4. DiscussionHaving identified two

4. Discussion
Having identified two peptides SR11 and IR15 from typtic digest (10kDAGP) of Abrus agglutinin, it was expected that these peptides would show one or more properties that were associated with 10kDAGP. When checked for cytotoxicity by MTT and hemolytic assay, both the peptides were found to be non-toxic at higher concentrations (up to 50 μg/ml). IR15 showed toxicity at higher concentrations (IC50 = 100 μg/ml or 60 μM) while SR11 was non-toxic even at higher doses (IC50 > 100 μM). Moreover, none of the peptides had IC50 value lower than that of 10kDAGP. In our previous reports [20], it was shown that component peptides of 10kDAGP entered into the cells and co-localized with the mitochondria. Thus, it was hypothesized that these two peptides might possess CPP-like properties, facilitating the internalization of other cytotoxic peptide components of 10kDAGP. In line with this hypothesis, it was found that FITC labeled IR15 and SR11 peptides readily entered into the cells. Trypsinization before analysis by flow cytometry removes non-specific electrostatic interaction between highly cationic peptides with negatively charged membrane [35] and [36]. Hence, the uptake of peptides was not non-specific or just an artifact of electrostatic interaction. However, unlike 10kDAGP (which partly localized to the mitochondria), localization of FITC labeled peptides was partly (40%) in nucleus. As the localization experiments were performed on live cells, nuclear co-localization was due to peptide and not due to fixation artifacts [35]. Nuclear localization may be another reason behind the non-toxic nature of SR11 and IR15 in comparison to 10kDAGP which acts through mitochondria. According to the earlier reports, CPPs like TAT, antennapedia, polyarginine and transportan also do not show toxicity (IC50 > 100 μM) when treated in free form. However, except antennapedia, other CPPs showed higher toxicity when the CPPs were conjugated with small peptide sequence or Rhodamine dye [37]. Hence, further studies regarding the conjugation of small or bulky group to IR15 and SR11 peptide are necessary to evaluate their toxicity and eligibility for their clinical applications.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4. สนทนามีระบุเปปไทด์สอง SR11 และ IR15 จากแยกย่อย typtic (10kDAGP) ของ Abrus agglutinin หวังว่า เปปไทด์เหล่านี้จะแสดงคุณสมบัติอย่าง น้อยหนึ่งรายการที่สัมพันธ์กับ 10kDAGP เมื่อตรวจสอบพิษโดย MTT hemolytic assay เปปไทด์ทั้งสองพบว่าพิษที่ความเข้มข้นสูง (50 μมิลลิลิตร) IR15 แสดงให้เห็นว่าความเป็นพิษที่ความเข้มข้นสูง (IC50 = 100 μ/ml หรือ 60 ไมครอน) ในขณะที่ SR11 พิษ แม้แต่ที่สูงกว่าปริมาณ (IC50 > 100 ไมครอน) นอกจากนี้ ไม่มีเปปไทด์มีค่า IC50 ต่ำกว่าของ 10kDAGP ในรายงานของเราก่อนหน้านี้ [20], มันแสดงให้เห็นว่า เปปไทด์ส่วนประกอบของ 10kDAGP ป้อนลงในเซลล์ และแปลร่วมกับ mitochondria ดังนั้น มันถูกตั้งสมมติฐานว่าเปปไทด์เหล่านี้สองอาจมีคุณสมบัติเหมือน CPP อำนวยความสะดวก internalization องค์ประกอบอื่น ๆ เปปไทด์พิษของ 10kDAGP สอดคล้องกับสมมติฐานนี้ พบว่า FITC ป้ายเปปไทด์ IR15 และ SR11 พร้อมป้อนลงในเซลล์ Trypsinization ก่อนวิเคราะห์ตามกระแสตรวจวิเคราะห์เซลล์เอาไม่ใช่เฉพาะไฟฟ้าสถิตโต้ตอบระหว่าง cationic สูงเปปไทด์ด้วยประจุลบเมมเบรน [35] และ [36] ด้วยเหตุนี้ การดูดซึมของเปปไทด์ไม่ได้เจาะจงหรือเพียงการเกิดไฟฟ้าสถิตการโต้ตอบ อย่างไรก็ตาม ซึ่งแตกต่างจาก 10kDAGP (ซึ่งบางส่วนแปลให้ mitochondria), แปลของ FITC ป้ายเปปไทด์ถูกบางส่วน (40%) ในนิวเคลียส เป็นการทดลองแปลได้ดำเนินการในเซลล์สด นิวเคลียร์ร่วมแปลแก้ไขเนื่อง จากเปปไทด์ และไม่เนื่อง จากเพ่งสิ่งประดิษฐ์ [35] แปลนิวเคลียร์อาจเป็นอีกเหตุผลที่อยู่เบื้องหลังธรรมชาติปลอดสารพิษของ SR11 และ IR15 เมื่อเทียบกับ 10kDAGP ซึ่งทำหน้าที่ผ่าน mitochondria ตามรายงานก่อนหน้านี้ CPPs เช่นททท. antennapedia, polyarginine และ transportan ยังไม่ต้องแสดงความเป็นพิษ (IC50 > 100 ไมครอน) เมื่อได้รับการรักษาในแบบฟอร์มฟรี อย่างไรก็ตาม ยกเว้น antennapedia, CPPs อื่น ๆ พบความเป็นพิษสูงเมื่อ CPPs ถูกผันกับเปปไทด์ขนาดเล็กลำดับหรือสี Rhodamine [37] ด้วยเหตุนี้ ศึกษาต่อเกี่ยวกับการผันของกลุ่ม IR15 และ SR11 เปปไทด์ขนาดเล็ก หรือขนาดใหญ่จำเป็นต้องประเมินความเป็นพิษและสิทธิ์สำหรับโปรแกรมประยุกต์ทางคลินิก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4. การอภิปราย
มีการระบุเปปไทด์สอง SR11 และ IR15 จาก typtic ย่อย (10kDAGP) ของ Abrus agglutinin มันเป็นที่คาดว่าเปปไทด์เหล่านี้จะแสดงให้เห็นคุณสมบัติอย่างใดอย่างหนึ่งหรือมากกว่าที่เกี่ยวข้องกับ 10kDAGP เมื่อตรวจสอบความเป็นพิษโดย MTT และทดสอบ hemolytic ทั้งเปปไทด์ที่ถูกพบว่าเป็นที่ปลอดสารพิษที่ระดับความเข้มข้นสูง (ถึง 50 ไมโครกรัม / มล.) IR15 แสดงให้เห็นความเป็นพิษในระดับความเข้มข้นสูงกว่า (IC50 = 100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรหรือ 60 ไมครอน) ในขณะที่ SR11 เป็นที่ปลอดสารพิษแม้ในปริมาณที่สูงขึ้น (IC50> 100 ไมครอน) นอกจากนี้ไม่มีของเปปไทด์มีค่า IC50 ต่ำกว่าที่ของ 10kDAGP ในรายงานก่อนหน้านี้ [20] มันก็แสดงให้เห็นว่าเปปไทด์เป็นส่วนประกอบของ 10kDAGP ป้อนเข้าสู่เซลล์และร่วมแปลภาษาที่มีที่ mitochondria ดังนั้นจึงได้รับการตั้งสมมติฐานว่าทั้งสองเปปไทด์อาจจะมีคุณสมบัติเหมือน CPP อำนวยความสะดวกใน internalization ของส่วนประกอบอื่น ๆ เปปไทด์เป็นพิษของ 10kDAGP สอดคล้องกับสมมติฐานนี้มันก็พบว่ามีป้ายกำกับ FITC IR15 และ SR11 เปปไทด์ได้อย่างง่ายดายป้อนเข้าสู่เซลล์ Trypsinization ก่อนที่จะวิเคราะห์โดย cytometry ไหลเอาปฏิสัมพันธ์ไฟฟ้าสถิตไม่ใช่เฉพาะระหว่างเปปไทด์ที่มีประจุบวกสูงที่มีประจุลบเมมเบรน [35] และ [36] ดังนั้นการดูดซึมของเปปไทด์ที่ไม่ได้ไม่เฉพาะเจาะจงหรือเพียงแค่สิ่งประดิษฐ์ของการปฏิสัมพันธ์ไฟฟ้าสถิต แต่แตกต่างจาก 10kDAGP (ซึ่งส่วนหนึ่งเป็นภาษาท้องถิ่นที่ mitochondria), การแปลของเปปไทด์ที่มีป้ายกำกับ FITC ส่วนหนึ่ง (40%) ในนิวเคลียส ขณะที่การทดลองการแปลได้ดำเนินการต่อเซลล์สดนิวเคลียร์ร่วมการแปลเป็นเพราะเปปไทด์และไม่ได้เกิดจากการตรึงสิ่งประดิษฐ์ [35] แปลนิวเคลียร์อาจจะเป็นอีกเหตุผลหนึ่งที่อยู่เบื้องหลังธรรมชาติปลอดสารพิษของ SR11 และ IR15 ในการเปรียบเทียบกับ 10kDAGP ซึ่งทำหน้าที่ผ่าน mitochondria ตามรายงานก่อนหน้านี้พร้อมด้วยต้นทุนเช่นการท่องเที่ยวแห่งประเทศไทย, antennapedia, polyarginine และ transportan ยังไม่ได้แสดงความเป็นพิษ (IC50> 100 ไมครอน) เมื่อได้รับการรักษาในรูปแบบฟรี แต่ยกเว้น antennapedia อื่น ๆ พร้อมด้วยต้นทุนที่แสดงให้เห็นความเป็นพิษสูงขึ้นเมื่อพร้อมด้วยต้นทุนที่ถูกผันกับลำดับเปปไทด์ขนาดเล็กหรือโรดามีนสีย้อม [37] ดังนั้นการศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับการเชื่อมต่อกันของกลุ่มขนาดเล็กหรือขนาดใหญ่เพื่อ IR15 และ SR11 เปปไทด์ที่มีความจำเป็นในการประเมินความเป็นพิษและสิทธิ์ของพวกเขาสำหรับการใช้งานทางคลินิกของพวกเขา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . การอภิปรายมีการระบุสองเปปไทด์และ sr11 ir15 จาก typtic ย่อย ( 10kdagp ) มีฟองน้ำ , คาดว่าเป็นเปปไทด์เหล่านี้จะแสดงหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งคุณสมบัติที่เกี่ยวข้องกับ 10kdagp . เมื่อตรวจสอบโดยวิธี MTT และ หลังต่อ ทั้งดู พบว่ามีสารพิษที่ความเข้มข้นสูง ( ถึง 50 μ g / ml ) ir15 แสดงความเป็นพิษที่ความเข้มข้นสูง ( ic50 = 100 μ g / ml หรือ 60 μ M ) ในขณะที่ sr11 คือไม่เป็นพิษแม้ในขนาดที่สูง ( ic50 > 100 μ M ) นอกจากนี้ ไม่มีของเปปไทด์ที่มีค่า ic50 ต่ำกว่าของ 10kdagp . ในรายงานก่อนหน้านี้ [ 20 ] พบว่าส่วนประกอบของเปปไทด์ 10kdagp เข้าสู่เซลล์และ Co ถิ่นด้วย ) . ดังนั้น จึงมีสมมติฐานว่า ทั้งสองอาจจะครอบครองเช่นเปปไทด์ สำหรับคุณสมบัติการ internalization ของอื่น ๆที่เป็นพิษ เปปไทด์ส่วนประกอบของ 10kdagp . สอดคล้องกับสมมติฐานนี้ พบว่า fitc ป้าย ir15 sr11 เปปไทด์และพร้อมเข้าสู่เซลล์ trypsinization ก่อนการวิเคราะห์ด้วยการขจัดไฟฟ้าสถิต ( เฉพาะปฏิสัมพันธ์ระหว่างสูงบวกกับเปปไทด์ซึ่งมีประจุลบเมมเบรน [ 35 ] และ [ 36 ] ดังนั้น การนำเปปไทด์คือไม่เฉพาะหรือสิ่งประดิษฐ์ของปฏิสัมพันธ์ไฟฟ้าสถิต . แต่แตกต่าง 10kdagp ( ซึ่งส่วนหนึ่งถิ่นที่ mitochondria ) จำกัด fitc ป้ายเปปร้อยละ ( 40% ) ในนิวเคลียส เป็นแปลงทดลองในเซลล์มีชีวิตนิวเคลียร์ Co จำกัด เนื่องจาก เปปไทด์ และไม่ได้เกิดจากการตรึงสิ่งประดิษฐ์ [ 35 ] การจำกัดอาวุธนิวเคลียร์อาจเป็นอีกเหตุผลหนึ่งที่อยู่เบื้องหลังธรรมชาติ ปลอดสารพิษ และของ sr11 ir15 เปรียบเทียบกับ 10kdagp ซึ่งกระทำผ่านม . ตามรายงานก่อนหน้านี้ cpps เหมือน antennapedia polyarginine transportan , การท่องเที่ยวแห่งประเทศไทย และยังไม่แสดงความเป็นพิษ ( ic50 > 100 μ m ) เมื่อปฏิบัติในรูปแบบฟรี อย่างไรก็ตาม นอกจาก antennapedia cpps , อื่น ๆสูงกว่าความเป็นพิษเมื่อ cpps เป็น conjugated กับลำดับเปปไทด์ขนาดเล็ก หรือจากการย้อม [ 37 ] ดังนั้น การศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับการรวมกันของขนาดเล็กหรือขนาดใหญ่และกลุ่ม ir15 sr11 เปปไทด์จำเป็นเพื่อประเมินความเป็นพิษและความเหมาะสมสำหรับการใช้งานทางคลินิกของพวกเขา