We have isolated a cDNA encoding a

We have isolated a cDNA encoding a calcium-dependent protein kinase (CDPK) in Nicotiana tabacum, which
we designated NtCDPK1. The deduced amino acid sequence of NtCDPK1 suggests that this protein contains
the kinase domain at the amino terminus and the autoregulatory and calmodulin-like domains at the carboxy
terminus. NtCDPK1 is highly homologous to DcCPK1, a CDPK of carrot, showing 76.5% amino acid sequence
identity. NtCDPK1 transcripts are present in roots, stems and flowers, but are almost undetectable in leaves. In
leaves, NtCDPK1 mRNA accumulation is stimulated by phytohormones (ABA, GA and cytokinin), Ca2+, methyl
jasmonate, wounding, fungal elicitors, chitosan, and NaCl. The recombinant full-length NtCDPK1 protein is
catalytically active and highly stimulated by Ca2+. A truncated recombinant NtCDPK1 which lacks the C-terminal
calmodulin-homologous domain also undergoes autophosphorylation, but the kinase activity is not stimulated by
Ca2+. Phosphoamino acid analysis showed that NtCDPK1 phosphorylates serine and threonine residues. Finally,
a 60 kDa protein which matches the expected size of NtCDPK1 was immunodetected in the membrane fraction
by an antiserum reacting with NtCDPK1. Immunoprecipitation and in vitro phosphorylation using the antiserum
also generated a 60 kDa phosphoprotein only in the membrane fraction. These results suggest that NtCDPK1 is
associated with the membrane.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราได้แยกต่างหาก cDNA ที่เข้ารหัสเป็น kinase ขึ้นอยู่กับแคลเซียมโปรตีน (CDPK) ใน Nicotiana tabacum ซึ่งเรากำหนดให้ NtCDPK1 ลำดับกรดอะมิโน deduced ของ NtCDPK1 แนะนำว่า โปรตีนนี้ประกอบด้วยโดเมน kinase ที่นัสอะมิโน และ autoregulatory และโดเมน calmodulin เหมือนที่ carboxyเทอร์มินัส NtCDPK1 เป็น homologous สูงถึง DcCPK1, CDPK ของแครอท แสดง 76.5% กรดอะมิโนลำดับรหัส NtCDPK1 ใบแสดงผลอยู่ในราก ลำต้น และดอกไม้ แต่มีเกือบสามคในใบไม้ ในใบ NtCDPK1 mRNA สะสมจะถูกกระตุ้น โดย phytohormones (ABA, GA และ cytokinin), Ca2 + methyljasmonate, wounding เชื้อรา elicitors ไคโตซาน และ NaCl โปรตีน NtCDPK1 ปราศจาก recombinant เป็นใช้งาน catalytically และสูงขาวกระตุ้น โดย Ca2 + NtCDPK1 recombinant ตัดซึ่งขาด C-เทอร์มินัลโดเมน calmodulin homologous ทนี้ยัง autophosphorylation แต่ไม่มีถูกกระตุ้นกิจกรรม kinase โดยCa2 + วิเคราะห์กรด Phosphoamino แสดงให้เห็นว่า NtCDPK1 phosphorylates ตกแถและทรีโอนีน สุดท้ายโปรตีน kDa 60 ซึ่งตรงกับ NtCDPK1 ขนาดที่คาดไว้ immunodetected ในส่วนเมมเบรนโดย antiserum มีปฏิกิริยา phosphorylation ในและ NtCDPK1 Immunoprecipitation ใช้ antiserum ที่นอกจากนี้ยัง สร้าง phosphoprotein 60 kDa ในเศษเยื่อ ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำ NtCDPK1 ว่าเกี่ยวข้องกับเยื่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราได้แยกยีนเข้ารหัสแคลเซียมโปรตีนไคเนสขึ้นอยู่กับ (CDPK) ใน Nicotiana tabacum
ซึ่งเรากำหนดNtCDPK1 ลำดับกรดอะมิโน deduced ของ NtCDPK1
แสดงให้เห็นว่าโปรตีนนี้มีโดเมนไคเนสที่สถานีอะมิโนและautoregulatory และโดเมน calmodulin เหมือนที่ Carboxy
ปลายทาง NtCDPK1 เป็นอย่างสูงที่คล้ายคลึงกัน DcCPK1, CDPK ของแครอทแสดง 76.5%
ลำดับกรดอะมิโนตัวตน จิตบำบัด NtCDPK1 ที่มีอยู่ในรากลำต้นและดอก แต่เกือบจะตรวจสอบไม่พบในใบ ในใบสะสม NtCDPK1 mRNA จะถูกกระตุ้นโดย phytohormones (ABA, จอร์เจียและไซโตไคนิ) Ca2 + methyl jasmonate, กระทบกระทั่ง elicitors เชื้อราไคโตซานและโซเดียมคลอไรด์ เต็มรูปแบบที่มีความยาว recombinant โปรตีน NtCDPK1 คือการใช้งานและการเร่งปฏิกิริยาการกระตุ้นอย่างสูงจากCa2 + NtCDPK1 recombinant ถูกตัดทอนซึ่งขาด C-ขั้วโดเมนcalmodulin-คล้ายคลึงกันนี้ยังได้รับการ autophosphorylation แต่กิจกรรมไคเนสไม่ได้ถูกกระตุ้นโดยCa2 + Phosphoamino การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่ากรด NtCDPK1 phosphorylates ซีรีนและสารตกค้าง ธ รีโอนี สุดท้ายโปรตีน 60 กิโลดาลตันซึ่งตรงกับขนาดที่คาดว่าจะได้รับการ NtCDPK1 immunodetected ในส่วนเมมเบรนโดยantiserum ปฏิกิริยากับ NtCDPK1 immunoprecipitation และฟอสโฟหลอดทดลองโดยใช้ antiserum ยังสร้าง 60 กิโลดาลตัน phosphoprotein เฉพาะในส่วนเมมเบรน ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า NtCDPK1 จะเกี่ยวข้องกับเมมเบรน