2.6. LC–QTOF–MS based identificatio

2.6. LC–QTOF–MS based identification
Identification of black mulberry phenolics was performed by an
LC–PDA–QTOF–MS system, using the same chromatographic and
mass spectrometric conditions as described before byMoco et al.
(2006). A Luna C18(2) pre-column (2.0 4 mm) and analytical column (2.0150 mm, 10 nm, particle size 3lm) from Phenomenex
(Torrance, CA, USA) were used for chromatographic separation. For
LC–PDA–MS analysis, each filtered sample, with an injection volume of 5lL, was injected into the system using formic acid:water
(1:1000, v/v; eluent A) and formic acid:acetonitrile (1:1000, v/v;
eluent B) as elution solvents. Flow was set at 0.19 mL/min with
the gradient from 95% eluent A and 5% eluent B to 65% eluent A
and 35% eluent B across a period of 45 min. The temperature was
set at 40C for the column and at 20C for the samples. UV absorbance was measured with a Waters 2996 PDA (krange from 240 to
600 nm) and ESI-MS analysis was performed using a QTOF Ultima
V4.00.00 mass spectrometer (Waters Corporation, MS Technologies) in positive mode. A collision energy of 10 eV was used for
full-scan LC–MS in them/zrange 100 to 1500. Leucine enkephalin,
[MH]

= 554.2620, was used for online mass calibration (lock
mass).
2.7. In vitro digestion procedure
For the determination of the free soluble polyphenols in black
mulberry fruit and juice samples, which might be potentially available for uptake under GI digestion conditions, anin vitro digestion
method was carried out on fresh-frozen powdered forms of both
samples, following the protocol described byMcDougall, Dobson,
Smith, Blake, and Stewart (2005). Release of phytochemicals from
fruit and juice matrices was analyzed at different stages of digestion. These stages represented the aliquots from gastric digesta
(post gastric, PG) and from intestinal digesta, including IN (representing the material that entered the serum; the dialyzable fraction) and OUT (representing the material that remained in the GI
tract; the undialyzable fraction). Post gastric (PG), IN and OUT samples were stored at20C until further analysis. These samples
were thawed and centrifuged at 18,000 rpm prior to analysis.
TPC, TFC, and TMA contents, and TAC were determined for each
of these PG, IN and OUT samples using the methods described
above.
2.8. Statistical analysis
All analyses were performed with three technical and three biological replicates. Data were subjected to statistical analysis using
SPSS software (version 11.5, SPSS Inc.) for the analysis of variance
(ANOVA), based onn= 3 processing events. Duncan’s new multiple
range test was used to analyze differences between treatments.
Differences atp< 0.05 were considered to be significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. LC – QTOF – MS ใช้รหัสรหัสของหม่อนสีดำ phenolics ทำโดยการระบบ LC – PDA – QTOF – MS โดยใช้โครมาเหมือนกัน และมวล spectrometric เงื่อนไขตามที่อธิบายไว้ก่อน byMoco et al(2006) . A Luna C18(2) ก่อนคอลัมน์ (2.0 4 มิลลิเมตร) และวิเคราะห์คอลัมน์ (2.0 150 มม. 10 nm, 3lm ขนาดอนุภาค) จาก Phenomenex(รันซ์ CA, USA) ถูกใช้สำหรับการแยกโครมา สำหรับLC-PDA – MS วิเคราะห์ ตัวอย่างแต่ละกรอง ด้วยการฉีด 5lL ถูกฉีดเข้าไปในระบบใช้ป้องกันปลวกมดกรด: น้ำ(1: 1000, v/v; eluent A) และป้องกันปลวกมดกรด: acetonitrile (1: 1000, v/veluent ที่ B) เป็นตัวทำละลายชะ ตั้งค่ากระแสที่ 0.19 mL/นาที ด้วยการไล่ระดับสีจาก eluent 95% A และ 5% eluent B การ eluent 65% Aและ B eluent 35% ในระยะเวลา 45 นาที อุณหภูมิตั้ง 40 C สำหรับคอลัมน์ และ 20 C สำหรับตัวอย่าง มีวัด UV absorbance กับ 2996 น้ำ PDA (krange จาก 240 การ600 nm) และดำเนินการวิเคราะห์ ESI MS ใช้ลอร์ด QTOF ที่ให้สุดV4.00.00 โดยรวมสเปกโตรมิเตอร์ (บริษัทน้ำ เทคโนโลยี MS) ในโหมดบวก แรงกระแทกของ 10 eV ใช้สำหรับการสแกนแบบเต็ม LC – MS ในพวกเขา zrange/100-1500 ไธร enkephalin[M H]= 554.2620 ใช้สำหรับออนไลน์มวล (ล็อกมวล)2.7 ขั้นตอนย่อยที่ในหลอดทดลองสำหรับการกำหนดโพลีฟีนละลายฟรีสีดำหม่อนผลไม้และน้ำตัวอย่าง ซึ่งอาจมีอาจดูดซึมย่อยสภาวะ GI, anin หลอดทดลองย่อยวิธีถูกดำเนินบนแช่แข็งสดแบบผงทั้งสองอย่างตัวอย่าง ต่อโพรโทคอลอธิบาย byMcDougall ด็อบสันสมิธ เบล็ค และสจ๊วต (2005) ของสารอาหารจากพืชจากน้ำผลไม้และผลไม้เมทริกซ์ถูกวิเคราะห์ในระยะต่าง ๆ ของการย่อยอาหาร ขั้นตอนแสดงการ aliquots จาก digesta กระเพาะอาหาร(ลงในกระเพาะอาหาร PG) จากลำไส้ digesta รวม IN (แทนวัสดุที่ป้อนซีรั่ม เศษ dialyzable) และ ออก (แสดงวัสดุที่ยังคงอยู่ใน GIทางเดิน เศษ undialyzable ส่วน) ลงในกระเพาะอาหาร (PG) และตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ 20 C จนถึงการวิเคราะห์เพิ่มเติม ตัวอย่างเหล่านี้ขับ และเหวี่ยงที่ 18,000 rpm ก่อนวิเคราะห์TPC ที และ TMA เนื้อหา และ TAC ถูกกำหนดสำหรับแต่ละของ PG เหล่านี้ และออกตัวอย่างโดยใช้วิธีอธิบายข้างต้น2.8. สถิติวิเคราะห์ดำเนินการวิเคราะห์ทั้งหมด ด้วยเทคนิคสามและ replicates ชีวภาพสาม ข้อมูลที่ถูกต้องโดยใช้การวิเคราะห์ทางสถิติ(รุ่น 11.5, SPSS Inc.) ซอฟต์แวร์ SPSS ในการวิเคราะห์ความแปรปรวน(ANOVA), ใช้อ่อ =กิจกรรมประมวลผล 3 หลายใหม่ของดันแคนทดสอบช่วงนี้ใช้ในการวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างการรักษาความแตกต่างที่ atp < 0.05 ได้ถือเป็นสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 LC-MS-QTOF
ตามบัตรประจำตัวบัตรประจำตัวของฟีนอลหม่อนสีดำได้รับการดำเนินการโดยระบบ
LC-PDA-QTOF-MS
โดยใช้โครมาเหมือนกันและเงื่อนไขspectrometric มวลตามที่อธิบายไว้ก่อน byMoco et al.
(2006) Luna C18 (2) ก่อนคอลัมน์ (2.0? 4 มิลลิเมตร) และคอลัมน์วิเคราะห์ (2.0? 150 มิลลิเมตร 10 นาโนเมตรขนาดอนุภาค 3lm) จาก Phenomenex
(Torrance, CA, USA) ถูกนำมาใช้สำหรับการแยกสาร สำหรับการวิเคราะห์ LC-PDA-MS แต่ละตัวอย่างกรองที่มีปริมาณการฉีด 5lL ถูกฉีดเข้าไปในระบบโดยใช้กรดฟอร์มิ: น้ำ (1: 1000 ปริมาตร / ปริมาตร; ชะ A) และกรดฟอร์มิ: acetonitrile (1: 1,000 , ปริมาตร / ปริมาตร; ชะ B) เป็นตัวทำละลายชะ ไหลตั้งอยู่ที่ 0.19 มิลลิลิตร / นาทีกับลาดชะจาก95% และ B ชะ 5% ถึง 65% ชะและ 35% ชะ B ตลอดระยะเวลา 45 นาที อุณหภูมิที่ถูกตั้งไว้ที่ 40 องศาเซลเซียสสำหรับคอลัมน์และที่ 20 องศาเซลเซียสสำหรับตัวอย่าง การดูดกลืนรังสียูวีได้รับการวัดที่มีน้ำ 2,996 PDA (krange ที่จะ 240 จาก600 นาโนเมตร) และการวิเคราะห์ ESI-MS ได้รับการดำเนินการโดยใช้ QTOF Ultima V4.00.00 สเปกโตรมิเตอร์มวล (วอเตอร์คอร์ปอเรชั่น MS เทคโนโลยี) ในโหมดบวก พลังงานการปะทะกันของ 10 eV ใช้สำหรับเต็มสแกนLC-MS ในพวกเขา / zrange 100 ถึง 1500 Leucine enkephalin, [M? H]? = 554.2620 ถูกนำมาใช้สำหรับการสอบเทียบมวลออนไลน์ (ล็อคมวล.) 2.7 ในขั้นตอนการย่อยอาหารในหลอดทดลองสำหรับความมุ่งมั่นของโพลีฟีนที่ละลายน้ำได้ฟรีในสีดำผลไม้หม่อนและตัวอย่างน้ำผลไม้ซึ่งอาจจะเป็นที่อาจเกิดขึ้นสามารถใช้ได้สำหรับการดูดซึมภายใต้เงื่อนไขการย่อยอาหารGI ย่อยหลอดทดลอง anin วิธีการดำเนินการในรูปแบบผงสดแช่แข็งของทั้งสองตัวอย่างต่อไปนี้โปรโตคอลที่อธิบาย byMcDougall, ด๊อบสันสมิธ เบลคและสจ๊วต (2005) การเปิดตัวของสารอาหารจากพืชจากเมทริกซ์ผลไม้และน้ำผลไม้ได้รับการวิเคราะห์ในแต่ละขั้นตอนของการย่อยอาหาร ขั้นตอนเหล่านี้เป็นตัวแทนของ aliquots จาก digesta กระเพาะอาหาร(โพสต์ในกระเพาะอาหาร, PG) และจาก digesta ลำไส้รวมทั้งใน (แทนวัสดุที่ป้อนซีรั่มนั้นส่วน dialyzable) และ OUT (แทนวัสดุที่ยังคงอยู่ในลำไส้ระบบทางเดินนั้นส่วนundialyzable ) โพสต์ในกระเพาะอาหาร (PG), IN และตัวอย่าง OUT ถูกเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ต่อไป ตัวอย่างเหล่านี้ถูกละลายและหมุนเหวี่ยงที่ 18,000 รอบต่อนาทีก่อนที่จะมีการวิเคราะห์. TPC, TFC และเนื้อหา TMA และแทคได้รับการพิจารณาสำหรับแต่ละเหล่านี้PG, IN และตัวอย่างออกโดยใช้วิธีการที่อธิบายไว้ข้างต้น. 2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติการวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการกับสามทางเทคนิคและสามซ้ำทางชีวภาพ ข้อมูลถูกยัดเยียดให้การวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้ซอฟแวร์โปรแกรม SPSS (รุ่น 11.5, SPSS อิงค์) สำหรับการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) ตาม Onn = 3 เหตุการณ์ที่เกิดขึ้นในการประมวลผล ดันแคนใหม่หลายการทดสอบช่วงถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างการรักษา. ความแตกต่างของเอทีพี <0.05 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ