Bacterial isolates
were observed under a phase-contrast microscope to characterize
their morphology, their motility, and the presence or absence of endospores.
They were further identified by combining Gram staining and
16S rRNA gene sequencing. Fragments of the 16S rRNA gene from bacterial
colonies were PCR amplified with the bacterial primer set 27F and
1385R (amplification of 1.5-kb fragments) (43) or BK1F et BK1R, specific
to the genus Bacillus (amplification of 1.1-kb fragments) (54) (see Table
S1 in the supplemental material), using Taq DNA polymerase with ThermoPol
buffer (New England BioLabs, Ozyme, Saint-Quentin-en-
Yvelines, France). PCRs, performed in a Mastercycler thermal cycler (Eppendorf,
Le Pecq, France), included 28 cycles, each consisting of annealing
for 1 min at 51°C, elongation for 2 min at 72°C, and denaturation for 1
min at 95°C. PCR products were sequenced by Eurofins MWG Operon
(Ebersberg, Germany). The sequences were matched against nucleotide
sequences from GenBank using BLASTN (5).
แบคทีเรีย
ถูกตั้งข้อสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์เฟสตรงกันข้ามกับลักษณะ
ทางสัณฐานวิทยาของพวกเขา, การเคลื่อนที่ของพวกเขาและการมีหรือไม่มีสปอร์ได้.
พวกเขาถูกระบุต่อไปโดยการรวมการย้อมสีแกรมและ
16S rRNA ลำดับยีน ชิ้นส่วนของ 16S rRNA ยีนจากแบคทีเรีย
อาณานิคมถูกขยาย PCR ด้วยไพรเมอร์ของแบคทีเรียตั้ง 27F และ
1385R (การขยายของชิ้นส่วน 1.5 กิโล) (43) หรือ BK1F และ BK1R เฉพาะ
เพื่อ Bacillus ประเภท (การขยายของชิ้นส่วน 1.1 กิโล) ( 54) (ดูตารางที่
S1 ในวัสดุเสริม) โดยใช้โพลิเมอร์ Taq DNA กับ Thermopol
บัฟเฟอร์ (นิวอิงแลนด์ BioLabs, Ozyme, Saint-Quentin-en-
Yvelines, ฝรั่งเศส) PCRs, ดำเนินการใน Cycler ความร้อน Mastercycler (Eppendorf,
Le Pecq, ฝรั่งเศส) รวม 28 รอบแต่ละประกอบด้วยหลอม
เป็นเวลา 1 นาทีที่ 51 ° C, การยืดตัวเป็นเวลา 2 นาทีที่ 72 ° C และสูญเสียสภาพธรรมชาติเป็นเวลา 1
นาทีที่ 95 องศา C. ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มีลำดับขั้นตอนโดย Eurofins MWG Operon
(Ebersberg, เยอรมนี) ลำดับที่ถูกจับคู่กับนิวคลีโอ
ลำดับจาก GenBank โดยใช้ไทด์ (5)
การแปล กรุณารอสักครู่..