To determine if there exists a general role for PLA2 enzymes in
endocytic trafficking, various pulse chase experiments were conducted
with multiple ligands and receptors in the presence or absence
of ONO. In control cells incubated continuously with Tf-FITC
in MEM for 45 min at 37 C and then fixed and processed for
immunofluorescence, endocytosed Tf and endogenous LDLRs were
located in overlapping puncta throughout the cytoplasm (Fig. 1A
and B). These puncta correspond to peripheral SEs and the central
ERC [13]. As expected, when cells were pulse-labeled for 45 min
followed by a chase for 40 min, Tf-FITC was recycled to the cell surface
and lost into the media; however, the steady-state distribution
of LDLR remained unchanged (Fig. 1C and D). In contrast, when
cells were pulse-labeled with Tf-FITC in MEM for 45 min followed
by a chase in MEM containing 10 lM ONO for 40 min, both Tf and
LDLR were retained in more peripheral puncta throughout the
cytoplasm (Fig. 1E and F). However, when the chase was done in
1 lMONO, both Tf and LDLR moved to a centrally located compartment
corresponding to the central ERC (Fig. 1G and H). Similar to
previous studies on Tf and TfR trafficking [13], a concentrationdependent
inhibition of LDLR trafficking was also obtained with a
structurally different PLA2 antagonist, the irreversible suicide substrate
BEL (data not shown) [14,15].
เพื่อตรวจสอบว่ามีอยู่บทบาททั่วไปของเอนไซม์ใน pla2
endocytic ค้า ทดลองตามชีพจรต่างๆจำนวน
กับลิแกนด์หลายมากขึ้นในการแสดงตนหรือขาด
ของโอโนะ ในเซลล์คุม บ่มอย่างต่อเนื่องกับ TF fitc
ใน MEM สำหรับ 45 นาทีที่ 37 C แล้วแก้ไขและประมวลผลสำหรับ
D endocytosed , TF และโครงสร้าง ldlrs ถูก
ตั้งอยู่ในที่ทับซ้อนกัน puncta ทั่วไซโทพลาสซึม ( รูปที่ 1A
b ) บริษัท เหล่านี้ puncta สอดคล้องกับอุปกรณ์ต่อพ่วง และราคากลาง
[ 13 ] เป็นไปตามคาด เมื่อเซลล์มีชีพจรติดป้าย 45 นาที
ตามไล่ล่าสำหรับ 40 นาที , TF fitc ถูกใช้แล้วเพื่อเซลล์ผิวและหายไปในสื่อ
; อย่างไรก็ตาม , โดยการกระจายของ ldlr ยังคงไม่เปลี่ยนแปลง ( ภาพ c และ d ) ในทางตรงกันข้ามเมื่อ
เซลล์มีชีพจรป้ายกับ TF fitc ใน MEM สำหรับ 45 นาทีตาม
โดย Chase ใน MEM ที่มี 10 โดย โอโนะ สำหรับ 40 นาที ทั้ง TF และ
ldlr ถูกเก็บไว้ในอุปกรณ์ต่อพ่วงเพิ่มเติม puncta ตลอด
ไซโตพลาสซึม ( ภาพที่ 1e และ F ) อย่างไรก็ตาม เมื่อ เชสได้
1 lmono ทั้ง TF ldlr และย้ายไปตั้งอยู่ช่อง
สอดคล้องกับราคากลาง ( รูปที่ 1 และ h ) คล้ายกับ
การศึกษาใน TF TFR และการค้า [ 13 ] , concentrationdependent
การยับยั้งการค้า ldlr ยังได้รับกับ
แตกต่างกันโครงสร้าง pla2 ปฏิปักษ์ , สนับสนุนการฆ่าตัวตาย (
เบล ( ข้อมูลไม่แสดง ) [ 14,15 ]
การแปล กรุณารอสักครู่..