The symptomatic Citrus leprosis infected leaves and fruits sam-ples were collected from citrus growing areas of La Concepcion,Boqueron and Potrerillos in the province of Chiriqui, Panama, andthe areas of Edy Alan, Copainala, Villa Flores, Malpaso, and Villa Flo-res from Chiapas state, Mexico, and from the areas of Maya centrevillage from Stann Creek district, Belize, and from the areas of PasoCanoas and Coto Brus from southern Costa Rica. Citrus leprosis samples were shipped under permit to the United States Departmentof Agriculture, Animal and Plant Health Inspection Service, PlantProtection and Quarantine, Center for Plant Health Science andTechnology (USDA-PPQ-CPHST) in Beltsville, Maryland and storedat −80◦C until use. Total RNA was extracted from 100 mg of tissuesequivalent to 5–8 local lesions from characteristic symptomatic cit-rus leprosis samples using the RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia,CA) following the manufacture’s protocol. Total RNA eluted in 50 lof nuclease-free water was stored at −20◦C. Total RNA extractedfrom the healthy citrus tissues was used as negative controls. Thepurity and concentration of total RNA was measured calculating theratio of OD260/280by NanoDropTM1000 spectrophotometer (FisherScientific, Pittsburgh, PA). Total RNA extract from the symptomaticleaf tissues infected with cytoplasmic Citrus leprosis virus C2 (CiLV-C2) from Casanare and Meta state of Colombia, nuclear Citrusleprosis virus (CiLV-N) from Queretaro state of Mexico and Citrustristeza virus (genotypes T30, T36 and T68), Citrus ring spot virus,Citrus tatter leaf virus, Citrus leaf rugose virus from the green houseof Citrus Research and Education Center, Lake Alfred were assayedto determine the specificity of developed primers and probe ofCiLV-C.
อาการส้ม leprosis ใบที่ติดเชื้อและผลไม้ Sam-Ples ถูกรวบรวมมาจากส้มพื้นที่ของ La Concepcion, Boqueron และ Potrerillos การเจริญเติบโตในจังหวัด Chiriqui ปานามาพื้นที่ของ Edy อลัน Copainala วิลล่าฟลอเรส Malpaso และ Villa FLO-Res andthe จากรัฐเชียปัส, เม็กซิโกและจากพื้นที่มายา centrevillage จากอำเภอ Stann Creek, เบลีซและจากพื้นที่ของ PasoCanoas และ Coto Brus จากทางใต้ของคอสตาริกา ส้ม leprosis ตัวอย่างถูกส่งภายใต้ใบอนุญาตไปยังสหรัฐอเมริกากรมเกษตรสัตว์และพืชบริการตรวจสอบสุขภาพ PlantProtection และกักกันศูนย์สุขภาพพืชวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี (USDA-PPQ-CPHST) ในเฟ, แมรี่แลนด์และ storedat -80◦Cจนถึงการใช้งาน . อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจาก 100 มิลลิกรัม tissuesequivalent 5-8 แผลในท้องถิ่นจากลักษณะอาการ CIT มาตุภูมิตัวอย่าง leprosis โดยใช้ชุด RNeasy มินิ (Qiagen, วาเลนเซีย, CA) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลของผู้ผลิต RNA รวมชะใน 50 น้ำ Nuclease ฟรี LOF ถูกเก็บไว้ที่-20◦C RNA รวม extractedfrom เนื้อเยื่อส้มมีสุขภาพดีถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ Thepurity และความเข้มข้นของ RNA รวมวัดการคำนวณ theratio ของ OD260 / 280by NanoDropTM1000 spectrophotometer (FisherScientific, Pittsburgh, PA) สารสกัดจาก RNA รวมจากเนื้อเยื่อ symptomaticleaf ติดเชื้อนิวเคลียสส้ม leprosis ไวรัส C2 (CiLV-C2) จาก Casanare และรัฐ Meta โคลอมเบียไวรัส Citrusleprosis นิวเคลียร์ (CiLV-N) จากรัฐเกเรตาโรเม็กซิโกและ Citrustristeza ไวรัส (จีโนไทป์ T30, T36 และ T68 ) ส้มแหวนไวรัสจุดส้มเศษผ้าไวรัสใบส้มใบย่นไวรัสจาก houseof สีเขียวส้มศูนย์วิจัยและการศึกษา, ทะเลสาบอัลเฟรดเป็น assayedto ตรวจสอบความจำเพาะของไพรเมอร์ที่พัฒนาแล้วและสอบสวน ofCiLV-C
การแปล กรุณารอสักครู่..

อาการที่ใบและผล ส้ม leprosis ples สามรวบรวมจากพื้นที่ปลูกส้มของ la Concepcion , boqueron และ potrerillos ในจังหวัด chiriqui ปานามา และพื้นที่ของดี้ อลัน copainala Villa Flores , malpaso และวิลล่า โฟลเรสจากรัฐเชียปาส เม็กซิโก และ จาก พื้นที่ ของมายา centrevillage จาก stann ครีก ตำบล , เบลีซ และจากพื้นที่และ pasocanoas Coto บรุสจากทางตอนใต้ของคอสตาริกา ตัวอย่าง leprosis ส้มถูกส่งภายใต้ใบอนุญาตในสหรัฐอเมริกากรมเกษตร สัตว์ และบริการตรวจสอบสุขภาพพืชและกักกัน plantprotection ศูนย์วิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีด้านพืช ( usda-ppq-cphst ) ใน Beltsville , Maryland และ storedat − 80 ◦ C จนใช้ อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจาก 100 มิลลิกรัม tissuesequivalent 5 – 8 ท้องถิ่นแผลจากลักษณะอาการซิตรัส leprosis ตัวอย่างโดยใช้ชุดมินิ rneasy ( QIAGEN , Valencia , CA ) ทำตามขั้นตอนของการผลิต อาร์เอ็นเอทั้งหมดใน Lof นิวเคลียสฟรี 50 ตัวอย่างน้ำเก็บไว้ที่ 20 −◦ C ทั้งหมด RNA extractedfrom เนื้อเยื่อส้มสุขภาพถูกใช้เป็นตัวควบคุมลบ เอชและความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอทั้งหมดทำการคำนวณปริมาณ od260 / 280by nanodroptm1000 Spectrophotometer ( fisherscientific , พิตส์เบิร์ก , PA ) สกัดอาร์เอ็นเอรวมจาก symptomaticleaf เนื้อเยื่อที่ติดเชื้อไวรัสนี้ส้ม leprosis C2 ( cilv-c2 ) จาก Boyac และ meta รัฐโคลัมเบีย นิวเคลียร์ citrusleprosis ไวรัส ( cilv-n ) จาก Queretaro เม็กซิโก และ citrustristeza ไวรัส ( พันธุ์ T30 t36 T68 , และส้ม ) , ไวรัสใบจุดวงแหวน ส้มผ้าขี้ริ้วไวรัสใบส้ม ใบย่นไวรัสจาก สีเขียวส้มประธานรัฐสภาการวิจัยและการศึกษาศูนย์ Lake Alfred เป็น assayedto ตรวจสอบความจำเพาะและพัฒนาดีเอ็นเอโพรบ ofcilv-c.
การแปล กรุณารอสักครู่..
