The composition of the culture medi

The composition of the culture medium
5 used was as follows: 45 mg of ammonium sulfate, 30 mg of magnesium
sulfate heptahydrate, 10 mg of potassium dihydrogen phosphate, 5 mg of dipotassium hydrogen phosphate, 10 mg of calcium chloride dihydrate, 1 O mg of calcium carbonate, 2 mg of ferric citrate, 2 mg of citric acid, 2 mg of
EDTA-2Na, 0.07 mg of boric acid, 0.15 mg of manganese sulfate, 0.30 mg of
10 zinc sulfate, 0.3 mg of copper sulfate, 0.003 mg of sodium molybdate, 0.07
mg of cobalt chloride, 2 µg of biotin, 10 µg of thiamine HCI, 1 µg of vitamin 86,
1 µg of vitamin 812 in 1 L of distilled water (pH 4.0). [0061]
The dry weights of the algae in 1 L of the culture medium were
15 measured during the cultivation period. After the completion of the cultivation, the recovered algae were freeze-dried, and the oil contents were measured using the MQC-type oil content analyzer manufactured by Oxford Instruments as described in the section 1-2.
[0062]
20 Although the growth rates of สายพันธุ์ JH1011, JH1012 and JH1013 were almost equal to that ofสายพันธุ์ 5P, the ไลปิด contents were relatively high, and as a result, the ผลิตภาพไลปิด of each สายพันธุ์ increased remarkably (รูป SA and รูป 58). The ผลิตภาพไลปิด (gram) per cultivation period (a day), per culture area (m2) is shown in Table 1 below.
25 [0063] (Table 1)
ผลิตภาพไลปิด per cultivation period, per culture area in cultivation
of P. ellipsoidea สายพันธุ์ Obi and Obi-derived variants: สายพันธุ์ SP; JH 1011; JH1012; and JH1013, using the raceway culture system

(unit: g/m2/day)
As shown in Table 1, as a result of the indoor raceway evaluation, the ผลิตภาพไลปิด of สายพันธุ์ JH1011, JH1012 and JH1013 increased by up to
68% and 84% compared to the wild-type สายพันธุ์ and สายพันธุ์ SP, respectively.
5

(Example 2) Genome Analysis of สายพันธุ์ JH 1011, JH 1012 and

JH1013
In order to know which genetic mutations induced the improvement of the ผลิตภาพไลปิด observed in สายพันธุ์ JH1011, JH1012 and JH1013
1 O isolated in Example 1, the genomes of the three สายพันธุ์ were analyzed

(resequencing) by lllumina HiSeq paired-endsequencing. The
resequencing results were matched on the P. ellipsoidea สายพันธุ์ Obi genome sequence, which has already been established, to create maps using the ELANDv2 software. The information on the P. ellipsoidea สายพันธุ์ Obi
15 genome sequence also includes the positions of the exons and the intrans of the genes which were predicted from the sequence information obtained by the RNA-seq. Based on the information, the mutated genes of สายพันธุ์ JH1011, JH1012 and JH1013 were analyzed by comparing with the genome
sequences of สายพันธุ์ Obi and สายพันธุ์ SP, which is the direct parental สายพันธุ์ of

20 สายพันธุ์ JH1011, JH1012 and JH1013. [0064]
Table 2A and Table 2B below show the analysis results of the

comparison of the genome sequence of สายพันธุ์ JH1013. In this regard, Table

28 continues from Table 2A.

25 [0065] (Table 2A)
Genetic Mutations Detected in สายพันธุ์ JH1013

The annotation was conducted based on the results of the Blast search through the Swiss-Prat protein database and the motif search using
30 the InterPro. CDR is a coding region; UTR is an untranslated region; and

• intergenic is a space between two genes.




1 CDR NS Leu zipper containing protein
2 UTR Saccharopine dehydrogenase
3 UTR Putative uncharacterized protein
4 CDR NS DYRK
5 intron NADP-dependent Aldo/keto reductase
6 lntron Pyrophosphate-energised proton pump
7 UTR Putative uncharacterized protein
8 CDR NS Putative uncharacterized protein
9 CDR NS Short-chain dehydrogenase/reductase
10 UTR Putative uncharacterized protein
11 intron Riboflavin synthase
12 CDR NS Putative uncharacterized protein
13 UTR Heat-shock protein 70
14 UTR CRC-domain containing protein (DNA-binding motif)
15 intron Putative uncharacterized protein
16 CDR s Sacsin: cochaperonin
17 lntron Major facilitator superfamlly protein
18 CDR s Ribulose bisphosphate carboxylase, small chain
19 UTR F-box/LRR-repeat protein 15
20 lntron lntron-binding protein
21 lntron Probable serine/threonine- / dual specificity protein kinase, catalytic domain
22 UTR No similar proteins in the database
23 UTR No similar proteins in the database
24 intron No similar proteins in the database
25 intron Chitin synthase
26 intron Outer dynein arm protein 1
27 UTR Syntaxin-61
28 intron Conserved hypothetical protein
29 UTR Probalbe endonuclease/exonuclease/phosphatase family protein
30 intron TBC-domain-containing protein;

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

องค์ประกอบของสื่อวัฒนธรรม5 ใช้เป็น: แอมโมเนียมซัลเฟต 30 มก.แมกนีเซียม 45 มิลลิกรัมซัลเฟตลังกะสี 10 มิลลิกรัมของโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต ติกและไดโพแทสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟต แคลเซียมคลอไรด์ dihydrate, 1 O มิลลิกรัมของแคลเซียมคาร์บอเนต ซิเตรทเฟอร์ 2 มิลลิกรัมของกรด มิลลิกรัม 2 2 มิลลิกรัม 10 มิลลิกรัม 5 มิลลิกรัมEDTA 2Na, 0.07 มิลลิกรัมเป็นกรด แมงกานีสซัลเฟต 0.30 มิลลิกรัม 0.15 มิลลิกรัม10 สังกะสี 0.003 มิลลิกรัมของโซเดียม molybdate, 0.07 ซัลเฟต คอปเปอร์ซัลเฟต 0.3 มิลลิกรัมมิลลิกรัมของโคบอลต์คลอไรด์ 2 µg ของโบโอติน 10 µg ของไทอะของ HCI, 1 µg วิตามิน 861 µg วิตามิน 812 ใน 1 L ของน้ำกลั่น (pH 4.0) [0061]มีน้ำหนักแห้งของสาหร่ายใน 1 L ของสื่อวัฒนธรรม15 วัดในช่วงเพาะปลูก หลังจากเสร็จสิ้นการปลูก สาหร่ายกู้คืนถูกแห้ง และหาน้ำมันถูกวัดโดยใช้ตัว MQC ชนิดน้ำมันเนื้อหาวิเคราะห์ผลิต โดยเครื่องมือ Oxford ที่อธิบายในข้อ 1-2[0062]20 แม้ว่าอัตราการเติบโตของสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 ได้เกือบเท่ากับ ofสายพันธุ์ ที่ 5P ไลปิดเนื้อหาค่อนข้างสูง และเป็นผล ผลิตภาพไลปิดของสายพันธุ์แต่ละเพิ่มขึ้นอย่างน่าทึ่ง (รูป SA และรูป 58) ผลิตภาพไลปิด (กรัม) ต่อระยะเวลาการเพาะปลูก (วัน), ต่อวัฒนธรรมพื้นที่ (m2) แสดงในตารางที่ 1 ข้างล่างนี้25 [0063] (ตารางที่ 1)ผลิตภาพไลปิดต่อการเพาะปลูก ต่อวัฒนธรรมพื้นที่เพาะปลูกของ P. ellipsoidea สายพันธุ์โอบิและโอบิมาตัวแปร: สายพันธุ์ SP JH 1011 JH1012 และ JH1013 การใช้ระบบวัฒนธรรมสนามแข่ง(หน่วย: กรัม m2 วัน) ดังแสดงในตารางที่ 1 ผลการประเมินสนามแข่งในร่ม ผลิตภาพไลปิดของสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 เพิ่มขึ้นถึง68 และ 84% เมื่อเทียบกับสายพันธุ์ชนิดป่า และสายพันธุ์ SP ตามลำดับ5(ตัวอย่าง 2) การวิเคราะห์พันธุ JH สายพันธุ์ 1011, JH 1012 และJH1013เพื่อที่จะทราบการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมซึ่งเกิดการปรับปรุงของผลิตภาพไลปิดที่พบในสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH10131 O แยกในตัวอย่าง 1, genomes ของสายพันธุ์สามได้วิเคราะห์(resequencing) โดย lllumina HiSeq จับคู่ endsequencing การผล resequencing ถูกจับคู่บน P. ellipsoidea สายพันธุ์โอบิพันธุลำดับที่ แล้วก่อตั้ง การสร้างแผนที่โดยใช้ซอฟต์แวร์ ELANDv2 ข้อมูลในสายพันธุ์ P. ellipsoidea โอบิลำดับพันธุ 15 ยังมีตำแหน่งของการ exons และ intrans ของยีนซึ่งมีการคาดการณ์จากข้อมูลลำดับได้ โดย RNA หมายเลขลำดับ ตามข้อมูล ยีนการกลายพันธุ์ของสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 ถูกวิเคราะห์ โดยเปรียบเทียบกับจีโนลำดับของสายพันธุ์โอบิและสายพันธุ์ SP ซึ่งเป็นสายพันธุ์ผู้ปกครองโดยตรงของ20 สายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 [0064]ตารางที่ 2A และ 2B ตารางด้านล่างแสดงผลการวิเคราะห์การการเปรียบเทียบลำดับพันธุสายพันธุ์ JH1013 ในเรื่องนี้ ตาราง28 ต่อจากตาราง 2A25 [0065] (ตารางที่ 2A)กลายพันธุ์ทางพันธุกรรมที่พบในสายพันธุ์ JH1013คำอธิบายการดำเนินการตามผลลัพธ์ของการค้นหาระเบิดผ่านฐานข้อมูลโปรตีน Prat สวิสและค้นหาภาพโดยใช้30 InterPro ที่ CDR เป็นภูมิภาคเขียน UTR ภูมิภาค untranslated ที่ไม่ และ• intergenic เป็นช่องว่างระหว่างสองยีน 1 CDR NS ลิวซิปที่ประกอบด้วยโปรตีน2 UTR Saccharopine dehydrogenaseโปรตีน UTR อ้างว่าฝา uncharacterized 34 CDR NS DYRKintron 5 ขึ้นอยู่กับ NADP reductase Aldo/keto6 lntron อันดับ Pyrophosphate โปรตอนปั๊มโปรตีน UTR อ้างว่าฝา uncharacterized 7โปรตีน CDR NS อ้างว่าฝา uncharacterized 89 โซ่สั้น CDR NS dehydrogenase/reductaseโปรตีน UTR อ้างว่าฝา uncharacterized 1011 intron Riboflavin synthase12 CDR NS Putative uncharacterized protein13 UTR Heat-shock protein 7014 UTR CRC-domain containing protein (DNA-binding motif)15 intron Putative uncharacterized protein16 CDR s Sacsin: cochaperonin17 lntron Major facilitator superfamlly protein18 CDR s Ribulose bisphosphate carboxylase, small chain19 UTR F-box/LRR-repeat protein 1520 lntron lntron-binding protein21 lntron Probable serine/threonine- / dual specificity protein kinase, catalytic domain22 UTR No similar proteins in the database23 UTR No similar proteins in the database24 intron No similar proteins in the database25 intron Chitin synthase26 intron Outer dynein arm protein 127 UTR Syntaxin-6128 intron Conserved hypothetical protein29 UTR Probalbe endonuclease/exonuclease/phosphatase family protein30 intron TBC-domain-containing protein;

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

องค์ประกอบของอาหารเลี้ยง
5 ใช้เป็นดังนี้: 45 มิลลิกรัมของแอมโมเนียมซัลเฟต 30 มิลลิกรัมของแมกนีเซียม
ซัลเฟต heptahydrate, 10 มิลลิกรัมของโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต 5 มิลลิกรัม dipotassium ไฮโดรเจนฟอสเฟต 10 มิลลิกรัมแคลเซียมคลอไรด์ dihydrate 1 O มิลลิกรัม แคลเซียมคาร์บอเนต, 2 มิลลิกรัมซิเตรตเฟอริก 2 มิลลิกรัมกรดซิตริก 2 มิลลิกรัม
EDTA-2NA 0.07 มิลลิกรัมกรดบอริก 0.15 mg ของซัลเฟตแมงกานีส 0.30 mg ของ
10 สังกะสีซัลเฟต 0.3 mg ของคอปเปอร์ซัลเฟต, 0.003 มิลลิกรัม โซเดียมโมลิบ 0.07
mg ของโคบอลต์คลอไรด์ 2 ไมโครกรัมของไบโอติน 10 ไมโครกรัมของวิตามินบี HCI 1 ไมโครกรัมของวิตามิน 86,
1 ไมโครกรัมของวิตามิน 812 ใน 1 ลิตรของน้ำกลั่น (pH 4.0) [0061]
น้ำหนักแห้งของสาหร่ายใน 1 ลิตรของกลางวัฒนธรรมถูก
15 วัดในช่วงระยะเวลาการเพาะปลูก หลังจากเสร็จสิ้นการเพาะปลูกสาหร่ายที่กู้คืนได้แห้งและเนื้อหาน้ำมันถูกวัดโดยใช้ MQC ชนิดวิเคราะห์ปริมาณน้ำมันที่ผลิตโดยฟอร์ดเครื่องดนตรีตามที่อธิบายไว้ในส่วน 1-2.
[0062]
20 ถึงแม้ว่าอัตราการเจริญเติบโต ของสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 เกือบเท่ากับว่าสายพันธุ์ 5P ที่ไลปิดเนื้อหาค่อนข้างสูงและเป็นผลให้การผลิตภาพไลปิดของแต่ละสายพันธุ์เพิ่มขึ้นอย่างน่าทึ่ง (SA รูปและรูปที่ 58) ผลิตภาพไลปิด (กรัม) ต่อระยะเวลาการเพาะปลูก (วัน) ต่อพื้นที่วัฒนธรรม (M2) จะแสดงในตารางที่ 1 ด้านล่าง.
25 [0063] (ตารางที่ 1)
ผลิตภาพไลปิดต่อระยะเวลาการเพาะปลูกต่อวัฒนธรรมพื้นที่ในการเพาะปลูก
สายพันธุ์พี ellipsoidea สายพันธุ์โอบีและโอบีมา: สายพันธุ์ sp; JH 1011; JH1012; และ JH1013 ใช้ระบบวัฒนธรรมร่องน้ำ(หน่วย: g / m2 / วัน) ดังแสดงในตารางที่ 1 ซึ่งเป็นผลของการประเมินผลร่องน้ำในร่มที่ผลิตภาพไลปิดของสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 เพิ่มขึ้นถึง68 % และ 84% เมื่อเทียบกับชนิดป่าสายพันธุ์และสายพันธุ์ SP ตามลำดับ. 5 (ตัวอย่างที่ 2) การวิเคราะห์จีโนมของสายพันธุ์ JH 1011 JH 1012 และJH1013 เพื่อที่จะได้รู้ว่าที่กลายพันธุ์ทางพันธุกรรมเหนี่ยวนำให้เกิดการปรับปรุงการผลิตที่ภาพ ไลปิดที่สังเกตในสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 1 โอโดดเดี่ยวในตัวอย่างที่ 1, จีโนมของทั้งสามสายพันธุ์ที่ได้รับการวิเคราะห์(resequencing) โดย lllumina HiSeq จับคู่-endsequencing ผล resequencing ถูกจับคู่ในลำดับจีโนมพี ellipsoidea สายพันธุ์โอบีซึ่งได้รับการจัดตั้งขึ้นแล้วในการสร้างแผนที่โดยใช้ซอฟแวร์ ELANDv2 ข้อมูลเกี่ยวกับพี ellipsoidea สายพันธุ์โอบี15 จีโนมลำดับนอกจากนี้ยังรวมถึงตำแหน่งของ exons และ intrans ของยีนที่มีการคาดการณ์จากข้อมูลลำดับที่ได้รับจาก RNA-seq บนพื้นฐานของข้อมูลที่มียีนกลายพันธุ์ของสายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 ถูกนำมาวิเคราะห์โดยเปรียบเทียบกับจีโนมลำดับของสายพันธุ์โอบีและสายพันธุ์ SP ซึ่งเป็นสายพันธุ์ของผู้ปกครองโดยตรงของ20 สายพันธุ์ JH1011, JH1012 และ JH1013 [0064] 2A โต๊ะและตาราง 2B ด้านล่างแสดงผลการวิเคราะห์เปรียบเทียบลำดับจีโนมของสายพันธุ์ JH1013 ในเรื่องนี้ตารางที่28 ต่อจากตารางที่ 2A. 25 [0065] (ตารางที่ 2A) พันธุกรรมกลายพันธุ์ที่พบในสายพันธุ์ JH1013 คำอธิบายประกอบได้ดำเนินการขึ้นอยู่กับผลของการค้นหาระเบิดผ่านฐานข้อมูลโปรตีนสวิส Prat และการค้นหาแรงจูงใจโดยใช้30 InterPro CDR เป็นภูมิภาคที่เข้ารหัส; UTR เป็นภูมิภาคที่ไม่ได้แปล; และ• intergenic ช่องว่างระหว่างสองยีน. 1 CDR NS Leu ซิปที่มีโปรตีน2 UTR Saccharopine dehydrogenase 3 UTR สมมุติโปรตีน uncharacterized 4 CDR NS DYRK 5 intron NADP ขึ้นอยู่กับอัลโด / Keto reductase 6 lntron โปรตอนปั๊ม pyrophosphate เพิ่มพลัง7 UTR สมมุติ uncharacterized โปรตีน8 CDR NS สมมุติโปรตีน uncharacterized 9 CDR NS ห่วงโซ่สั้น dehydrogenase / reductase 10 UTR สมมุติ uncharacterized โปรตีน11 intron Riboflavin เทส12 CDR NS สมมุติโปรตีน uncharacterized 13 UTR ความร้อนช็อกโปรตีน 70 14 UTR CRC โดเมนที่มีโปรตีน (DNA ผูกพันแม่ลาย ) 15 intron สมมุติ uncharacterized โปรตีน16 CDR s Sacsin: cochaperonin 17 lntron อำนวยความสะดวกเมเจอร์ superfamlly โปรตีน18 CDR s คาร์บอกซิ bisphosphate Ribulose โซ่ขนาดเล็ก19 UTR กล่อง F-box / LRR ซ้ำโปรตีน 15 20 lntron lntron-binding protein 21 lntron ซีรีนน่าจะเป็น / ธ รีโอนี - / คู่โปรตีนไคเนสจำเพาะโดเมนเร่งปฏิกิริยา22 UTR โปรตีนไม่มีที่คล้ายกันในฐานข้อมูล23 UTR โปรตีนไม่มีที่คล้ายกันในฐานข้อมูล24 intron ไม่มีโปรตีนที่คล้ายกันในฐานข้อมูล25 intron ไคตินเทส26 intron แขน dynein นอกโปรตีน 1 27 UTR Syntaxin-61 28 intron อนุรักษ์โปรตีนสมมุติ29 UTR Probalbe โปรตีน endonuclease / exonuclease / phosphatase ครอบครัว30 intron TBC โดเมนที่มีส่วนผสมของโปรตีน