components: 10 ng of the donor and

components: 10 ng of the donor and recipient plasmids, 20 nM of
each forward and reverse primer, 200 lM of each dNTP, 1 Phusion
buffer and 1.6 U of Phusion DNA polymerase (Finnzymes,
Espoo, Finland). TPCR reactions for the mutagenesis protocol were
the same as for DNA cloning except that a single plasmid harboring
the target gene subjected to mutagenesis was used at 20 ng per
reaction and the mutagenic-primers (7 and 3 for CaM and Gb1,
respectively) were each added at 20 nM. If alternative primer concentrations
were used, this is noted in the text. Following completion
of the TPCR reactions, 1 ll of 20U/ll DpnI was added to 10 ll
of each of the TPCR reactions followed by incubation for 1–2 h at
37 C. The DNA was then directly transformed into highly-efficient
competent E. coli DH5a cells prepared as previously described
(Inoue et al., 1990).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ส่วนประกอบ: 10 ng ของผู้บริจาคและผู้รับ plasmids, 20 นิวตันเมตรละไปข้างหน้า และย้อนกลับพื้น 200 lM ละ dNTP, 1 Phusionบัฟเฟอร์และ 1.6 U ของ Phusion ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (FinnzymesEspoo ฟินแลนด์) TPCR ปฏิกิริยาสำหรับโพรโทคอล mutagenesis ได้เหมือนกับดีเอ็นเอโคลนยกเว้นที่เดียว plasmid harboringมีใช้ยีนเป้าหมายการ mutagenesis ที่ 20 ng ต่อปฏิกิริยาและการ mutagenic-ไพรเมอร์ (7 และ 3 แคมและ Gb1ตามลำดับ) แต่ละเพิ่มที่ 20 nM ถ้าความเข้มข้นทางเลือกรองพื้นถูกใช้ นี้จะระบุไว้ในข้อความ ต่อไปนี้เสร็จสมบูรณ์ของปฏิกิริยา TPCR, 1 จะ 20U DpnI จะถูกเพิ่มเข้าไป 10 จะของแต่ละปฏิกิริยา TPCR ตาม ด้วยคณะทันตแพทยศาสตร์สำหรับ h 1 – 2 ที่ค. 37 ดีเอ็นเอถูกแล้วตรงแก่นมีประสิทธิภาพสูงเชี่ยวชาญ E. coli DH5a เซลล์เตรียมที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(โนะอุเอะและ al., 1990)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ส่วนประกอบ: 10 จำนวนของผู้บริจาคและผู้รับพลาสมิด, 20 นิวตันเมตร
แต่ละข้างหน้าและย้อนกลับประถมศึกษา 200 LM ของแต่ละ dNTP 1? Phusion
บัฟเฟอร์และ 1.6 U ของ Phusion ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (Finnzymes,
เอสโป, ฟินแลนด์) ปฏิกิริยา TPCR โปรโตคอลฉับก็
เหมือนกับการโคลนดีเอ็นเอยกเว้นว่าพลาสมิดเดียวเก็บงำ
ยีนเป้าหมายภายใต้การกลายพันธุ์ถูกนำมาใช้ที่ 20 ศึกษาต่อ
ปฏิกิริยาและ-ไพรเมอร์รัน (7 และ 3 สำหรับ Cam และ gB1,
ตามลำดับ) แต่ละคน เพิ่มที่ 20 นาโนเมตร ถ้าความเข้มข้นประถมศึกษาทางเลือกที่
ถูกนำมาใช้นี้จะถูกระบุไว้ในข้อความ หลังจากเสร็จสิ้น
การเกิดปฏิกิริยา TPCR 1 LL ของ 20U / LL DpnI ถูกบันทึกอยู่ใน 10 LL
ของแต่ละปฏิกิริยา TPCR ตามฟักตัวประมาณ 1-2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ
37 องศาเซลเซียส ดีเอ็นเอจากนั้นก็เปลี่ยนโดยตรงมีประสิทธิภาพสูง
สามารถ E. coli เซลล์ DH5a จัดทำตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
(อิโนอุเอะ et al., 1990)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วนประกอบ : 10 ng ของผู้บริจาคและผู้รับ ) 20 nm ของ
แต่ละไปข้างหน้าและย้อนกลับ ไพรเมอร์ , 200 LM ของแต่ละ dntp 1  phusion
บัฟเฟอร์และ 1.6 U ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ( finnzymes
phusion , Espoo , ประเทศฟินแลนด์ ) tpcr ปฏิกิริยาสำหรับการโพรโทคอลถูก
เหมือนโคลนดีเอ็นเอยกเว้น ในเดี่ยว harboring
เป้าหมายยีนภายใต้การใช้ที่ 20 นาโนกรัมต่อ
และปฏิกิริยา PCR ผล ( 7 และ 3 CAM และ gb1
, ตามลำดับ ) โดยแต่ละเพิ่ม 20 nm . ถ้าทางเลือก
ความเข้มข้นรองพื้นใช้ นี่คือ ที่ระบุไว้ในข้อความ หลังเสร็จสิ้น
ของ tpcr ปฏิกิริยา 1 จะ 20u / จะ dpni เพิ่ม 10 ll
ของแต่ละ tpcr ปฏิกิริยาตามระยะเวลา 1 – 2 H ที่
37  ซีดีเอ็นเอเปลี่ยนแล้วตรงเข้าไปในที่มีประสิทธิภาพสูง
ความสามารถ dh5a เซลล์ E . coli ที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้
( อิโนะอุเอะ et al . , 1990 )