Method performance and validation p

Method performance and validation parameters
Method performance and validation parameters, such as
linearity, detection limit (DL), quantification limit (QL), recovery,
precision and matrix effects, were evaluated. Due to the absence
of a ROQC internal standard, a calibration method using external
matrix-matched standards was applied for reliable analyte
quantifications. In contrast to the method described by
Kokkonen et al. (2005), aliquots of blank matrix were first
treated following the sample preparation procedure described
above to obtain dried blank extracts. Each blank extract was then
spiked with an adequate volume of the stock solutions of each
mycotoxin to reach concentrations ranging from 25 to 1500 mg/
kg for ROQC and MPA and from 250 to 2500 ng/kg for AFM1. Six
and 4 spiking extract levels were analyzed in triplicate for ROQC
and MPA, and AFM1, respectively. Calibration curves were obtained
by plotting the peak area against mycotoxin concentrations
using a 1/x2 weighted linear regression model. The mean
retention time and the mean ratio of the qualifier ion (Q2) signals
to the quantifier ion (Q1) signals of each mycotoxin (ion
ratio) were determined to ensure an accurate identification of
the analyte in accordance with EC (2002) (Table S.2). The DL of
each mycotoxin was calculated, according to ICH guidelines, as
3.3 times the standard deviation of y-intercepts of regression
lines divided by the slope while each QL corresponded to 10
times the standard deviation of y-intercepts of regression lines
divided by the slope (ICH, 2005). Each mycotoxin QL was validated
by analysis of blank extracts spiked at their respective
calculated QL level (ICH, 2005).
Recovery percentage evaluation was performed in triplicate
using matrices spiked with a mix of ROQC, MPA and AFM1
(25e1500 mg/kg for ROQC and MPA, and 250e2500 ng/kg for
AFM1). For each mycotoxin, the method matrix effect was estimated
by comparing the matrix matched-calibration curves to
those obtained after injection in triplicate of the neat standard
mixtures in methanol/water 50/50 (v/v) at the concentrations used
to spike the blank extracts (Fig. S.1). Comparisons between matrixmatched
calibration slopes and slopes obtained from neat calibration
curves (Fig. S.1) highlighted signal suppressions or enhancements,
which revealed the occurrence of a matrix effect for each
analyte.
Method precision, expressed by the relative standard deviation
given as a percentage (% RSD), was estimated after analysis of
spiked blank matrix samples. Two sets of five replicates were
analyzed on two different days in order to obtain repeatability (%
RSDr, intra-day precision) and intermediate precision (% RSDR,
inter-day precision). Calibration curve calculations and statistical
analyses were carried out using the SPSS statistical software
version 20 (SPSS, Chicago, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการเพิ่มประสิทธิภาพและตรวจสอบพารามิเตอร์วิธีการเพิ่มประสิทธิภาพและตรวจสอบพารามิเตอร์ เช่นแบบดอกไม้ ตรวจสอบจำกัด (DL), วงเงินนับ (QL) กู้ คืนมีประเมินผลความแม่นยำและเมทริกซ์ เนื่องจากการขาดงานของ ROQC ภายในมาตรฐาน วิธีการปรับเทียบที่ใช้ภายนอกใช้มาตรฐานตรงกับเมตริกซ์สำหรับ analyte ที่เชื่อถือได้quantifications ตรงข้ามวิธีการอธิบายKokkonen et al. (2005), aliquots เมทริกซ์ว่างถูกแรกถือว่าขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างอธิบายข้างต้นได้รับแห้งสารสกัดจากว่างเปล่า สารสกัดแต่ละเปล่าถูกแล้วspiked ด้วยปริมาณเพียงพอในโซลูชั่นหุ้นของแต่ละพิษจากเชื้อราถึงความเข้มข้นตั้งแต่ 25 ถึง 1500 มิลลิกรัม /กก. ROQC แรง และ จาก 250 ไป 2500 ng/kg สำหรับ AFM1 หกและ 4 spiking สารสกัดระดับถูกวิเคราะห์ใน triplicate สำหรับ ROQCและแรง และ AFM1 ตามลำดับ ได้รับการเทียบเส้นโค้งโดยพล็อตตั้งสูงสุดกับความเข้มข้นของพิษจากเชื้อราโดยใช้แบบจำลองการถดถอยเชิงเส้นถ่วงน้ำหนัก 1/x 2 ค่าเฉลี่ยรักษาเวลาและอัตราส่วนเฉลี่ยของสัญญาณตัวบ่งคุณลักษณะไอออน (Q2)กับสัญญาณของแต่ละพิษจากเชื้อรา (ไอออนไอออน (Q1) quantifierอัตราส่วน) ได้กำหนดให้รหัสถูกต้องanalyte ตาม EC (2002) (ตาราง S.2) DL ของพิษจากเชื้อราแต่ละคำนวณ ตามแนวทาง ICH เป็น3.3 ครั้งส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ y-intercepts ของถดถอยหาร ด้วยความชันในขณะที่ corresponded QL ละ 10 บรรทัดครั้งส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ y-intercepts ของเส้นถดถอยหาร ด้วยความชัน (ICH, 2005) มีการตรวจสอบแต่ละพิษจากเชื้อรา QLโดยวิเคราะห์สารสกัดจากว่าง spiked ที่ตนเกี่ยวข้องคำนวณ QL ระดับ (ICH, 2005)ทำการประเมินเปอร์เซ็นต์การกู้คืนใน triplicateใช้เมทริกซ์ spiked ด้วยผสมของ ROQC แรง และ AFM1(25e1500 mg/kg สำหรับ ROQC และแรง และ 250e2500 ng/กก. สำหรับAFM1) สำหรับแต่ละพิษจากเชื้อรา วิธีเมตริกซ์ผลประเมินโดยการเปรียบเทียบเส้นโค้งเทียบตรงกับเมตริกซ์การผู้ที่ได้รับหลังจากการฉีดใน triplicate มาตรฐานเรียบร้อยส่วนผสมในแบบเมทานอล/น้ำ (v/v) ที่ความเข้มข้นที่ใช้เพื่อขัดขวางบางส่วนว่าง (ฟิก S.1) เปรียบเทียบระหว่าง matrixmatchedเทียบลาดและลาดที่ได้รับจากการปรับแต่งเรียบร้อยเส้นโค้ง (ฟิก S.1) เน้นสัญญาณ suppressions หรือการปรับปรุงซึ่งการเปิดเผยเกิดผลเมตริกซ์สำหรับแต่ละanalyteความแม่นยำของวิธีการ แสดง โดยค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์กำหนดเป็นเปอร์เซ็นต์ (% RSD), มีประเมินหลังจากวิเคราะห์spiked เมทริกซ์ว่างตัวอย่าง สองชุดเหมือนกับห้าได้วิเคราะห์เพื่อให้ได้ (%ทำซ้ำในเวลาแตกต่างกันRSDr อินทราวันความแม่นยำ) และความแม่นยำในระดับปานกลาง (ร้อยละ RSDRระหว่างวันความแม่นยำ) คำนวณเทียบเส้นโค้ง และสถิติวิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยใช้โปรแกรมซอฟต์แวร์ทางสถิติรุ่น 20 (โปรแกรม ชิคาโก สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีตรวจสอบพารามิเตอร์ประสิทธิภาพและวิธีการปฏิบัติและการตรวจสอบค่า

เช่นเส้นตรง , ยักท่า ( DL ) , ปริมาณจำกัด ( เข้าร่วม ) , การกู้คืน ,
ความแม่นยำและเมทริกซ์ผลทดลองพบว่า เนื่องจากขาด
ของ roqc ภายในมาตรฐานการสอบเทียบโดยใช้เมทริกซ์ภายนอก
ตรงกับมาตรฐานใช้ quantifications ครู
ที่เชื่อถือได้ในทางตรงกันข้ามกับวิธีอธิบายด้วย
kokkonen et al . ( 2005 ) , เฉยๆของเมทริกซ์ว่างก่อน
รักษาตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้น การเตรียมตัวเพื่อให้ได้สารสกัดว่าง
แห้ง แยกเป็นแต่ละว่างแล้ว
C มีปริมาณหุ้นโซลูชั่นของแต่ละ
สารพิษจากเชื้อราถึงความเข้มข้นตั้งแต่ 25 ถึง 1500 มิลลิกรัม /
กิโลกรัม สำหรับ roqc และ MPA และจาก 250 ถึง 2 , 500 นาโนกรัม / กิโลกรัม สำหรับ afm1 . 6
4 สารสกัดแอลกอฮอล์ระดับ วิเคราะห์ข้อมูลทั้งสามใบสำหรับ roqc
และ MPA และ afm1 ตามลำดับ เส้นโค้งสอบเทียบได้
โดยวางแผนยอดพื้นที่กับปริมาณสารพิษจากเชื้อรา
ใช้ 1 / X2 แบบการถดถอยเชิงเส้นแบบ ค่าเฉลี่ย
retention time และหมายถึงอัตราส่วนของรอบคัดเลือก ไอออน ( 2 ) สัญญาณ
กับตัวบ่งปริมาณไอออน ( 1 ) สัญญาณของแต่ละสารพิษจากเชื้อรา ( อัตราส่วนไอออน
) ได้รับการพิจารณาเพื่อให้แน่ใจว่าบัตรที่ถูกต้องของ
ครูตาม EC ( 2002 ) ( ตารางที่ s.2 ) DL ของสารพิษจากเชื้อรา
แต่ละคำนวณตาม ICH แนวทางตามที่
3.3 เท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ y-intercepts ถดถอย
เส้นแบ่งตามความลาดชัน ในขณะที่แต่ละสอดคล้องกับ 10
เข้าร่วมเท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ y-intercepts ของเส้นถดถอย
แบ่งตามความชัน ( ICH , 2005 ) สารพิษจากเชื้อราแต่ละเข้าร่วมทำนายโดยวิเคราะห์สารสกัดว่าง

จากที่ตนได้เข้าร่วมระดับ ( ICH , 2005 ) . การประเมินค่า

คืนแสดงทั้งสามใบใช้เมทริกซ์ C ผสม roqc MPA และ afm1
( 25e1500 มิลลิกรัม / กิโลกรัม สำหรับ roqc และ MPA และ 250e2500 ng /
฿ afm1 )สำหรับแต่ละสารพิษจากเชื้อรา , วิธีเมทริกซ์ผลประมาณ
โดยการเปรียบเทียบเมทริกซ์ตรงกับเส้นโค้งสอบเทียบ

ที่ได้หลังจากฉีดทั้งสามใบของส่วนผสมมาตรฐาน
เรียบร้อยในเมทานอลต่อน้ำ 50 / 50 ( v / v ) ความเข้มข้นที่ใช้
spike สารสกัดว่าง ( รูปที่ s.1 ) การเปรียบเทียบระหว่าง matrixmatched
สอบเทียบและสอบเทียบได้จากเส้นโค้งลาดลาด
เรียบร้อย ( รูป S1 ) เน้นการระงับสัญญาณ หรือการปรับปรุง
ซึ่งพบการเกิดของเมทริกซ์ผลสำหรับแต่ละครู
.
วิธีแม่นยำ แสดง โดยญาติส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน
ระบุเป็นเปอร์เซ็นต์ ( % RSD ) ซึ่งหลังจากการวิเคราะห์
ตะปูเมทริกซ์ตัวอย่างที่ว่างเปล่า สองชุดของห้าแบบคือ
วิเคราะห์สองวันที่แตกต่างกันเพื่อให้ได้รับการ rsdr ( %
,ความเที่ยงตรงภายในวัน ) และความแม่นยำระดับกลาง ( ร้อยละ rsdr
ระหว่างวัน , ความแม่นยำ ) รูปโค้งการคำนวณและการวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้โปรแกรมสำเร็จรูป SPSS
มีสถิติซอฟต์แวร์
รุ่น 20 ( SPSS , ชิคาโก สหรัฐอเมริกา )