2.6.3. Quantification of R. solanacearum in tomato stems
The bacterial multiplication in mid-stems of tomato plants was
determined 5 days post inoculation (dpi). Approximately, 3 cm
long, lower parts of the stem were collected from three plants.
Each stem sample was weighed, surface sterilized for 15 s in 70%
ethanol, rinsed and macerated in 2 mL sterile demineralized water.
After 20 min the macerate was filtered through cotton wool and
pelleted by centrifugation (7000g, 10C for 10 min). The pellet
was re-suspended in 1 mL sterile demineralized water and tenfold
serial dilution was prepared. Then, 100 lL of each dilution was plated
with two replicates on triphenyl tetrazolium chloride (TTC)
medium [20 g Bacto peptone, 5 g glucose, 1 g casamino acids,
15 g Bacto agar and 1 L H2O; after autoclaving, 10 mL of filter-sterilized
0.5% (w/v) 2, 3, 5-TTC (SERVA, Germany) solution as an redox
indicator was mixed with sterile medium before pouring into
Petri plates] and incubated for 48 h at 28 C. Typical colonies of
R. solanacearum that appeared large, elevated and fluidal with
red centers were counted to calculate the bacterial population as
colony-forming units per gram of fresh weight (CFU g1).
2.6.3 ปริมาณของอาร์ solanacearum ในมะเขือเทศลำต้น
คูณแบคทีเรียในกลางลำต้นของพืชมะเขือเทศถูก
กำหนด 5 วันฉีดวัคซีนโพสต์ (dpi) ประมาณ 3 ซม.
ยาวส่วนล่างของลำต้นถูกเก็บรวบรวมจากสามพืช.
ตัวอย่างลำต้นแต่ละคนได้ชั่งน้ำหนักพื้นผิวฆ่าเชื้อ 15 ใน 70%
เอทานอลล้างและหมักใน 2 มิลลิลิตรน้ำปราศจากแร่ธาตุหมัน.
หลังจาก 20 นาทีทำให้เปื่อยยุ่ยถูกกรอง ผ่านสำลีและ
เม็ดโดยการหมุนเหวี่ยง (7000g, 10 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที) เม็ด
เป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ใน 1 มิลลิลิตรน้ำปราศจากแร่ธาตุผ่านการฆ่าเชื้อและเป็นสิบเท่า
เจือจางอนุกรมถูกจัดทำขึ้น จากนั้น 100 lL เจือจางของแต่ละคนถูกชุบ
ด้วยสองซ้ำคลอไรด์ Triphenyl tetrazolium (TTC)
กลาง [20 กรัม Bacto เปปโตน, 5 กรัมกลูโคส 1 กรัมกรดซามิโน
15 กรัม Bacto วุ้นและ 1 ลิตร H2O; หลังจากนึ่งฆ่าเชื้อ, 10 มิลลิลิตรกรองฆ่าเชื้อ
0.5% (w / v) 2, 3, 5-TTC (Serva, เยอรมนี) เป็นวิธีการแก้ปัญหาอกซ์
ตัวบ่งชี้ที่ได้รับการผสมกับสื่อที่ผ่านการฆ่าเชื้อก่อนที่จะเทลงใน
จาน Petri] และบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส อาณานิคมทั่วไปของ
อาร์ solanacearum ที่ปรากฏขนาดใหญ่สูงและ fluidal กับ
ศูนย์สีแดงนับการคำนวณประชากรแบคทีเรียเป็น
หน่วยอาณานิคมขึ้นรูปต่อกรัมของน้ำหนักสด (CFU กรัม 1?)
การแปล กรุณารอสักครู่..
