Cells were plated in a 24-well plat

Cells were plated in a 24-well plate and stimulated as described above. Cell culture mediumwas collected 6 h after stimulation with milk samples and again after the additional 18 h where cells had been incubated with pure cell culture medium. Samples were diluted 1:1 in 2  TBS containing 0.1% Tween 20. Samples (100 mL) and standards (recombinant human ANGPTL4; 3485-AN, R&D Systems) prepared in TBS containing 5% milk (6 h samples) or 0.1%
BSA (24 h samples) was applied on anti-ANGPTL4 coated ELISA plates (1.6 mg mL1 polyclonal goat IgG in 0.1 M bicarbonate/carbonate buffer, AF3485, R&D Systems) for 2 h at RT. After washing the plate 4 times in PBS containing 0.1% Tween 20, the wells were incubated with a secondary biotinylated antibody to ANGPTL4 (0.8 mg mL1 polyclonal goat IgG; BAF3485; R&D Systems) for 2 h at RT. After another washing step, samples were incubated with
streptavidin-horseradish peroxidase (1:200, DY998, R&D Systems) followed by incubation with TMB solution. The reaction was stopped by adding 0.2 M H2SO4 and absorbance was measured at 450 nm on a microtitre plate spectrophotometer (Synergy 2, Bio- Tek). Each sample was measured three times, and the experiment was performed in duplicate and repeated three times.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์ถูกชุบจานดี 24 และถูกกระตุ้นที่อธิบายข้างต้น Mediumwas วัฒนธรรมเซลล์เก็บ 6 h หลังการกระตุ้นด้วยตัวอย่างนม และอีกครั้งหลัง จาก h 18 เพิ่มเติมที่เซลล์มีการ incubated กับสื่อวัฒนธรรมเซลล์บริสุทธิ์ ตัวอย่าง 1:1 ที่แตกออกใน 2 TBS ประกอบด้วย 0.1% Tween 20 ตัวอย่าง (100 มล.) และมาตรฐาน (ANGPTL4 recombinant มนุษย์ 3485-อัน R & D ระบบ) เตรียมใน TBS ประกอบด้วยนม 5% (ตัวอย่าง 6 h) หรือ 0.1%บีเอสเอ (ตัวอย่าง 24 ชม) ที่ใช้ต่อต้าน-ANGPTL4 เคลือบแผ่น ELISA (1.6 มิลลิกรัมต่อ 1 มิลลิลิตร polyclonal แพะ IgG ในบัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนต/คาร์บอเนต 0.1 M, AF3485, R & D ระบบ) สำหรับ h 2 ที่ RT. หลังจากล้างจาน 4 ครั้งใน PBS ประกอบด้วย 0.1% Tween 20 บ่อถูก incubated กับแอนติบอดีรอง biotinylated กับ ANGPTL4 (มก. 0.8 mL 1 polyclonal แพะ IgG BAF3485 R & D ระบบ) สำหรับ h 2 ที่ RT. หลังจากขั้นตอนการล้างอีก ตัวอย่างได้ incubated ด้วยstreptavidin horseradish peroxidase (1: 200, DY998, R & D ระบบ) ตาม ด้วยคณะทันตแพทยศาสตร์กับทหารไทยแก้ปัญหา หยุดปฏิกิริยา ด้วยการเพิ่ม 0.2 M กำมะถัน และมีวัด absorbance ที่ 450 nm ในการ microtitre จานเครื่องทดสอบกรดด่าง (Synergy 2 ไบโอ - Tek) แต่ละอย่างถูกวัดสามครั้ง และทดลองทำในซ้ำ และทำซ้ำ 3 ครั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ที่ถูกชุบในแผ่น 24 หลุมและกระตุ้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้น การเพาะเลี้ยงเซลล์ mediumwas เก็บ 6 ชั่วโมงหลังจากการกระตุ้นด้วยตัวอย่างนมและอีกครั้งหลังจากที่เพิ่มเติม 18 ชั่วโมงที่เซลล์ได้รับการบ่มที่มีขนาดกลางการเพาะเลี้ยงเซลล์บริสุทธิ์ ตัวอย่างถูกเจือจาง 1: 1 ใน 2 หรือไม่? TBS มี Tween 0.1% 20. ตัวอย่าง (100 มิลลิลิตร) และมาตรฐาน (ANGPTL4 recombinant มนุษย์; 3485-, R & D Systems) จัดทำขึ้น TBS ที่มีนม 5% (6 ตัวอย่างต่อชั่วโมง) หรือ 0.1%
BSA (24 ตัวอย่างต่อชั่วโมง) ได้ถูกนำมาใช้ใน ต่อต้าน ANGPTL4 เคลือบแผ่นวิธี ELISA (1.6 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 โพลี IgG แพะใน 0.1 M ไบคาร์บอเนต / บัฟเฟอร์คาร์บอเนต AF3485, R & D Systems) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ RT หลังจากล้างจาน 4 ครั้งในพีบีเอสที่มี 0.1% Tween 20 หลุมถูกบ่มกับแอนติบอดี biotinylated รอง ANGPTL4 (0.8 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 โพลี IgG แพะ? BAF3485; R & D Systems) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ RT หลังจากขั้นตอนการซักผ้าอีกตัวอย่างที่ถูกบ่มกับ
เปอร์ออกซิเด streptavidin-พืชชนิดหนึ่ง (1: 200, DY998, R & D ระบบ) ตามด้วยการบ่มเพาะกับการแก้ปัญหาทหารไทย ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่ม 0.2 M H2SO4 และการดูดกลืนแสงวัดที่ 450 นาโนเมตรบนสเปกแผ่น microtitre (Synergy 2 Bio- เต็ก) ตัวอย่างแต่ละวัดสามครั้งและการทดสอบได้รับการดำเนินการในที่ซ้ำกันและซ้ำสามครั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์มีการชุบใน 24 ดีจานและกระตุ้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้น mediumwas เซลล์เก็บ 6 ชั่วโมงหลังจากการกระตุ้นด้วยตัวอย่างนมและอีกครั้งหลังจากเพิ่มเติม 18 H ที่เซลล์ได้รับการแยกเชื้อบริสุทธิ์ เซลล์ปานกลาง ตัวอย่างที่เจือจาง 1 : 1 ใน 2  TBS ที่ประกอบด้วย 0.1% Tween 20 ตัวอย่าง ( 100 มล. ) และมาตรฐาน ( recombinant มนุษย์ 3485-an angptl4 ; ,r & D ระบบ ) ที่เตรียมไว้ใน TBS ที่มีถึง 5 % นม ( ตัวอย่าง 6 H ) หรือ 0.1 %
( 24 ชั่วโมง ( ตัวอย่าง ) คือใช้วิธี anti-angptl4 เคลือบแผ่น ( มก. 1.6 ml  1 ใช้แพะ IgG ใน 0.1 โมลาร์ ไบคาร์บอเนต / คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ af3485 R & D ระบบ ) 2 ชั่วโมง หลังจากที่ RT . ล้างจาน 4 ครั้งใน PBS ที่ประกอบด้วย 0.1% Tween 20 , บ่อถูกบ่มกับระดับโปรตีน ไล angptl4 ( 08 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร  1 ใช้แพะ IgG ; baf3485 ; R & D ระบบ ) 2 H ที่ RT . อีกซักก้าว ตัวอย่างที่บ่มด้วย
streptavidin horseradish peroxidase ( 1:200 dy998 , R & D ระบบ ) ตามด้วยธนาคารบ่มด้วยโซลูชั่น ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่ม 0.2M กรดซัลฟิวริกและค่าวัด 450 nm ใน microtitre Spectrophotometer ( 2 แผ่น ) ไบโอ - เทค )แต่ละตัวอย่างถูกวัด 3 ครั้ง และทดสอบในที่ซ้ำกันและซ้ำ
3 ครั้ง