Flow cytometric measurements. Flow

Flow cytometric measurements.
Flow cytometry was used to determine the final cell concentration and average biovolume after growth.
A 10-
l aliquot of SYBR green stain (Molecular Probes, Basel, Switzerland), diluted 100 times in
dimethyl sulfoxide (Fluka Chemie AG, Buchs, Switzerland), was added to 1 ml of a bacterial suspension and incubated for 15 min at room temperature in the dark before analysis.
For outer membrane permeabilization, EDTA (pH 8) was added (5 mM final concentration) to the sample together with the stain (1).
If asample contained more than 10cells ml1, a dilution prior to the staining procedure was done.
All samples were measured on a CyFlow Space flow cytometer (Partec, Mu¨nster, Germany) equipped with a 200-mW solid-state laser emitting a fixed wavelength of 488 nm and equipped with volumetric counting hardware.
The trigger was set on the green fluorescence (520-nm) channel, and signals for total cell counting were collected on the combined 520-nm/630-nm(red fluorescence) dot plot.
For cellular biovolume estimations, additional signals were collected on the combined 520-nm/side scatter (SSC) dot plot.
An experimentally derived correlation factor was then used to determine the cellular
biovolume (15).
The quantification limit of the instrument was below 1,000 cells ml1 with an average standard deviation of less than 5% (14).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กระแส cytometric วัด
ลำดับเซลล์ถูกใช้เพื่อกำหนดความเข้มข้นและค่าเฉลี่ย biovolume เซลล์ของ final หลังจากเจริญเติบโต
เป็นส่วนลงตัว 10 l ของ SYBR เขียวคราบ (Probes โมเลกุล บาเซิล สวิตเซอร์แลนด์), ยกเว้น 100 ครั้งใน
dimethyl sulfoxide (Fluka Chemie AG, Buchs สวิตเซอร์แลนด์), เพิ่ม 1 ml การระงับแบคทีเรีย และ incubated สำหรับ 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องในมืดก่อนที่จะวิเคราะห์
สำหรับเมมเบรนนอก permeabilization, EDTA (pH 8) ถูกเพิ่ม (เข้มข้น final มม. 5) อย่างพร้อมคราบ (1)
ถ้า asample ประกอบด้วยมากกว่า 10cells ml 1 เจือจางก่อนขั้นตอน staining ทำ
ตัวอย่างทั้งหมดมีวัดบนเป็นพื้นที่ CyFlow flow cytometer (Partec, Mu¨nster เยอรมนี) พร้อมเลเซอร์โซลิดสเตต 200 mW เปล่งความ fixed ของ 488 nm และฮาร์ดแวร์ volumetric ตรวจนับ
ทริกเกอร์ถูกตั้งค่าในช่องสีเขียว fluorescence (520-nm) และสัญญาณสำหรับการตรวจนับเซลล์ทั้งหมดถูกรวบรวมในแปลงรวม 520-nm/630-nm(red fluorescence) จุด
สำหรับประมาณ biovolume โทรศัพท์มือถือ สัญญาณเพิ่มเติมถูกเก็บรวบรวมบนพล็อตจุดรวม 520 nm/ด้าน กระจาย (SSC)
เป็นปัจจัยความสัมพันธ์ experimentally ได้รับแล้วถูกใช้เพื่อกำหนดมือถือ
biovolume (15)
Quantification ขีดจำกัดของเครื่องมือด้านล่างเซลล์ 1000 ml 1 ด้วยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานมีค่าเฉลี่ยน้อยกว่า 5% (14)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวัดการไหลของ cytometric
ภูมิคุ้มกันไหลถูกใช้ในการตรวจสอบความเข้มข้นของเซลล์ขั้นสุดท้ายและ biovolume หลังจากการเจริญเติบโตเฉลี่ย
10 - ลิตรหารของ SYBR คราบสีเขียว (วัดระดับโมเลกุล, บาเซิล, วิตเซอร์แลนด์), เจือจาง 100 ครั้งใน
dimethyl sulfoxide (หนูย์แบงก์ Buchs, วิตเซอร์แลนด์), ถูกบันทึกอยู่ใน 1 มิลลิลิตรระงับเชื้อแบคทีเรียและบ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืดก่อนการวิเคราะห์
สำหรับการผ่านเยื่อหุ้มชั้นนอก, EDTA (pH 8) ถูกเพิ่มเข้ามา (5 มิลลิเข้มข้นสุดท้าย) ตัวอย่างกัน ด้วยคราบ (1)
ถ้า asample มีมากกว่า 10cells มล. ? 1 เจือจางก่อนที่จะมีขั้นตอนการย้อมสีที่ทำ
ตัวอย่างทั้งหมดถูกวัด CyFlow อวกาศไหล cytometer (Partec หมู่¨ nster, เยอรมนี) พร้อมกับ 200 -mW เลเซอร์สถานะของแข็งเปล่งแสงความยาวคลื่นคงที่ 488 นาโนเมตรและติดตั้งฮาร์ดแวร์นับปริมาตร
เรียกถูกกำหนดในการเรืองแสงสีเขียวช่อง (520 นาโนเมตร) และสัญญาณมือถือนับรวมที่ถูกเก็บรวม 520 นาโนเมตร / 630 นาโนเมตร (เรืองแสงสีแดง) พล็อตจุด
สำหรับประมาณการ biovolume มือถือสัญญาณเพิ่มเติมที่ถูกรวบรวมไว้ในกระจาย 520-nm/side รวม (SSC) พล็อตจุด
ปัจจัยที่มีความสัมพันธ์ที่ได้มาทดลองใช้แล้วเพื่อตรวจสอบโทรศัพท์มือถือที่
biovolume (15) .
จำกัด ปริมาณของตราสารต่ำกว่า 1,000 เซลล์ มล. ? 1 ด้วยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของค่าเฉลี่ยน้อยกว่า 5% (14)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ลักษณะการไหลผ่านวัด
( การใช้เพื่อตรวจสอบระบบและถ่ายทอดความเข้มข้นของเซลล์ biovolume เฉลี่ยหลังการ
10 -
L ส่วนลงตัวของ SYBR กรีนคราบ ( โมเลกุล ) , Basel , สวิตเซอร์แลนด์ ) , เจือจาง 100 ครั้งใน
เต๊ะ ( fluka CHEMIE AG , buchs , สวิตเซอร์แลนด์ )คือเพิ่ม 1 มิลลิลิตร ระงับเชื้อแบคทีเรียและเชื้อ 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืดก่อนการวิเคราะห์
สำหรับ permeabilization เนื้อเยื่อชั้นนอก , EDTA ( pH 8 ) เพิ่ม ( 5 มม. จึงนาล สมาธิ ) ตัวอย่างกันด้วยคราบ ( 1 )
ถ้าจำนวนมีมากกว่า 10cells ml  1 เจือจางก่อนการย้อมสีวิธีทํา
ตัวอย่างทั้งหมดจะถูกวัดในพื้นที่ cyflow flโอ๊ยใช้โมโน ( พาร์เท็ค มู่ตั้ง nster , เยอรมนี ) พร้อมกับ 200 MW ของเลเซอร์เปล่งจึง xed ความยาวคลื่น nm แล้วพร้อมกับปริมาตรนับฮาร์ดแวร์
เรียกถูกตั้งค่าบน uorescence flสีเขียว ( 520 nm ) ช่อง และสัญญาณทั้งหมดนับเซลล์ครั้งนี้รวม 520 nm / 630 nm ( สีแดงfl uorescence ) พล็อตจุด
สำหรับมือถือ biovolume การส่งสัญญาณเพิ่มเติมครั้งนี้รวม 520 nm / ด้านกระจาย ( SSC ) พล็อตจุด
มีความสัมพันธ์นี้ได้ปัจจัยแล้วใช้เพื่อตรวจสอบโทรศัพท์มือถือ
biovolume ( 15 )
ในขีด จำกัด ของการไฟฟ้าจึงมีด้านล่าง 1000 มิลลิลิตร 1 เซลล์  เฉลี่ยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานไม่เกิน 5% ( 14 )