปรตีนทั้งหมด ( 200 มิลลิกรัม ) เป็น 12 % ของ sdspolyacrylamide โหลดgel electrophoresis และโอนไปยัง 0.45 มม.ไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ( ไบโอ ราด 162-0115 , ) เมมเบรนบล็อกที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับ 5 % ไม่ใช้นมไขมันในtbs-t และจากนั้นล้างด้วย 1% ปลอดไขมันนมในชา tbs-t. เมมเบรนคืออุณหภูมิ 4 องศา C สำหรับค้างคืนกับแอนติบอดีประถมศึกษาหลังจากที่สามซัก 1% ปลอดไขมันนมใน tbs-t 1x แต่ละ5 นาทีที่ , เมมเบรนบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 - 2 ชั่วโมงกับระดับเอนไซม์ conjugated แอนติบอดี .ตามด้วยล้างด้วย 1X tbs-t สามครั้งละ 10 นาที โปรตีนวงดนตรีที่ถูกพัฒนาขึ้นโดย supersignal ตะวันตกขยายระยะเวลา ดูราพื้นผิว Kit ( ร้อน ) และตรวจพบการใช้ FX กล้อง CCD ฟิวชั่น( Fisher BIOTEC ) gapdh ใช้ปกติโหลดโปรตีนระดับการแสดงออกของโปรตีนจะแสดงเป็นญาติ อัตราส่วนgpadh .