Determining a grazing animal's susc

Determining a grazing animal's susceptibility to ergot alkaloids has been a research topic for decades. Our objective was to determine if the Promega™ P450-Glo assay could be used to indirectly detect ergot alkaloids or their metabolites in urine of steers. The first experiment validated the effects of ergot alkaloids [0, 20, and 40 μM of ergotamine (ET), dihydroergotamine (DHET), and ergonovine (EN)] on human CYP3A4 using the P450-Glo assay (Promega™ V9800). With this assay, luminescence is directly proportional to CYP450 activity. Relative inhibition of in vitro cytochrome P450 activity was affected (P < 0.001) by an interaction between alkaloids and concentration. That interaction resulted in no concentration effect of EN, but within ET and DHET 20 and 40 μM concentrations inhibited CYP450 activity when compared with controls. In experiment 2, urine was collected from Angus-sired crossbred steers (n = 39; 216 ± 2.6 days of age; 203 ± 1.7 kg) after grazing tall fescue pastures for 105 days. Non-diluted urine was added to the Promega™ P450-Glo assay, and observed inhibition (3.7 % ± 2.7 of control). Urine content of total ergot alkaloids (331.1 ng/mg of creatinine ± 325.7) was determined using enzyme linked immunosorbent assay. Urine inhibition of CYP450 activity and total alkaloids were correlated (r = -0.31; P < 0.05). Steers were genotyped at CYP450 single nucleotide polymorphism, C994G. Steer genotype affected (P < 0.03) inhibition of CYP450 activity by urine; heterozygous steers had the least amount of CYP450 inhibition suggesting that genotyping cattle may be a method of identifying animals that are susceptible to ergot alkaloids. Although, additional research is needed, we demonstrate that the Promega™ P450-Glo assay is sensitive to ergot alkaloids and urine from steers grazing tall fescue. With some refinement the P450-Glo assay has potential as a tool for screening cattle for their exposure to fescue toxins.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดง่ายของสัตว์ grazing ergot alkaloids ได้หัวข้อวิจัยสำหรับทศวรรษที่ผ่านมา วัตถุประสงค์ของเราคือการ กำหนดว่าถ้าสามารถใช้วิเคราะห์ Promega ™ P450 ว่าอ้อมตรวจ ergot alkaloids หรือของ metabolites ในปัสสาวะของสำเร็จ ครั้งแรกทดลองตรวจสอบผลกระทบของ ergot alkaloids [0, 20 และ 40 μM ergotamine (ET), dihydroergotamine (DHET), และ ergonovine (EN)] ในมนุษย์ CYP3A4 ใช้ทดสอบว่า P450 (Promega ™ V9800) ด้วยการทดสอบนี้ luminescence เป็นสัดส่วนโดยตรงกับกิจกรรม CYP450 มีผลยับยั้งสัมพัทธ์ใน cytochrome P450 กิจกรรม (P < 0.001) โดยการโต้ตอบระหว่าง alkaloids และความเข้มข้น โต้ตอบที่ส่งผลให้ไม่มีผลต่อความเข้มข้นของน้ำ แต่ ET และ DHET 20 และ 40 μM ความเข้มข้นห้ามกิจกรรม CYP450 เมื่อเปรียบเทียบกับตัวควบคุม ในการทดลองที่ 2 ปัสสาวะรวบรวมจาก Angus sired สำเร็จผลิต (n = 39; 216 ± 2.6 วันอายุ 203 ± 1.7 kg) หลัง grazing pastures า 105 วัน ไม่ทำให้ปัสสาวะเพิ่มทดสอบ Promega ™ P450-ว่า และสังเกตการยับยั้ง (3.7% ± 2.7 ควบคุม) เนื้อหาปัสสาวะรวม ergot alkaloids (331.1 ng/มิลลิกรัม ของ creatinine ± 325.7) ถูกกำหนดโดยใช้เอนไซม์เชื่อมโยง immunosorbent assay ปัสสาวะยับยั้ง CYP450 กิจกรรมและรวม alkaloids ถูก correlated (r =-0.31 P < 0.05) สำเร็จได้ genotyped ที่ CYP450 เดียวนิวคลีโอไทด์โพลีมอร์ฟิซึม C994G คัดท้ายลักษณะทางพันธุกรรมได้รับผลกระทบ (P < 0.03) ยับยั้ง CYP450 กิจกรรมโดยปัสสาวะ สำเร็จ heterozygous มีน้อยแนะนำว่า วัว genotyping อาจวิธีการระบุสัตว์ที่ไวต่อการ ergot alkaloids ยับยั้ง CYP450 ถึงแม้ว่า วิจัยเพิ่มเติมเป็นสิ่งจำเป็น เราแสดงให้เห็นว่าวิเคราะห์ Promega ™ P450 ว่าสำคัญ ergot alkaloids และปัสสาวะจากสำเร็จ grazing า รีไฟน์เมนท์บางทดสอบ P450 ว่ามีศักยภาพเป็นเครื่องมือคัดกรองวัวสำหรับการสัมผัสกับสารพิษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การกำหนดความไวต่อสัตว์แทะเล็มเพื่อ ergot ลคาลอยด์ที่ได้รับหัวข้องานวิจัยมานานหลายทศวรรษ วัตถุประสงค์ของเราคือการตรวจสอบว่าการทดสอบ Promega ™ P450-Glo สามารถใช้ในการตรวจสอบทางอ้อม ergot ลคาลอยด์หรือสารของพวกเขาในปัสสาวะของโค การทดสอบครั้งแรกผ่านการตรวจสอบผลกระทบของลคาลอยด์ ergot [0, 20, และ 40 ไมครอนของ ergotamine (ET) dihydroergotamine (DHET) และ ergonovine (EN)] ใน CYP3A4 มนุษย์โดยใช้การทดสอบ P450-Glo (Promega ™ V9800) ด้วยการทดสอบนี้เรืองแสงเป็นสัดส่วนโดยตรงกับกิจกรรม CYP450 ญาติของการยับยั้งในหลอดทดลองกิจกรรม cytochrome P450 ได้รับผลกระทบ (P <0.001) โดยการทำงานร่วมกันระหว่างคาลอยด์และความเข้มข้น การทำงานร่วมกันที่ส่งผลให้ไม่มีผลความเข้มข้นของ EN แต่ภายใน ET และ DHET 20 และ 40 ไมครอนมีความเข้มข้นยับยั้งกิจกรรม CYP450 เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุม ในการทดลองที่ 2, ปัสสาวะที่ถูกเก็บรวบรวมจากแองกัส-พันธุ์โคลูกผสม (n = 39; 216 ± 2.6 วันบริบูรณ์ 203 ± 1.7 กิโลกรัม) หลังจากที่ทุ่งหญ้าทุ่งเลี้ยงสัตว์จำพวกสูงสำหรับ 105 วัน ปัสสาวะไม่เจือจางถูกเพิ่มเข้าไปในการทดสอบ Promega ™ P450-Glo และสังเกตการยับยั้ง (3.7% ± 2.7 จากการควบคุม) เนื้อหาของปัสสาวะลคาลอยด์ ergot รวม (331.1 ng / mg ของ creatinine ± 325.7) ถูกกำหนดโดยใช้เอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน ยับยั้งปัสสาวะของกิจกรรม CYP450 และลคาลอยด์รวมมีความสัมพันธ์ (r = -0.31; P <0.05) เรือลำนี้ถูก genotyped CYP450 ที่แตกต่างเบื่อหน่ายเดียว C994G คัดท้ายจีโนไทป์ได้รับผลกระทบ (P <0.03) การยับยั้งของกิจกรรม CYP450 โดยปัสสาวะ; นำพา heterozygous มีจำนวนน้อยที่สุดของการยับยั้ง CYP450 บอกว่าวัว genotyping อาจจะเป็นวิธีการในการระบุสัตว์ที่มีความอ่อนไหวต่อ ergot ลคาลอยด์ แม้ว่าการวิจัยเพิ่มเติมเป็นสิ่งจำเป็นที่เราแสดงให้เห็นว่า Promega ™ P450-Glo ทดสอบความไวต่อ ergot ลคาลอยด์และปัสสาวะจากโคแทะเล็มจำพวกสูง ด้วยการปรับแต่งบางการทดสอบ P450-Glo มีศักยภาพที่เป็นเครื่องมือในการตรวจคัดกรองวัวของพวกเขาสำหรับการเปิดรับสารพิษจำพวก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หาสัตว์กินหญ้าก็เกิดด้านอัลคาลอยด์ มีหัวข้อวิจัยมาหลายสิบปี วัตถุประสงค์ของเราคือเพื่อตรวจสอบว่า promega ™พี Glo assay สามารถใช้ตรวจหาสารอัลคาลอยด์หรือทางอ้อมในด้านของพวกเขาในปัสสาวะของโค . 2 ) ผลด้านอัลคาลอยด์ [ 0 , 20 และ 40 μ M โกทามีน ( ร้อยเอ็ด ) , dihydroergotamine ( dhet )และ ergonovine ( en ) ] ในการสร้างมนุษย์ใช้พี Glo assay ( promega ™ v9800 ) ด้วยวิธีนี้ การมีสัดส่วนโดยตรงกับกิจกรรม 000 คน . ญาติยับยั้งไซโตโครมพีมีผลต่อกิจกรรมในหลอดทดลอง ( P < 0.001 ) โดยปฏิสัมพันธ์ระหว่าง อัลคาลอยด์ และความเข้มข้นของ ที่ปฏิสัมพันธ์ทำให้ไม่มีสมาธิผลภาษาอังกฤษแต่ใน ET และ dhet 20 และ 40 , 000 คนμ M ยับยั้งกิจกรรมเมื่อเทียบกับการควบคุม ในการทดลองที่ 2 โดยเก็บตัวอย่างปัสสาวะจากโคขุนลูกผสมแองกัสเคารพ ( n = 39 ; 216 ± 2.6 วัน ของอายุ แต่± 1.7 กิโลกรัม ) หลังจากแทะเล็มหญ้าสูงจำพวกเป็นเวลา 105 วัน ไม่เจือจางปัสสาวะถูกเพิ่มไปยัง promega ™พี Glo assay และสังเกตการ ( ร้อยละ 3.7 ± 2.7 การควบคุม )ฉี่ของแอลคาลอยด์ในด้านรวม ( 331.1 ng / มก. ของครี± 325.7 ) ถูกกำหนดโดยใช้เอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay . ปัสสาวะยับยั้งกิจกรรม 000 คนทั้งหมด และอัลคาลอยด์ มีความสัมพันธ์ ( r = -0.31 ; P < 0.05 ) มี genotyped 000 คนเดียวที่เป็นเบสจึง c994g คัดท้ายกับผลกระทบ ( p < 0.02 ) การยับยั้ง 000 คนกิจกรรมโดยปัสสาวะ ;ก่อนดำเนินการมีจำนวนน้อยที่สุดของการส่งเสริมปศุสัตว์ 000 คนแนะนำว่าอาจเป็นวิธีการระบุสัตว์ที่ไวต่อด้านโรงไฟฟ้านิวเคลียร์ . แม้ว่าการวิจัยเพิ่มเติมเป็นสิ่งจำเป็น เราแสดงให้เห็นว่า promega ™พีฯ ( มีความไวต่อสารอัลคาลอยด์ และปัสสาวะจากโคแทะเล็มในด้านสูงจำพวก .กับบางโสรัจจะที่พีฯ ) มีศักยภาพเป็นเครื่องมือในการคัดกรองโคสำหรับการเปิดรับ
จำพวกสารพิษ