Quantification of ochratoxin A (OTA

Quantification of ochratoxin A (OTA)-producing molds in foods by real-time quantitative PCR (qPCR) may be affected by the DNA extraction method used. In the present work, 6 different methods for extraction of DNA from ochratoxigenic molds in foods were tested. Several combinations of mechanical and thermal lysis of conidia with commercialized DNA extraction kits and enzymatic treatments or resins were evaluated. DNA recovery and quality of extracted DNA was measured by testing the extracted DNA with a conventional PCR and an SYBR Green qPCR amplifying the β-tubulin gene and the non-ribosomal peptide synthetase gene, otanpsPN. Inhibition of conventional and qPCR was not observed when the DNA-extraction method includes an initial thermal disruption of conidia before use of commercialized extraction kit or resin, enzymatic treatment and/or lysis buffer. Of the six methods tested, the one combining thermal lysis of conidia followed by a short enzymatic treatment and incubation with Chelex-100 resin and final extraction with the EZNA kit was selected, since the extracted DNA showed good amplification by conventional PCR for β-tubulin gene and the highest DNA recoveries when tested by qPCR. The method was subsequently validated in different food products such as ripened foods, nuts, and grapes inoculated with Penicillium and Aspergillus species. With this Chelex100-enzymatic-EZNA method good DNA recoveries ranging from 69 to 99% were obtained for all food matrices and fungal species tested. This fast method is a promising tool to be used as routine analysis in HACCP systems in the food industry for quantifying OTA-producing molds by qPCR.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นับของแม่พิมพ์การผลิต A OTA คคราในอาหารโดย PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ (qPCR) อาจได้รับผลกระทบ ด้วยวิธีการสกัดดีเอ็นเอที่ใช้ ในงานนำเสนอ มีทดสอบ 6 แตกต่างกันวิธีการสกัดดีเอ็นเอจากแม่พิมพ์ ochratoxigenic ในอาหาร มีประเมินหลายชุดของเครื่องจักรกล และความร้อน lysis ของ conidia commercialized ชุดสกัดดีเอ็นเอ และเอนไซม์ในระบบบำบัด หรือเรซิ่น กู้คืนดีเอ็นเอและคุณภาพของดีเอ็นเอแยกถูกวัด โดยการทดสอบดีเอ็นเอแยก PCR แบบเดิมกับการ qPCR SYBR Green มือยีนβ-tubulin และเพปไทด์ไม่ ribosomal synthetase ยีน otanpsPN ยับยั้งการธรรมดาและ qPCR ถูกไม่สังเกตเมื่อวิธีการสกัดดีเอ็นเอรวม conidia ก่อนใช้ชุดสกัด commercialized หรือเรซิน เอนไซม์ในระบบบำบัด และ/หรือบัฟเฟอร์ lysis ทรัพยความร้อนเป็นต้น 6 วิธีทดสอบ หนึ่งรวม lysis ของ conidia ตามรักษาเอนไซม์ในระบบสั้นและบ่ม Chelex 100 ความร้อน เรซินและการสกัดขั้นสุดท้ายกับชุด EZNA ถูกเลือก เนื่องจากดีเอ็นเอแยกพบขยายดี โดย PCR ธรรมดาสำหรับยีนβ-tubulin และ recoveries ของดีเอ็นเอสูงสุดเมื่อทดสอบ โดย qPCR วิธีการได้มาตรวจสอบในผลิตภัณฑ์อาหารต่าง ๆ เช่นอาหารสุก ถั่ว และองุ่น inoculated Penicillium และ Aspergillus พันธุ์ Chelex100-เอนไซม์ในระบบ EZNA วิธีนี้ดีเอ็นเอ recoveries ตั้งแต่ 69 99% ได้รับอาหารทั้งหมด เมทริกซ์และเชื้อราสายพันธุ์ทดสอบ วิธีนี้รวดเร็วเป็นเครื่องมือว่าจะใช้เป็นวิเคราะห์เป็นประจำในระบบ HACCP ในอุตสาหกรรมอาหารสำหรับแม่พิมพ์ผลิต OTA quantifying qPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณ ochratoxin (OTA) -producing แม่พิมพ์ในอาหารโดย real-time PCR เชิงปริมาณ (qPCR) อาจได้รับผลกระทบโดยวิธีการสกัดดีเอ็นเอที่ใช้ ในการทำงานปัจจุบันที่ 6 วิธีการที่แตกต่างกันสำหรับการสกัดดีเอ็นเอจากแม่พิมพ์ ochratoxigenic ในอาหารถูกนำมาทดสอบ การรวมกันหลายสลายทางกลและความร้อนของสปอร์ที่มีเชิงพาณิชย์ชุดสกัดดีเอ็นเอและการรักษาเอนไซม์หรือเรซินได้รับการประเมิน การกู้คืนดีเอ็นเอและคุณภาพของดีเอ็นเอที่สกัดได้เมื่อวัดโดยการทดสอบดีเอ็นเอสกัดด้วยวิธี PCR ธรรมดาและสีเขียว SYBR qPCR ขยายยีนβ-tubulin และยีน synthetase เปปไทด์ที่ไม่โซมอล, otanpsPN ยับยั้งการชุมนุมและ qPCR ก็ไม่ได้สังเกตเมื่อวิธีการสกัดดีเอ็นเอรวมถึงการหยุดชะงักความร้อนเริ่มต้นของสปอร์ก่อนการใช้งานของชุดสกัดเชิงพาณิชย์หรือเรซิน, เอนไซม์และ / หรือบัฟเฟอร์สลาย หกวิธีการทดสอบหนึ่งรวมสลายความร้อนของสปอร์ตามด้วยการย่อยด้วยเอนไซม์สั้นและบ่มด้วยเรซิน Chelex-100 และการสกัดสุดท้ายกับชุด EZNA ได้รับเลือกเนื่องจากดีเอ็นเอที่สกัดได้แสดงให้เห็นว่าการขยายที่ดีโดยวิธี PCR ธรรมดาสำหรับβ-tubulin ของยีนและดีเอ็นเอกลับคืนสูงสุดเมื่อทดสอบโดย qPCR วิธีการได้รับการตรวจสอบต่อมาในผลิตภัณฑ์อาหารที่แตกต่างกันเช่นอาหารสุก, ถั่ว, และองุ่นเชื้อด้วย Penicillium และพันธุ์ Aspergillus ด้วยวิธีนี้ Chelex100-เอนไซม์-EZNA วิธีกลับคืนดีเอ็นเอที่ดีตั้งแต่ 69-99% ที่ได้รับการฝึกอบรมสำหรับอาหารทุกชนิดและเชื้อราทดสอบ วิธีนี้รวดเร็วเป็นเครื่องมือที่มีแนวโน้มที่จะใช้เป็นประจำในการวิเคราะห์ระบบ HACCP ในอุตสาหกรรมอาหารสำหรับปริมาณแม่พิมพ์ OTA ผลิตโดย qPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปริมาณของคราท็อกซิน ( OTA ) - การผลิตแม่พิมพ์ในอาหารโดยวิธี PCR แบบเรียลไทม์ เชิงปริมาณ ( qpcr ) อาจจะได้รับผลกระทบโดยวิธีการสกัดดีเอ็นเอที่ใช้ ในงานปัจจุบัน 6 วิธีการที่แตกต่างกันสำหรับการสกัดดีเอ็นเอจาก ochratoxigenic เชื้อราในอาหารที่ผลิตได้ชุดหลายของการสลายความร้อนเชิงกลและเชิงพาณิชย์ของโคนิเดีย ด้วยชุดสกัดดีเอ็นเอและการรักษาเอนไซม์ หรือเม็ดถูกประเมิน การกู้คืน ดีเอ็นเอ และคุณภาพของการสกัดดีเอ็นเอวัดจากการทดสอบสกัดดีเอ็นเอด้วยวิธี PCR และ SYBR กรีนแบบ qpcr amplifying ยีนบีตา - ทิวบูลินกับไม่ไรโบโซมอลเปปไทด์เทสยีน otanpspn .การยับยั้งแบบปกติ และ qpcr ไม่ได้สังเกตเมื่อสกัดดีเอ็นเอวิธีรวมถึงการเริ่มต้นความร้อนการหยุดชะงักของโคนิก่อนใช้ชุดสกัดหรือ เรซิน สามารถรักษาเอนไซม์ และ / หรือการสลายบัฟเฟอร์ ของหกวิธีการทดสอบหนึ่งในการสลายความร้อนรวมของโคนิตามด้วยสั้น ๆและ chelex-100 บ่มเอนไซม์กับเรซินและการสกัดสุดท้ายกับ ezna ชุดได้รับเลือกเนื่องจากสกัดดีเอ็นเอด้วยวิธี PCR พบว่าปกติดี ( บีตา - ทิวบูลินยีนและดีเอ็นเอต่ำสุดสูงสุดเมื่อทดสอบโดย qpcr .วิธีต่อมาได้ตรวจสอบผลิตภัณฑ์อาหารต่าง ๆเช่น อาหารสุก ถั่ว และองุ่นที่ปลูกกับ Penicillium และ Aspergillus สายพันธุ์ กับ chelex100 เอนไซม์ดีเอ็นเอวิธีที่ดี ezna ต่ำสุดตั้งแต่ 69 ถึง 99% ส่วนเมทริกซ์อาหารทั้งหมด และเชื้อราชนิดทดสอบวิธีที่รวดเร็วนี้เป็นเครื่องมือที่มีแนวโน้มที่จะใช้เป็นขั้นตอนในการวิเคราะห์ระบบ HACCP ในอุตสาหกรรมอาหาร การผลิตแม่พิมพ์ โดยปริมาณ OTA qpcr .