The production of NO was assayed us

The production of NO was assayed using the DAF-2DA detection
system, as previously described [13]. Briefly, 10 lM 4,5-diaminofluo-
rescein diacetate (DAF-2DA; Alexis-Corp., San Diego, CA, USA)
was added to the cells cultured in serum free medium and incubated
at 37 C for 10 min. After washings with PBS plus 1.2 mM CaCl2,
the cells were fixed with 3% w/v paraformaldehyde plus 4% w/v su-
crose, and cellular fluorescence was imaged using confocal laser scan-
ning microscope (Axioplan 2, LSM 510, Carl Zeiss, Go ¨ ttingen,
Germany) equipped with argon (488 nm) excitation beams. The laserintensity, the shutter aperture, and the exposure/integration settings
were kept constant to allow quantitative comparisons of relative fluo-
rescence intensity of cells between treated groups. Images were digitally
acquired and processed for fluorescence determination at the single-cell
level, using the public domain NIH Image 1.61 program (developed at
the U.S. National Institutes of Health and available on Internet at
http://rsb.info.nih.gov/nih-image/).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การผลิตไม่ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้การตรวจสอบ DAF-2DA
ระบบตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [13] Brie ชั้นปี 10 LM 4,5-diamino ชั้น uo-
rescein diacetate (DAF-2DA. อเล็กซิสคอร์ป, San Diego, CA, USA)
ถูกบันทึกอยู่ในเซลล์เพาะเลี้ยงในซีรั่มขนาดกลางฟรีและบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที? หลังจากซักกับพีบีเอสบวก 1.2 มิลลิ CaCl2,
เซลล์ถูกไฟคงที่ 3% w / v paraformaldehyde บวก 4% w / v ซู
crose และ uorescence ชั้นของเซลล์ที่ถูกถ่ายภาพโดยใช้เลเซอร์สแกน confocal
กล้องจุลทรรศน์หนิง (Axioplan 2 LSM 510 คาร์ล Zeiss ไป¨ ttingen,
เยอรมนี) พร้อมกับอาร์กอน (488 นาโนเมตร) คานกระตุ้น laserintensity รูรับแสงชัตเตอร์และการสัมผัส / การตั้งค่าการรวม
ถูกเก็บไว้อย่างต่อเนื่องเพื่อช่วยให้การเปรียบเทียบเชิงปริมาณของชั้นญาติ uo-
เข้ม rescence ของเซลล์ระหว่างกลุ่มที่ได้รับการรักษา ภาพที่ถูกดิจิทัล
ที่ได้มาและการประมวลผลสำหรับการกำหนด uorescence ชั้นที่เซลล์เดียว
ระดับโดยใช้โดเมนสาธารณะ NIH ภาพที่ 1.61 โปรแกรม (พัฒนาที่
สหรัฐสถาบันสุขภาพแห่งชาติและมีอยู่บนอินเทอร์เน็ตที่
http://rsb.info.nih.gov/ NIH ภาพ /)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การผลิตไม่มีซีรั่มโดยใช้ระบบตรวจจับ
daf-2da , ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 13 ] บรี fl Y 10 LM 4,5-diamino fl UO -
rescein ได ซิเตท ( daf-2da ; alexis-corp. , San Diego , CA , USA )
ถูกเพิ่มไปยังเซลล์ที่เพาะเลี้ยงในซีรั่มฟรีกลางและบ่มที่ 37 
C 10 นาทีหลังจาก washings กับ PBS บวก CaCl2 1.2 มม.
cells จึง xed กับ 3 เปอร์เซ็นต์ w / v พาราฟอร์มาลดิไฮด์ พลัส 4 % W / V -
crose ซู ,และเซลล์อื่นๆด้วยfl uorescence คือใช้เลเซอร์สแกน -
หนิงกล้องจุลทรรศน์ ( 2 axioplan LSM 510 , Carl Zeiss , ไปตั้ง ttingen
, เยอรมนี พร้อมด้วยอาร์กอน ( nm 488 ) คานกระตุ้น . การ laserintensity ชัตเตอร์ รูรับแสง และการบูรณาการการตั้งค่า /
ถูกเก็บไว้คงที่เพื่อให้การเปรียบเทียบเชิงปริมาณ ของญาติfl UO -
rescence ความเข้มของเซลล์ระหว่างกลุ่ม .ภาพดิจิตอล
ได้มาและแปรรูปเพื่อfl uorescence การตัดสินใจในระดับเซลล์เดียว
โดยใช้โดเมนสาธารณะภาพโปรแกรม ( รวม 1.61 พัฒนา
สหรัฐสถาบันสุขภาพแห่งชาติและสามารถใช้ได้บนอินเทอร์เน็ตที่
http : / / rsb ข้อมูล . NIH . gov / รวมรูปภาพ / )