2.1. Characterization of the PmXbp1

2.1. Characterization of the PmXbp1 cDNA sequence
2.1.1. Genomic DNA and total RNA extraction and first strand cDNA
synthesis
Genomic DNA was extracted from a piece of the pleopod of wild
P. monodon adults using a phenol-chloroform-proteinase K method
(Klinbunga et al., 2001). The concentration of extracted DNA was spectrophotometrically
estimated. DNA was stored at 4 °C until use.
Total RNA was extracted from ovaries of P. monodon using TRI
Reagent (Molecular Research Center). The concentration of extracted
total RNA was spectrophotometrically measured. One and a half micrograms
of DNase I-treated total RNA (0.5 U/μg at 37 °C for 30 min) was
reverse-transcribed using an Improm-II™Reverse Transcription System
(Promega).
2.1.2. Isolation of the full-length cDNA of PmXbp1
A homolog of Xbp1 was originally identified from the ovarian cDNA
library of P. monodon (Preechaphol et al., 2007). The full-length cDNA of
PmXbp1 was identified by further sequencing of the original EST clone
by a primer walking approach. The nucleotide sequence of PmXbp1
was searched against previously deposited sequences in GenBank
using BlastN and BlastX (Altschul et al., 1990; available at http://ncbi.
nlm.nih.gov). The pI value and molecular weight of the deduced
PmXbp1 protein were examined using ProtParam (http://www.expasy.
org/tools/protparam.html). The functional domain in the deduced
PmXbp1 protein was predicted using SMART (http://smart.emblheidelberg.
de).
2.1.3. Single-strand conformational polymorphism (SSCP) analysis of the
PmXbp1 gene segment
The PmXbp1185 gene segment (F: 5′-TGATGAACTTCGGGACCTAA-3′
and R: 5′-CCTCAACGACAACTGCTGCG-3′ positions c.528–c.712 of the
full-length cDNA of PmXbp1) was amplified, cloned and sequenced.
SSCP was carried out against genomic DNA of 3-month-old P. monodon
(SNP3A sample; average body weight and total length = 12.32 ±
5.13 g and 11.30 ± 1.58 cm, N = 162). The thermal profiles were 94 °C
for 3 min followed by predenaturation at 94 °C for 45 s, annealing at
55 °C for 1 min and extension at 72 °C for 1 min for 35 cycles. The final
extension was carried out at 72 °C for 7 min. The amplification product
was analyzed by SSCP (Orita et al., 1989) using PROTEAN II xi cells (Bio-
Rad). The PCR product (6 μL) wasmixed with four volumes of the loading
dye (95% formamide, 0.25% bromophenol blue, 0.25% xylene cyanol, and
10 mM NaOH), denatured in a boiling bath for 5 min, and immediately
cooled on ice for 3 min. The denatured products of PmXbp1185 were
electrophoretically analyzed (native 20% PAGE; 37.5:1 crosslink) at
250 V for 16 h at 4 °C. SSCP bands were visualized by silver staining.
2.1.4. Identification of SNP in the amplified PmXbp1185 gene segment by
PCR-cloning and sequencing
The PmXbp1185 gene segment of P. monodon juveniles representing
each SSCP pattern (N = 9 each) was electrophoretically analyzed and
eluted from the gel. The resulting product was cloned into pGEM-T
Easy vector and transformed to Escherichia coli JM109. Recombinant
clones were selected by a lacZ system following standard protocols
(Sambrook and Russell, 2001). The nucleotide sequence of each insert
was examined for both directions and searched against previously
deposited data in GenBank using BlastN (Altschul et al., 1990; available
at http://ncbi.nlm.nih.gov). Nucleotide sequences of PmXbp1 of examined
shrimp were multiple-aligned using ClustalW(Thompson et al., 1994).
2.2. Determination of the role of PmXbp1 in ovarian development
2.2.1. Experimental animals
For determination of the functional involvement of PmXbp1 in
ovarian development, cultured juveniles (4 months old, N = 6) of
P. monodon were collected from the Broodstock Management Center
(BMC), Burapha University (Chanthaburi, Thailand). Female broodstock
were wild-caught fromthe Andaman Sea (west of peninsular Thailand)
and acclimated under farm conditions for 2–3 days (N=40). The postspawning
groupwas immediately collected after shrimpwere spawned
(stage V, average GSI = 2.83 ± 0.57%; N = 6). Ovaries were dissected
out from each shrimp and weighed. For the eyestalk ablation group,
shrimp were acclimated for 7 days prior to unilateral eyestalk ablation.
Ovaries of eyestalk-ablated shrimp were collected at 2–7 days after

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1 การจำแนกลำดับ cDNA PmXbp12.1.1. genomic DNA และสกัดอาร์เอ็นเอรวม และสาระแรก cDNAการสังเคราะห์Genomic DNA ที่สกัดจากส่วนของ pleopod ของป่าใช้วิธีวางคลอโรฟอร์ม-proteinase K ผู้ใหญ่ P. monodon(Klinbunga et al., 2001) ความเข้มข้นของดีเอ็นเอที่แยกได้ spectrophotometricallyประมาณการ ดีเอ็นเอถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C จนกว่าจะใช้อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากรังไข่ของ P. monodon ใช้ตรีรีเอเจนต์ (ศูนย์วิจัยระดับโมเลกุล) สกัดเข้มข้นของspectrophotometrically ที่วัดอาร์เอ็นเอทั้งหมด Micrograms 1.30ของ DNase ฉันถือว่าอาร์เอ็นเอรวมได้ (0.5 U/μg ที่ 37 ° C สำหรับ 30 นาที)กลับทับศัพท์โดยใช้การ Improm II ™ย้อน Transcription ระบบ(Promega)2.1.2 การแยกของ cDNA ที่ปราศจากของ PmXbp1เดิมระบุ homolog ของ Xbp1 จาก cDNA รังไข่ไลบรารีของ P. monodon (Preechaphol et al., 2007) CDNA จัดของPmXbp1 ได้ระบุลำดับต่อไปของโคลน EST เดิมโดยพื้นที่เดินแนวทาง ลำดับนิวคลีโอไทด์ของ PmXbp1มีการค้นหากับลำดับก่อนหน้านี้นำฝากใน GenBankใช้ BlastN และ BlastX (Altschul และ al., 1990; http://ncbinlm.nih.gov ที่) ค่า pI และน้ำหนักโมเลกุลของที่ deducedโปรตีน PmXbp1 ถูกตรวจสอบโดยใช้ ProtParam (ส่วน http://www.expasyorg/tools/protparam.html) โดเมนที่ทำงานในที่ deducedPmXbp1 โปรตีนถูกคาดการณ์โดยใช้สมาร์ท (ส่วน http://smart.emblheidelbergเดอ)2.1.3. สาระเดียว conformational โพลีมอร์ฟิซึม (SSCP) วิเคราะห์การส่วนยีน PmXbp1เซ็กเมนต์ยีน PmXbp1185 (F: 5′-TGATGAACTTCGGGACCTAA-3′และ R: 5′-CCTCAACGACAACTGCTGCG-3′ ตำแหน่ง c.528–c.712 ของการcDNA ปราศจากของ PmXbp1) ขยาย โคลน และเรียงลำดับSSCP ถูกดำเนินการจาก genomic DNA ของอายุ 3 เดือน P. monodon(ตัวอย่าง SNP3A เฉลี่ยน้ำหนักและผลรวมของความยาว = 12.32 ±5.13 g และ 11.30 น.± 1.58 ซม. N = 162) ค่าความร้อนได้ 94 องศาเซลเซียสสำหรับ 3 นาทีตาม ด้วย predenaturation ที่ 94 ° C สำหรับ 45 s การอบเหนียวที่55 องศาเซลเซียส 1 นาทีและ 72 องศาเซลเซียสใน 1 นาทีสำหรับรอบ 35 สุดท้ายส่วนขยายถูกดำเนินที่ 72 ° C ใน 7 นาที ผลิตภัณฑ์ขยายถูกวิเคราะห์ โดย SSCP (Orita et al., 1989) โดยใช้เซลล์ PROTEAN II ซี (ไบโอ-Rad) Wasmixed (6 μL) ผลิตภัณฑ์ PCR กับวอลุ่มสี่ของโหลดสีย้อม (formamide 95%, 0.25% bromophenol blue, 0.25% ไซ cyanol และ10 มม. NaOH), denatured ในอาบน้ำเดือด 5 นาที และทันทีระบายความร้อนด้วยบนน้ำแข็งใน 3 นาที ผลิตภัณฑ์ denatured ของ PmXbp1185electrophoretically วิเคราะห์ (พื้นเมือง 20% เพ 37.5:1 crosslink) ที่250 V สำหรับ h 16 ที่ 4 องศาเซลเซียส วง SSCP มี visualized โดยย้อมสีเงิน2.1.4. รหัสของ SNP ในเซ็กเมนต์ยีน PmXbp1185 เอาต์โดยPCR โคลนและลำดับส่วนยีน PmXbp1185 ของ P. monodon juveniles แทนแต่ละรูปแบบ SSCP (N = 9 ละ) electrophoretically มีวิเคราะห์ และeluted from the gel. The resulting product was cloned into pGEM-TEasy vector and transformed to Escherichia coli JM109. Recombinantclones were selected by a lacZ system following standard protocols(Sambrook and Russell, 2001). The nucleotide sequence of each insertwas examined for both directions and searched against previouslydeposited data in GenBank using BlastN (Altschul et al., 1990; availableat http://ncbi.nlm.nih.gov). Nucleotide sequences of PmXbp1 of examinedshrimp were multiple-aligned using ClustalW(Thompson et al., 1994).2.2. Determination of the role of PmXbp1 in ovarian development2.2.1. Experimental animalsFor determination of the functional involvement of PmXbp1 inovarian development, cultured juveniles (4 months old, N = 6) ofP. monodon were collected from the Broodstock Management Center(BMC), Burapha University (Chanthaburi, Thailand). Female broodstockwere wild-caught fromthe Andaman Sea (west of peninsular Thailand)and acclimated under farm conditions for 2–3 days (N=40). The postspawninggroupwas immediately collected after shrimpwere spawned(stage V, average GSI = 2.83 ± 0.57%; N = 6). Ovaries were dissectedout from each shrimp and weighed. For the eyestalk ablation group,shrimp were acclimated for 7 days prior to unilateral eyestalk ablation.Ovaries of eyestalk-ablated shrimp were collected at 2–7 days after

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 ลักษณะของยีน PmXbp1 ลำดับ
2.1.1 ดีเอ็นเอจีโนมและการสกัด RNA
รวมและสาระแรกยีนสังเคราะห์จีโนมดีเอ็นเอที่สกัดจากชิ้นส่วนของ
pleopod
ของป่าพี ผู้ใหญ่กุลาดำโดยใช้ฟีนอลคลอโรฟอร์มโปร K วิธี
(Klinbunga et al., 2001) ความเข้มข้นของสกัดดีเอ็นเอที่ถูก spectrophotometrically
ประมาณ ดีเอ็นเอถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนการใช้งาน.
รวม RNA ถูกสกัดจากรังไข่ของกุ้งกุลาดำ TRI
ใช้สารเคมี(โมเลกุลศูนย์วิจัย) ความเข้มข้นของสกัด
RNA รวมวัด spectrophotometrically และครึ่งหนึ่งไมโครกรัมของ DNase ฉันได้รับการรักษารวมอาร์เอ็นเอ (0.5 U / ไมโครกรัมที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที) เป็นย้อนกลับ-คัดลอกใช้Improm-II ™ระบบการถอดเทปย้อนกลับ(Promega). 2.1.2 การแยกของยีนยาวเต็มรูปแบบของ PmXbp1 homolog ของ Xbp1 ถูกระบุว่ามีพื้นเพมาจากยีนรังไข่ห้องสมุดของกุ้งกุลาดำ(Preechaphol et al., 2007) ยีนยาวเต็มรูปแบบของPmXbp1 ถูกระบุโดยลำดับต่อไปของโคลน EST เดิมโดยวิธีการเดินไพรเมอร์ ลำดับเบสของ PmXbp1 ถูกค้นลำดับต่อไปฝากไว้ก่อนหน้านี้ใน GenBank ใช้กล่าวหาและ BlastX (Altschul, et al, 1990; สามารถดูได้ที่ http: //. NCBI. nlm.nih.gov) ค่า pI และน้ำหนักโมเลกุลของ deduced โปรตีน PmXbp1 มีการตรวจสอบโดยใช้ ProtParam (http:. //www.expasy org / เครื่องมือ / protparam.html) โดเมนการทำงานในอนุมานโปรตีน PmXbp1 เป็นที่คาดการณ์โดยใช้สมาร์ท (http:. //smart.emblheidelberg. DE) 2.1.3 เดี่ยวสาระ polymorphism โครงสร้าง (SSCP) การวิเคราะห์ของส่วนยีนPmXbp1 ส่วนยีน PmXbp1185 (F: 5'-TGATGAACTTCGGGACCTAA-3 'และR: 5'-CCTCAACGACAACTGCTGCG-3 ตำแหน่ง c.528-c.712 ของเต็มรูปแบบความยาวของยีน PmXbp1) ได้รับการขยายโคลนและหาลำดับ. SSCP ได้ดำเนินการกับดีเอ็นเอของพี 3 เดือนเก่ากุลาดำ(ตัวอย่าง SNP3A; น้ำหนักตัวเฉลี่ยและความยาวทั้งหมด = 12.32 ± 5.13 กรัมและ 11.30 ± 1.58 ซม., N = 162) โปรไฟล์ความร้อนได้ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา3 นาทีตามด้วย predenaturation ที่ 94 ° C เป็นเวลา 45 วินาที, การอบที่55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและการขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที 35 รอบ สุดท้ายขยายได้ดำเนินการที่ 72 ° C เป็นเวลา 7 นาที การขยายผลิตภัณฑ์ได้รับการวิเคราะห์โดย SSCP (Orita et al., 1989) โดยใช้ Protean ครั้งที่สองเซลล์จิน (Bio- ราด) ผลิตภัณฑ์ PCR (6 ไมโครลิตร) wasmixed กับสี่เล่มโหลดย้อม(formamide 95%, 0.25% bromophenol สีฟ้า, cyanol ไซลีน 0.25% และ10 มิลลิ NaOH) เอทิลแอลกอฮอล์ในห้องอาบน้ำเดือดเป็นเวลา 5 นาทีและทันทีที่ระบายความร้อนบนน้ำแข็งเป็นเวลา 3 นาที ผลิตภัณฑ์แปลงสภาพของ PmXbp1185 ถูกวิเคราะห์electrophoretically (พื้นเมือง 20% หน้า; 37.5: 1 crosslink) ที่250 V 16 ชั่วโมงที่ 4 ° C วงดนตรีที่ได้รับการมองเห็น SSCP โดยการย้อมสีเงิน. 2.1.4 บัตรประจำตัวของ SNP ในส่วนของยีน PmXbp1185 ขยายโดยPCR-โคลนและลำดับส่วนยีน PmXbp1185 ของหนุ่มสาวกุ้งกุลาดำที่เป็นตัวแทนของแต่ละรูปแบบSSCP (ยังไม่มี = 9 แต่ละคน) ได้รับการวิเคราะห์และ electrophoretically ชะจากเจล ผลิตภัณฑ์ที่เป็นโคลนเข้าไปใน pGEM-T เวกเตอร์ที่ง่ายและเปลี่ยนเป็นอีโค JM109 Recombinant โคลนได้รับการคัดเลือกโดยระบบ lacZ โปรโตคอลมาตรฐานดังต่อไปนี้(Sambrook และรัสเซล, 2001) ลำดับเบสของแต่ละแทรกได้รับการตรวจสอบทั้งสองทิศทางและค้นหาก่อนหน้านี้กับข้อมูลที่ฝากไว้ในGenBank ใช้กล่าวหา (Altschul, et al, 1990;. สามารถใช้ได้ที่http://ncbi.nlm.nih.gov) ลำดับเบสของ PmXbp1 ของการตรวจสอบกุ้งหลายชิดโดยใช้ClustalW (ธ อมป์สัน et al., 1994). 2.2 การกำหนดบทบาทของ PmXbp1 ในการพัฒนารังไข่2.2.1 สัตว์ทดลองสำหรับการตัดสินใจของการมีส่วนร่วมการทำงานของ PmXbp1 ในการพัฒนารังไข่หนุ่มสาวเลี้ยง(4 เดือน, N = 6) ของพี กุลาดำที่ถูกเก็บรวบรวมจากศูนย์บริหารจัดการพ่อแม่พันธุ์(บีเอ็มซี) มหาวิทยาลัยบูรพา (จันทบุรี) พ่อแม่พันธุ์หญิงถูกจับป่า fromthe ทะเลอันดามัน (ทางตะวันตกของคาบสมุทรประเทศไทย) และปรับตัวภายใต้เงื่อนไขที่ฟาร์ม 2-3 วัน (ยังไม่มี = 40) postspawning groupwas ทันทีหลังจากที่เก็บรวบรวมมาจากกระบอกไม้ไผ่ shrimpwere (เวที V เฉลี่ย GSI = 2.83 ± 0.57% N = 6) รังไข่ถูกชำแหละออกจากกันและชั่งน้ำหนักกุ้ง สำหรับกลุ่มนูก้านตา, กุ้งปรับตัวเป็นเวลา 7 วันก่อนที่จะมีการระเหยก้านตาข้างเดียว. รังไข่ของกุ้งก้านตา-ระเหยที่ถูกเก็บรวบรวมใน 2-7 วันหลังจากที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . ลักษณะสมบัติของยีน pmxbp1 ลำดับ
2.1.1 . ดีเอ็นเอและการสกัดอาร์เอ็นเอทั้งหมด และก่อน

จีโนมสังเคราะห์ cDNA เส้นดีเอ็นเอจากชิ้นส่วนของ pleopod ป่า
กุ้งกุลาดำ ผู้ใหญ่ใช้โปรฟีนอล ( K )
( ดร. et al . , 2001 ) ความเข้มข้นของการสกัดดีเอ็นเอประมาณนี้
. DNA จะถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C
จนใช้อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากรังไข่ของกุ้งกุลาดำโดยใช้ไตร
3 ( ศูนย์วิจัยระดับโมเลกุล ) ความเข้มข้นของการสกัดอาร์เอ็นเอรวม
วัดนี้ . หนึ่งและครึ่งไมโครกรัม
ของตรวจหา ADNase i-treated อาร์เอ็นเอทั้งหมด ( 0.5 U / μกรัมที่อุณหภูมิ 37 องศา C นาน 30 นาที ) และการใช้ improm
ย้อนกลับย้อนกลับ 2 ™ถอดความระบบ
( promega )
2.1.2 . การแยกของ cDNA เต็มตัวของ pmxbp1
เป็น homolog ของ xbp1 แต่เดิมระบุจากห้องสมุด cDNA ของรังไข่
กุ้งกุลาดำ ( preechaphol et al . , 2007 ) วิธีเต็มตัวของ
pmxbp1 ระบุลำดับต่อไปของเดิมโคลน
โดย EST รองพื้นเดินเข้าใกล้ จากลำดับนิวคลีโอไทด์ของ pmxbp1
ถูกค้นกับก่อนหน้านี้ที่ฝากลำดับบริเวณ
และใช้ blastn blastx ( แอลเชิล et al . , 1990 ;ใช้ได้ที่ http : / / ncbi .
nlm . NIH . gov ) และคุณค่าและน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนได้
pmxbp1 ตรวจสอบการใช้ protparam ( http : / / www.expasy .
org / เครื่องมือ / protparam . html ) โดเมนที่ทำหน้าที่ได้
pmxbp1 โปรตีนทำนายโดยใช้สมาร์ท ( http : / / ฉลาด emblheidelberg .
de ) .
ทาง . ความหลากหลายในเส้นเดียว ( ยีน ) การวิเคราะห์ยีนส่วน

pmxbp1การ pmxbp1185 ยีนส่วน ( f : 5 ’ - ’ tgatgaacttcgggacctaa-3
r : 5 ’ - ’ cctcaacgacaactgctgcg-3 ตำแหน่ง c.528 – c.712 ของ
cDNA เต็มตัวของ pmxbp1 ) คือการขยายโคลน และลำดับเบสยีนทำการ
กับดีเอ็นเอของกุ้งกุลาดำ 3-month-old
( snp3a ตัวอย่าง น้ำหนักตัวเฉลี่ยและความยาวรวม = 12.32 ±
5.13 กรัม และ เวลา 11.30 ± 1.58 ซม. , N = 162 ) โปรไฟล์ร้อนเท่ากับ 94 ° C
3 นาที ตามด้วย predenaturation ที่ 94 ° C เป็นเวลา 45 วินาที annealing ที่
55 ° C เป็นเวลา 1 นาทีและส่วนขยายที่ 72 °องศาเซลเซียสนาน 1 นาที 35 รอบ ส่วนขยายสุดท้าย
ถูกดำเนินการที่ 72 ° C เป็นเวลา 7 นาที โดยการเพิ่มผลิตภัณฑ์
โดยใช้ยีน ( ริตา et al . , 1989 ) ใช้ซึ่งเปลี่ยนแปลงได้มาก 2 ซีเซลล์ ( ไบโอ -
ราด ) ผลิตภัณฑ์ PCR ( 6 μ L ) wasmixed กับสี่เล่มของโหลด
ย้อม ( Formamide 95 % 0โบรโมฟีนอล 25% สีฟ้า , 0.25% cyanol ไซลีนและ
10 มม. NaOH ) ใช้ในการต้มนํ้าเป็นเวลา 5 นาทีและทันที
เย็นบนน้ำแข็งนาน 3 นาที ผลิตภัณฑ์ที่ใช้ใน pmxbp1185 ถูก
electrophoretically วิเคราะห์ ( พื้นเมือง 20% หน้า ; 37.5:1 Crosslink )
250 V 16 H ที่อุณหภูมิ 4 องศา ตรวจยีนรัดด้วยเงิน staining
2.1.4 . รหัสของ SNP ในอัตราส่วนโดย
pmxbp1185 ยีนการโคลนยีนและดีเอ็นเอลำดับ
pmxbp1185 ส่วนของกุ้งกุลาดำ และเป็นตัวแทนของแต่ละรูปแบบ SSCP
( n = 9 แต่ละ ) คือ electrophoretically วิเคราะห์
ตัวอย่างจากเจล ส่งผลให้สินค้าถูกโคลนเข้า pgem-t
เวกเตอร์ที่ง่ายและแปลง Escherichia coli ที่มี . โคลนโคลน
ถูกเลือกโดย lacz ระบบดังต่อไปนี้
โปรโตคอลมาตรฐาน ( sambrook และ Russell , 2001 )จากลำดับนิวคลีโอไทด์ของแต่ละแทรก
ถูกตรวจสอบทั้งเส้นทางและค้นหากับก่อนหน้านี้
ฝากข้อมูลบริเวณที่ใช้ blastn ( แอลเชิล et al . , 1990 ; ใช้ได้
http : / / ncbi . nlm . NIH . gov ) ลำดับนิวคลีโอไทด์ของ pmxbp1 ของตรวจสอบ
กุ้งคนโดนชิดใช้ clustalw ( Thompson et al . , 1994 ) .
2.2 . การกำหนดบทบาทของ pmxbp1 ในการพัฒนารังไข่
2.2.1 .สัตว์ทดลอง
สำหรับการหาการมีส่วนร่วมในการทำงานของ pmxbp1
การพัฒนารังไข่ที่เพาะเลี้ยงเยาวชน ( อายุ 4 เดือน , n = 6 )
กุ้งกุลาดำ แม่เก็บมาจากศูนย์การจัดการ
( BMC ) มหาวิทยาลัยบูรพา ( จันทบุรี ) หญิงแม่
เป็นป่าจับจากทะเลอันดามัน ( ทางตะวันตกของคาบสมุทรไทย )
ภายใต้เงื่อนไข และแบบฟาร์ม 2 – 3 วัน ( n = 40 ) การ postspawning
กลุ่มทันทีภายหลังการเก็บ shrimpwere spawned
( ระยะที่ 5 มีค่าเฉลี่ย = 2.83 ± 0.57 % ; n = 6 ) รังไข่ถูกตัด
ออกจากแต่ละกุ้งและชั่งน้ำหนัก สำหรับเพื่อการกลุ่ม
กุ้งเป็น acclimated สำหรับ 7 วัน ก่อนการฝ่ายเดียว
เพื่อ .รังไข่ของกุ้งเพื่อ ablated จำนวน 2 – 7 วันหลังจากที่