Accurate quantification of bacteria

Accurate quantification of bacterial species in dental plaque is needed for microbiological diagnosis of periodontal diseases.
The present study was designed to assess the sensitivity, specificity and quantitativity of the real-time PCR using the GeneAmpR Sequence Detection System with two fluorescence chemistries.
TaqMan probe with reporter and quencher dye, and SYBR Green dye were used for sources of the fluorescence.
Primers and probes were designed for Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia and total bacteria based on the nucleotide sequences of the respective 16S ribosomal RNA genes.
Since spread of antibiotic resistance genes is one of the crucial problems in periodontal therapy, quantitative detection of tetQ gene, which confers resistance to tetracycline, was included in the examination.

The detection of P. gingivalis, P. intermedia and A. actinomycetemcomitans was linear over a range of 10^107 cells (10^107 copies for tetQ gene), while the quantitative range for total bacteria was 102^107 cells.

Species-specific amplifications were observed for the three periodontal bacteria, and there was no significant difference between the TaqMan and SYBR Green chemistry in their specificity, quantitativity and sensitivity.
The SYBR Green assay, which was simpler than TaqMan assay in its manipulations, was applied to the clinical plaque samples.
The plaque samples were obtained from eight patients (eight periodontal pockets) before and 1 week after the local drug delivery of minocycline.
Although the number of P. gingivalis, P. intermedia and A. actinomycetemcomitans markedly decreased after the antibiotic therapy in most cases, higher copy numbers of the tetQ gene were detectable.
The real-time PCR demonstrated sufficient sensitivity, specificity and quantitativity to be a powerful tool for microbiological examination in periodontal disease, and the quantitative monitoring of antibiotic resistance gene accompanied with the antibiotic therapy should be included in the examination.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นับความถูกต้องของชนิดแบคทีเรียในคราบจุลินทรีย์เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของโรคโรคเหงือก การศึกษาปัจจุบันถูกออกแบบมาเพื่อประเมินความไว specificity และ quantitativity ของ PCR แบบเรียลไทม์ด้วยระบบการตรวจสอบลำดับของ GeneAmpR สอง fluorescence chemistries โพรบ TaqMan โปรแกรมรายงาน quencher ย้อม และย้อม SYBR Green ที่ใช้สำหรับแหล่งที่มาของการ fluorescence ไพรเมอร์และคลิปปากตะเข้ถูกออกแบบสำหรับ Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia และรวมแบคทีเรียตามลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน 16S เกี่ยวข้อง ribosomal อาร์เอ็นเอ เนื่องจากการแพร่กระจายของยีนต้านทานยาปฏิชีวนะเป็นหนึ่งในปัญหาสำคัญในการรักษาโรคเหงือก ตรวจเชิงปริมาณของยีน tetQ ที่ confers ทนต่อเตตราไซคลีน ถูกรวมในการสอบ การตรวจพบของ P. gingivalis, P. intermedia และ A. actinomycetemcomitans มีเส้นช่วง 10 ^ 107 เซลล์ (10 ^ สำเนา 107 สำหรับยีน tetQ), ในขณะช่วงเชิงปริมาณแบคทีเรียรวม 102 ^ 107 เซลล์Species-specific amplifications สุภัคสำหรับแบคทีเรียโรคเหงือกสาม และมีไม่แตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างเคมี TaqMan และ SYBR Green ใน specificity, quantitativity และความไว ใช้ทดสอบ SYBR Green ซึ่งง่ายกว่าการทดสอบ TaqMan ใน manipulations ภาพของ ตัวอย่างหินปูนคลินิก ตัวอย่างหินปูนได้รับมาจากผู้ป่วย (8 โรคเหงือกกระเป๋า) ก่อนและ 1 สัปดาห์หลังจากการส่งมอบยาเสพติดท้องถิ่น minocycline แปด แม้ว่าหมายเลขของ P. gingivalis, P. intermedia และ A. actinomycetemcomitans ลดลงอย่างเด่นชัดหลังจากการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในกรณีส่วนใหญ่ สูงคัดลอกจำนวนยีน tetQ ถูกตรวจ PCR แบบเรียลไทม์แสดงความไวเพียงพอ specificity และ quantitativity เป็น เครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการตรวจทางจุลชีววิทยาในโรคเหงือกโรค และการตรวจสอบเชิงปริมาณของยีนต้านทานยาปฏิชีวนะที่มีการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะควรจะรวมในการสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณที่ถูกต้องของสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียในช่องปากเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของโรคปริทันต์.
การศึกษาครั้งนี้ได้รับการออกแบบมาเพื่อประเมินความไวความจำเพาะและ quantitativity ของ real-time PCR โดยใช้ GeneAmpR ลำดับระบบตรวจจับด้วยสองเคมีเรืองแสง.
สอบสวน TaqMan กับ นักข่าวและสีย้อมดับและ SYBR ย้อมสีเขียวถูกนำมาใช้สำหรับแหล่งที่มาของการเรืองแสง.
ไพรและยานสำรวจได้รับการออกแบบสำหรับ Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Prevotella ขั้นกลางและแบคทีเรียทั้งหมดขึ้นอยู่กับลำดับเบสของ 16S โซมอลตามลำดับยีน RNA.
เนื่องจากการแพร่กระจายของ ยีนต้านทานยาปฏิชีวนะเป็นหนึ่งในปัญหาที่สำคัญในการรักษาปริทันต์, การตรวจสอบเชิงปริมาณของยีน tetQ ซึ่งฟาโรห์ต้านทานต่อ tetracycline ถูกรวมอยู่ในการตรวจสอบ. การตรวจสอบของ gingivalis พีพีสือและ A. actinomycetemcomitans เป็นเชิงเส้นในช่วง 10 ^ 107 เซลล์ (10 ^ 107 สำเนายีน tetQ) ในขณะที่ช่วงปริมาณแบคทีเรียรวม 102 ^ 107 เซลล์. การขยายสายพันธุ์เฉพาะถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับงวดสามแบคทีเรียปริทันต์และไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง TaqMan และ SYBR เคมีสีเขียวในที่เฉพาะเจาะจงของพวกเขาและความไว quantitativity. SYBR ทดสอบสีเขียวซึ่งเป็นง่ายกว่าการทดสอบ TaqMan ในกิจวัตรของมันถูกนำไปใช้กับกลุ่มตัวอย่างคราบจุลินทรีย์คลินิก. ตัวอย่างที่ได้รับโล่ประกาศเกียรติคุณจากแปดผู้ป่วย (แปดกระเป๋าปริทันต์) ก่อนและ 1 สัปดาห์หลังจากที่การส่งมอบยาเสพติดในท้องถิ่นของ minocycline. แม้ว่าจำนวนของ P. gingivalis, P. สือและลดลงอย่างเห็นได้ชัด actinomycetemcomitans หลังจากการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในกรณีส่วนใหญ่ตัวเลขสำเนาที่สูงขึ้นของยีน tetQ มีการตรวจพบ. แบบ real-time PCR แสดงให้เห็นถึง ความไวเพียงพอจำเพาะและ quantitativity จะเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการตรวจสอบทางจุลชีววิทยาในโรคปริทันต์และการตรวจสอบเชิงปริมาณของยีนต้านทานยาปฏิชีวนะพร้อมกับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะที่ควรจะรวมอยู่ในการตรวจสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปริมาณที่ถูกต้องของแบคทีเรียสายพันธุ์ในคราบจุลินทรีย์เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของโรคปริทันต์ .
การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินความไว ความจำเพาะ และ quantitativity ของ PCR แบบเรียลไทม์ โดยใช้ระบบตรวจจับ geneampr ลำดับสองสารเคมี .
taqman ตัวนักข่าวและเครื่องดื่มมีอัลกอฮอล์ย้อมใช้สำหรับย้อมและสีเขียว SYBR แหล่งเรืองแสงด้วย
จากโพรบและได้รับการออกแบบสำหรับหน่วยวัดสแปน actinomycetemcomitans เชื้อพอร์ไฟโรโมนาส , , prevotella intermedia และแบคทีเรียรวมตามลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน 16S ไรโบโซมอล อาร์เอ็นเอที่เกี่ยวข้อง .
เนื่องจากการแพร่กระจายของยีนต้านทานยาปฏิชีวนะเป็นปัญหาหนึ่งที่สำคัญในการรักษาโรคปริทันต์ ,การตรวจหายีนที่เกี่ยวข้อง tetq ปริมาณความต้านทานเตตราไซคลีน ถูกรวมอยู่ในการสอบ

การตรวจหาเชื้อ P . P . intermedia และ A . actinomycetemcomitans เป็นเส้นตรงในช่วง 10
107 เซลล์ ( 10
107 ชุดยีน tetq ) ในขณะที่ช่วงเชิงปริมาณแบคทีเรียทั้งหมด 102

107 เซลล์amplifications เฉพาะชนิดที่พบทั้ง 3 โรคปริทันต์เชื้อแบคทีเรีย และมีความแตกต่างระหว่าง taqman SYBR กรีนเคมีและความจำเพาะของตน quantitativity และความไว
SYBR กรีน assay ซึ่งง่ายกว่า taqman assay ของ manipulations , ใช้หินปูนคลินิกตัวอย่าง
หินปูนกลุ่มตัวอย่าง 8 ราย ( แปดกระเป๋าปริทันต์ ) ก่อน 1 สัปดาห์หลังจากการส่งยาของประเทศอื่น
ถึงแม้ว่าจำนวนหน้าพอร์ , หน้าอินเตอร์มีเดีย และ อ. actinomycetemcomitans ลดลงหลังจากการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในกรณีส่วนใหญ่สูงกว่าตัวเลขที่คัดลอกของ tetq ยีนถูกตรวจพบ PCR แบบเรียลไทม์
แสดงความไวเพียงพอความจำเพาะและ quantitativity เป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการตรวจสอบทางจุลชีววิทยาในโรคปริทันต์ และการตรวจสอบปริมาณของยีนต้านทานยาปฏิชีวนะ พร้อมกับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะที่ควรจะรวมอยู่ในการสอบ