Chromatographic separations were performed on glass-backed LiChrospher RP-18 WF 2545 HPTLC plates (20 cm*10 cm, Merck, Darmstadt, Germany). The standards were applied as spots in increasing volumes (from 1 µL to 6 µL) using the Linomat 5 TLC applicator (Camag, Muttenz, Switzerland) with an application rate of 60 nL/s. The mobile phase, an optimized solvent system consisting of citrate buffer (pH3.00): methanol: formic acid (96:4:5 v/v/v), was selected in order to obtain a good separation of all the inverstigated compounds. The plates were developed using the ascending technique, in a normal chromatographic chamber (Camag) saturated for 15 min with the vapors of mobile phase, to a developing distance of 7.0 cm, at room temperature (≈20⁰). After the chromatographic elution, the plates were dried at room temperature and prepared for the spots visualization procedure. Different common detection reagents including 0-phtalaldehide, fluorescamine and ninhydrin were tested acses. Implementation of the DPPH reaction in the developed HPTLC method required optimization of several parameters (such as time/temperature needed to dry the chromatographic plates and DPPH solution concentration) in order to obtain accurate and reproducible results. Also, according to the best results, the plates were dried in the oven for 1 h at 65 ⁰C, cooled at room temperature and sprayed with a freshly preparaed 0.02% DPPH solution in ethanol. The investigated amines were detected in visible light as bright-white spots against a purple background.
การแยกสารได้ดำเนินการบนกระจกได้รับการสนับสนุน LiChrospher RP-18 WF 2545 แผ่นกราฟี (20 ซม * 10 ซม. เมอร์ค, Darmstadt, เยอรมนี) มาตรฐานถูกนำไปใช้เป็นจุดในปริมาณที่เพิ่มขึ้น (ตั้งแต่วันที่ 1 ไมโครลิตรถึง 6 ไมโครลิตร) โดยใช้ Linomat 5 applicator TLC (Camag, Muttenz วิตเซอร์แลนด์) มีอัตราการประยุกต์ใช้ 60 nL / วินาที เฟสเคลื่อนที่, ระบบตัวทำละลายที่ดีที่สุดประกอบด้วยบัฟเฟอร์ซิเตรต (pH3.00): เมทานอล: กรดฟอร์มิ (96: 4: 5 V / v / v) ได้รับเลือกในการสั่งซื้อที่จะได้รับการแยกที่ดีของทุกสารประกอบ inverstigated แผ่นได้รับการพัฒนาโดยใช้เทคนิคจากน้อยไปมากในห้องโครมาปกติ (Camag) อิ่มตัว 15 นาทีกับไอระเหยของเฟสเคลื่อนที่เพื่อการพัฒนาระยะ 7.0 ซม., ที่อุณหภูมิห้อง (≈20⁰) หลังจากชะโครมา, จานแห้งที่อุณหภูมิห้องและเตรียมพร้อมสำหรับขั้นตอนการสร้างภาพจุด การตรวจสอบสารเคมีทั่วไปที่แตกต่างกันรวมทั้ง 0-phtalaldehide, fluorescamine และ Ninhydrin ถูกทดสอบ acses การดำเนินการของปฏิกิริยา DPPH ในการเพิ่มประสิทธิภาพการพัฒนาวิธีการที่จำเป็นโตกราฟีของพารามิเตอร์หลายคน (เช่นเวลา / อุณหภูมิที่จำเป็นในการแห้งแผ่นโครมาและความเข้มข้นของการแก้ปัญหา DPPH) เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ถูกต้องและแม่นยำ นอกจากนี้ตามที่ได้ผลดีที่สุดแผ่นแห้งในเตาอบเป็นเวลา 1 ชั่วโมง 65 ⁰Cเย็นที่อุณหภูมิห้องและพ่นด้วย preparaed สด 0.02% วิธีการแก้ปัญหา DPPH ในเอทานอล เอมีการตรวจสอบถูกตรวจพบในแสงที่มองเห็นเป็นจุดสว่างสีขาวกับพื้นหลังสีม่วง
การแปล กรุณารอสักครู่..
