To engineer the pathway toward
-ca

To engineer the pathway toward
-carotene formation, it is
necessary to complement four plant enzymes, namely phytoene
synthase, phytoene desaturase, -carotene desaturase
(the desaturases catalyzing the introduction of two double
bonds, each), and lycopene
-cyclase. Alternatively, the transformation
effort can be simplified by reducing the number of
enzymes required and using a bacterial carotene desaturases
capable of introducing all four double bonds required (Fig. 1).
Initially, we sought to introduce all genes into immature
rice embryos (TP 309) stepwise, i.e., singly by particle bombardment,
aiming at subsequently unifying all transgenes into
a single plant by subsequent crossing. However, this approach
was not successful, mainly due to the deleterious integration
pattern frequently produced by this transformation technique,
as revealed by Southern hybridization analysis. Therefore,
Agrobacterium-mediated transformation of precultured rice immature
embryos was used, designed so as to install the entire

-carotene biosynthetic pathway into rice endosperm in a
single transformation effort. Three vectors, schematically depicted
in Figure 2, were constructed. pB19hpc combines the
sequences for a plant phytoene synthase (psy) originating from
daffodil (Narcissus pseudonarcissus; accession no. X78814) (4)
with the sequence coding for a bacterial phytoene desaturase
(crtI) originating from Erwinia uredovora (accession no.
D90087), the two being placed under the control of the
endosperm-specific glutelin (Gt1) and the constitutive CaMV
35S promoter, respectively. The phytoene synthase cDNA
contained a 5
-sequence coding for a functional transit peptide,
as was demonstrated previously (5), while the crtI gene
was fused to the transit peptide sequence of the pea Rubisco
small subunit (tp), as constructed by Misawa et al. (6). This
plasmid, thus, should direct the formation of lycopene in the
endosperm plastids, the site of GGPP formation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เมื่อต้องวิศวกรทางเดินต่อ - แคโรทีนผู้แต่งจำเป็นต้องเติมเต็มเอนไซม์พืช 4, phytoene ได้แก่synthase, phytoene desaturase, -desaturase แคโรทีน(desaturases catalyzing แนะนำสองคู่ขายหุ้นกู้ แต่ละ), และ lycopene-cyclase หรือ การแปลงนี่สามารถทำได้ง่ายขึ้น โดยลดจำนวนเอนไซม์ที่จำเป็นและใช้ desaturases นสูงแบคทีเรียความสามารถในการแนะนำทั้งหมดสี่คู่พันธบัตรต้อง (Fig. 1)เริ่มแรก เราขอแนะนำยีนทั้งหมดเป็น immatureข้าวโคลน (TP 309) stepwise เช่น รายบุคคล โดยการระดมยิงอนุภาคมุ่งที่สามัคคี transgenes ทั้งหมดลงในเวลาต่อมาโรงงานเดียว โดยข้ามตามมา อย่างไรก็ตาม วิธีการนี้ไม่ประสบความสำเร็จ ส่วนใหญ่เนื่องจากรวมสุดรูปแบบที่มักผลิต โดยเทคนิคนี้แปลงเปิดเผย โดยวิเคราะห์ hybridization ภาคใต้ ดังนั้นอโกรแบคทีเรียม mediated แปลงข้าว immature preculturedโคลนถูกใช้ การออกแบบเพื่อติดตั้งทั้งหมด-ทางเดิน biosynthetic นสูงเป็นเอนโดสเปิร์มข้าวในตัวพยายามแปลงเดียวกัน เวกเตอร์สาม schematically แสดงในรูปที่ 2 ถูกสร้างขึ้น pB19hpc รวมการลำดับสำหรับเป็นพืช phytoene synthase (ม.จว.) เกิดจากdaffodil (pseudonarcissus นาร์ซีซัส ทะเบียนไม่ X 78814) (4)มีรหัสลำดับสำหรับ desaturase phytoene แบคทีเรีย(crtI) เกิดจาก Erwinia uredovora (ทะเบียนไม่D90087) ทั้งสองที่กำลังอยู่ภายใต้การควบคุม การเอนโดสเปิร์มเฉพาะ glutelin (Gt1) และ CaMV ขึ้นโปรโมเตอร์ 35S ตามลำดับ การ phytoene synthase cDNAอยู่ลำดับ 5 - รหัสสำหรับการส่งต่องานเปปดังที่แสดงไว้ก่อนหน้านี้ (5), ในขณะที่ยีน crtIมี fused ลำดับเพปไทด์ส่งต่อของกฟภ Rubiscoเล็กย่อย (tp), เป็นสร้างโดยมิซาว่า et al. (6) นี้plasmid ดังนั้น ควรตรงการก่อตัวของ lycopene ในการเอนโดสเปิร์ม plastids เว็บไซต์ของผู้แต่ง GGPP

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิศวกรทางเดินไปยัง?
ก่อแคโรทีนมันเป็นเรื่องจำเป็นที่จะต้องเติมเต็มสี่เอนไซม์พืชคือphytoene
synthase, phytoene desaturase, แคโรทีน desaturase
(คน desaturases
เร่งการแนะนำของสองคู่พันธบัตรแต่ละ) และไลโคปีน? -cyclase อีกวิธีหนึ่งคือการเปลี่ยนแปลงความพยายามได้ง่ายโดยการลดจำนวนของเอนไซม์ที่จำเป็นและใช้แคโรทีนแบคทีเรียdesaturases ความสามารถในการแนะนำพันธะคู่ทั้งสี่ที่ต้องการ (รูปที่ 1).. ตอนแรกเราพยายามที่จะแนะนำยีนทั้งหมดลงอ่อนตัวอ่อนข้าว (TP 309 ) ขั้นตอนคือการโจมตีโดยลำพังโดยอนุภาคเป้าหมายในภายหลังรวม transgenes ทั้งหมดลงในโรงงานเดียวที่ตามมาจากการผสมข้ามพันธุ์ แต่วิธีนี้ไม่ประสบความสำเร็จส่วนใหญ่เนื่องจากการรวมอันตรายรูปแบบการผลิตที่พบบ่อยโดยใช้เทคนิคการเปลี่ยนแปลงนี้เปิดเผยโดยการวิเคราะห์การผสมพันธุ์ภาคใต้ ดังนั้นเชื้อ Agrobacterium ของที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะ precultured ข้าวตัวอ่อนได้ถูกใช้ในการออกแบบเพื่อที่จะติดตั้งทั้งหมด? แคโรทีนเดินเข้ามาในชีวสังเคราะห์ endosperm ข้าวในความพยายามเปลี่ยนแปลงเดียว สามเวกเตอร์ภาพแผนผังในรูปที่ 2 ที่ถูกสร้างขึ้น pB19hpc รวมลำดับสำหรับเทสphytoene พืช (psy) เกิดจากDaffodil (Narcissus pseudonarcissus. ภาคยานุวัติไม่มี X78814) (4) ที่มีลำดับการเข้ารหัสสำหรับแบคทีเรีย phytoene desaturase (crtI) เกิดจาก Erwinia uredovora (. ภาคยานุวัติไม่มีD90087) ทั้งสองถูกวางไว้ภายใต้การควบคุมของglutelin endosperm เฉพาะ (Gt1) และส่วนประกอบ CaMV ก่อการ 35S ตามลำดับ cDNA เทส phytoene มี 5? -sequence การเข้ารหัสสำหรับเปปไทด์การขนส่งการทำงานตามที่ได้แสดงให้เห็นก่อนหน้านี้(5) ขณะที่ยีน crtI ถูกหลอมลำดับเปปไทด์การขนส่งของถั่ว Rubisco หน่วยย่อยขนาดเล็ก (TP) เช่นสร้างโดยมิซาวะ et al, (6) นี้พลาสมิดจึงควรชี้นำการก่อตัวของไลโคปีนในendosperm plastids เว็บไซต์ของ GGPP การก่อตัว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิศวกร
ทางเดินสู่การแคโรทีนเป็น
จำเป็นกว่าสี่เอนไซม์พืช ได้แก่ ไฟโทอีน
เทสไฟโทอีนแคโรทีน , นำไป , นำไป
( desaturases และแนะนำสอง
พันธบัตรแต่ละ ) , และไลโคปีน
- ไซเคลส . อีกวิธีหนึ่งคือ การเปลี่ยนแปลง
ความพยายามสามารถประยุกต์โดยการลดจำนวนของ
เอนไซม์ที่จำเป็นและการใช้แบคทีเรียแคโรทีน desaturases
สามารถแนะนำทั้งหมดสี่คู่พันธบัตรที่ต้องการ ( รูปที่ 1 ) .
ตอนแรกเราขอแนะนำทั้งหมดยีนเข้าไปในเอ็มบริโอข้าวอ่อน
( TP = 309 ) คือ โจมตีเดี่ยว โดยอนุภาค
หมายใจที่ต่อมารวมกันทั้งหมดใน transgenes
โรงงานเดียวโดยข้ามตามมา . อย่างไรก็ตาม วิธีการนี้
ไม่ประสบความสำเร็จส่วนใหญ่เนื่องจากการผสมผสานรูปแบบการผลิตคง
บ่อยด้วยเทคนิคการแปลงนี้
เป็นเปิดเผยโดยการวิเคราะห์องศาใต้ ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงของอะโกรแบคทีเรียม (

ข้าวอ่อน ตัวอ่อน 1949 ที่ใช้ถูกออกแบบมาเพื่อติดตั้งทั้งหมด

- แคโรทีน ร่วมเส้นทางในเอนโดสเปิร์มข้าวใน
ความพยายามแปลงเดียว สามเวกเตอร์แผนผังแสดง
รูปที่ 2 ได้ถูกสร้างขึ้น pb19hpc รวม
ลำดับสำหรับพืชไพโตนซินเตส ( PSY ) ที่มาจาก
แดฟโฟดิล ( นาร์ซิสซัส pseudonarcissus ; การไม่ x78814 ) ( 4 )
กับลำดับการเข้ารหัสสำหรับแบคทีเรียที่มีไฟโทอีน
( crti ) ที่เกิดจากเชื้อ Erwinia uredovora ( หนังสือไม่
d90087 ) สองถูกวางภายใต้การควบคุมของ
กลูเทลินเฉพาะเอนโดสเปิร์ม ( GT1 ) และ constitutive CAMV
35s โปรโมเตอร์ ตามลำดับ ส่วนไพโตนซินเตสยีน
บรรจุ 5
- ลำดับรหัสสำหรับเปปไทด์ส่งต่อหน้าที่
เป็นพบก่อนหน้านี้ ( 5 ) ในขณะที่ crti ยีน
ถูกหลอมรวมเพื่อการขนส่งเปปไทด์ลำดับของถั่ว rubisco
เล็ก subunit ( TP ) ที่สร้างขึ้นโดยมิ et al . ( 6 )
พลาสมิดนี้ ดังนั้นควรตรงการก่อตัวของไลโคปีนใน
endosperm พลาสติด , เว็บไซต์ของการ ggpp .