4. Sensing transmembrane receptors

4. Sensing transmembrane receptors for cancer diagnosis
In this section, we report on the use of gold-coated TFBGs for
selective cellular detection through membrane protein targeting.
The focus is made on the epithelial growth factor receptor (EGFR),
which is a transmembrane receptor from the 4-tyrosine kinase
receptors family. It is an important biomarker and therapeutic
target that it is over-expressed by numerous cancer cells.
The sensor surface selectivity was ensured by bio-functionalization
through a two-step approach. First, the clean waveguide
surface was activated with the Carboxylic acid-SAM formation
reagent (cat. n: C488) obtained from Dojindo (Japan). Then,
monoclonal mouse immunoglobulin G (IgG) raised against the
human epidermoid carcinoma cell line (Santa Cruz Biotechnology
Inc. and American Type Culture Collection (USA)) were immobilized
on the surface through carbodiimide covalent biochemistry using
Dojindo’s amine coupling kit (cat. n: A515-10). This antibody was
diluted in the Dojindo’s reaction buffer to 0.01 mg/mL for efficient
covalent immobilization during 30 min. The manufacturer’s instructions
were followed for each step for both processes.
Two cell lines were used: the first one with overexpressed
human epidermal growth factor receptors (EGFRs)-A431 cell line,
(EGFR positive, EGFR (þ)). The second cell line was EGFR negative
– OCM1 cell line, (EGFR ()). The culture process will not be described
here. It was done at 37 °C in a humidified incubator with
5% CO2 atmosphere. No antibiotic was used and cell cultures were
free of mycoplasma and pathogenic viruses. Cells suspensions
were then prepared for SPR experiments. For this, A431 and OCM1
cells from a confluent monolayer were detached mechanically by a
gentle scraping of cells from the growth surface into ice-cold
phosphate-buffered saline (PBS). Cells were then washed three
times in cold PBS by repeated centrifugation (at 2500 RPM and
4 °C for 3 min). Pellets were then again suspended to a concentration
of 2–5  106 cells/mL. 0.5 mL volumes were use for
experiments. A handheld automated cell counter from Millipore
(Scepter 2.0, PHCC00000) was used to count the cells.
For immunosensing experiments, gold-coated TFBGs were hold
straight between two clamps and were then approached towards
the cells suspensions, using a vertical translation stage. Fig. 5 depicts
a picture taken with a microscope (100  magnification)
positioned above the cells suspension when the fiber section
containing the TFBG comes into contact with the cells. This picture
figures out the actual size of the cells, which is typically 2–3 mm.
With respect to this size, it is particularly important to guarantee a
sufficient penetration depth of the plasmon wave (evanescent
field) at the metal-dielectric interface. As the latter is proportional
to a fraction of the operating wavelength [4], near-infrared TFBGs
appear more competitive than other configurations based on
visible light.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4. ตรวจ transmembrane receptors สำหรับวินิจฉัยโรคมะเร็งในส่วนนี้ เรารายงานการใช้ TFBGs เคลือบทองสำหรับใช้การตรวจสอบโทรศัพท์มือถือผ่านเมมเบรนโปรตีนเป้าหมายทำการโฟกัสบนตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของ epithelial (EGFR),ซึ่งเป็นตัวรับ transmembrane จาก 4 tyrosine kinasereceptors ครอบครัว เป็นไบโอมาร์คเกอร์เป็นสำคัญ และการรักษาเป้าหมายที่มันมากเกินไปจะแสดงที่ โดยเซลล์มะเร็งจำนวนมากวิธีผิวเซ็นเซอร์ถูกมั่นใจ โดยทางชีวภาพ functionalizationโดยใช้วิธีการสองขั้นตอน แรก waveguide สะอาดเรียกใช้กับการก่อตัวของกรด Carboxylic สามผิวรีเอเจนต์ (cat. n: C488) ได้รับจาก Dojindo (ญี่ปุ่น) แล้วโมโนเมาส์ immunoglobulin G (IgG) ขึ้นกับการรายการเซลล์มนุษย์ epidermoid carcinoma (ซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพหา Inc. และอเมริกันประเภทวัฒนธรรมชุด (สหรัฐอเมริกา))บนพื้นผิวโดยใช้ covalent ชีวเคมี carbodiimideAmine ของ Dojindo coupling ชุด (cat. n: A515-10) มีแอนติบอดีนี้ผสมในบัฟเฟอร์ 0.01 mg/mL สำหรับปฏิกิริยาของ Dojindo มีประสิทธิภาพการตรึงโป covalent ระหว่าง 30 นาที คำแนะนำของผู้ผลิตได้ตามแต่ละขั้นตอนกระบวนการทั้งสองใช้เซลล์สองบรรทัด: วันแรกกับ overexpressedมนุษย์ปัจจัยการเจริญเติบโต epidermal receptors (EGFRs) -A431 เซลล์บรรทัด(EGFR บวก EGFR (þ)) บรรทัดสองของเซลล์ถูกลบ EGFR– รายการ OCM1 เซลล์, (EGFR ()) จะไม่สามารถอธิบายกระบวนการวัฒนธรรมที่นี่ อย่างที่ 37 ° C ใน incubator humidified ด้วยบรรยากาศ 5% CO2 ยาปฏิชีวนะไม่ถูกใช้ และถูกวัฒนธรรมเซลล์ฟรี mycoplasma และไวรัส pathogenic เซลล์บริการจากนั้นได้เตรียมไว้สำหรับคอฟฟี่ช็อป/ทดลอง สำหรับนี้ A431 และ OCM1เซลล์จาก confluent monolayer ถูกแยกออกโดยกลไกการอ่อนโยน scraping ของเซลล์จากผิวเจริญเติบโตเป็นฉ่ำbuffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS) เซลล์แล้วถูกล้างสามใน PBS เย็นโดย centrifugation ซ้ำ (ที่ 2500 RPM และ4 ° C ใน 3 นาที) ขี้ถูกหยุดชั่วคราวให้เข้มข้นอีกของ 2 – 5 106 เซลล์/mL ปริมาณ 0.5 mL ถูกใช้สำหรับการทดลอง นับเซลล์อัตโนมัติมือถือจากมาก(คทา 2.0, PHCC00000) ที่ใช้นับจำนวนเซลล์สำหรับการทดลองของ immunosensing, TFBGs เคลือบทองได้ถือตรงระหว่างสอง clamps และถูกทาบทามแล้วต่อเซลล์บริการ ใช้ขั้นแปลแนวตั้ง มีภาพ fig. 5รูปภาพที่ถ่าย ด้วยกล้องจุลทรรศน์ (ขยาย 100)ตำแหน่งเหนือระงับเซลล์เมื่อส่วนไฟเบอร์ประกอบด้วย TFBG มาที่ไปยังฝั่งเซลล์ รูปภาพนี้เลขออกขนาดจริงของเซลล์ ซึ่งโดยปกติคือ 2-3 มม.กับขนาดนี้ มันมีความสำคัญอย่างยิ่งเพื่อรับประกันการเจาะความลึกที่เพียงพอของคลื่น plasmon (evanescentฟิลด์) ในอินเทอร์เฟซ dielectric โลหะ หลังเป็นสัดส่วนให้เป็นเศษส่วนของความยาวคลื่นปฏิบัติ [4], ใกล้อินฟราเรด TFBGsปรากฏแข่งขันมากกว่าค่าอื่น ๆ ตามแสงที่มองเห็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.
ตรวจจับผู้รับรนสำหรับการวินิจฉัยโรคมะเร็งในส่วนนี้เรารายงานเกี่ยวกับการใช้TFBGs
ทองเคลือบสำหรับการตรวจสอบโทรศัพท์มือถือผ่านการคัดเลือกกำหนดเป้าหมายโปรตีนเมมเบรน.
โฟกัสจะทำบนตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตเยื่อบุผิว (EGFR)
ซึ่งเป็นตัวรับรน จากไคเนสซายน์ 4
ครอบครัวผู้รับ มันเป็น biomarker
ที่สำคัญและการรักษาเป้าหมายว่ามันเป็นมากกว่าการแสดงโดยเซลล์มะเร็งจำนวนมาก.
การเลือกพื้นผิวที่ถูกเซ็นเซอร์มั่นใจโดยไบโอ functionalization
ผ่านวิธีการสองขั้นตอน ก่อนที่ท่อนำคลื่นทำความสะอาดพื้นผิวที่ถูกเปิดใช้งานกับกรดคาร์บอกซิ SAM
ก่อสาร (แมว n. C488) ที่ได้รับจาก Dojindo (ญี่ปุ่น)
จากนั้นอิมมูโนเมาส์โมโนโคลนอลจี (IgG) ยกกับ epidermoid เซลล์มะเร็งของมนุษย์ (ซานตาครูซชีวภาพอิงค์และอเมริกันประเภทวัฒนธรรมสะสม(USA)) ถูกตรึงบนพื้นผิวที่ผ่านการชีวเคมีcarbodiimide โควาเลนต์โดยใช้ชุดการมีเพศสัมพันธ์เอDojindo ของ (แมว n. : A515-10) แอนติบอดีนี้ได้รับการปรับลดในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาของ Dojindo 0.01 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรที่มีประสิทธิภาพสำหรับการตรึงโควาเลนต์ในช่วง30 นาที คำแนะนำของผู้ผลิตตามขั้นตอนสำหรับกระบวนการทั้งแต่ละ. สองเซลล์ถูกนำมาใช้: เป็นคนแรกที่มี overexpressed ผิวหนังของมนุษย์รับปัจจัยการเจริญเติบโต (EGFRs) -A431 สายมือถือ(EGFR บวก EGFR (TH)) บรรทัดที่สองเซลล์ EGFR เป็นเชิงลบ- OCM1 เซลล์ (EGFR ()) กระบวนการวัฒนธรรมจะไม่ได้อธิบายไว้ที่นี่ มันได้รับการทำที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในศูนย์บ่มเพาะความชื้นกับบรรยากาศCO2 5% ไม่มียาปฏิชีวนะที่ถูกนำมาใช้และเซลล์เพาะเลี้ยงได้ฟรีของไวรัสที่ทำให้เกิดโรคและ Mycoplasma เซลล์แขวนลอยได้จัดทำแล้วสำหรับการทดลอง SPR สำหรับเรื่องนี้ A431 และ OCM1 เซลล์จาก monolayer ไหลมารวมกันอยู่ห่างกลโดยการขูดอ่อนโยนของเซลล์ผิวจากการเจริญเติบโตเป็นน้ำแข็งเย็นน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์(พีบีเอส) เซลล์ที่ถูกล้างแล้วสามครั้งในพีบีเอสที่หนาวเย็นโดยการหมุนเหวี่ยงซ้ำ (ที่ 2,500 รอบต่อนาทีและ 4 ° C เป็นเวลา 3 นาที) เม็ดจากนั้นก็ถูกระงับอีกครั้งเพื่อความเข้มข้น2-5? 106 เซลล์ / มิลลิลิตร 0.5 มิลลิลิตรเป็นปริมาณการใช้งานสำหรับการทดลอง เซลล์มือถืออัตโนมัตินับจากค(คทา 2.0 PHCC00000) ถูกนำมาใช้ในการนับเซลล์. สำหรับ immunosensing ทดลอง TFBGs ทองเคลือบได้ถือตรงระหว่างสองหนีบและจากนั้นก็เดินเข้ามาต่อเซลล์แขวนลอยที่ใช้ในขั้นตอนการแปลแนวตั้ง รูป 5 แสดงให้เห็นภาพที่ถ่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์(100 ขยาย) ในตำแหน่งดังกล่าวข้างต้นระงับเมื่อเซลล์ส่วนเส้นใยที่มี TFBG มาสัมผัสกับเซลล์ ภาพนี้ตัวเลขออกขนาดที่แท้จริงของเซลล์ซึ่งโดยปกติคือ 2-3 มม. ด้วยความเคารพต่อขนาดนี้ก็เป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่งที่จะรับประกันการเจาะลึกที่เพียงพอของคลื่น plasmon (ที่หายเขต) ที่อินเตอร์เฟซโลหะอิเล็กทริก ขณะที่หลังเป็นสัดส่วนในการส่วนของความยาวคลื่นปฏิบัติการ [4], TFBGs ใกล้อินฟราเรดปรากฏการแข่งขันมากขึ้นกว่ากำหนดค่าอื่นๆ ขึ้นอยู่กับแสงที่มองเห็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . หัวรับการวินิจฉัยโรคมะเร็ง
ในส่วนนี้จากที่เราได้รายงานเกี่ยวกับการใช้ tfbgs เคลือบทองเพื่อการเลือกโทรศัพท์มือถือ
ผ่านเมมเบรนโปรตีนเป้าหมาย .
โฟกัสถูกสร้างบนปัจจัยการเจริญเติบโตบุรีเซพเตอร์ ( egfr )
ซึ่งเป็นตัวรับยาวจาก 4-tyrosine kinase
ครอบครัว receptor มันเป็นสำคัญและการรักษา
ไบโอมาร์คเกอร์เป้าหมายนั้นมันมากกว่าที่แสดงออกโดยเซลล์มะเร็งมากมาย .
เซ็นเซอร์พื้นผิวหัวกะทิมั่นใจโดยไบโอ functionalization
ผ่านวิธีการสองขั้นตอน แรก ผิวท่อนำ
ความใช้งานด้วยการใช้กรดคาร์บอกซิลิกแซม
( แมว N : c488 ) ที่ได้จาก dojindo ( ญี่ปุ่น ) งั้น
โมโนโคลนอลเมาส์อิมมูโนโกลบูลินจี ( IgG ) กับ
ตั้งขึ้นมนุษย์ epidermoid มะเร็งเซลล์ไลน์ ( Santa Cruz เทคโนโลยีชีวภาพ
อิงค์และประเภทคอลเลกชันวัฒนธรรมอเมริกัน ( USA ) ) ที่ถูกตรึงบนพื้นผิวที่ผ่านการ carbodiimide

dojindo ชีวเคมีใช้ของเอมีน coupling Kit ( แมว N : a515-10 ) แอนติบอดีนี้
เจือจางในบัฟเฟอร์ ปฏิกิริยาของ dojindo 0.01 mg / ml การมีประสิทธิภาพในการตรึง
30 นาทีคําแนะนําของผู้ผลิต
ตามแต่ละขั้นตอน ทั้งกระบวนการ .
2 เส้น เซลล์ที่ใช้ : ครั้งแรกกับกับ epidermal growth factor receptor ( มนุษย์
egfrs ) - เซลล์ a431
( egfr , บวก , egfr ( þ ) บรรทัดที่สองเป็นเซลล์ egfr ลบ
- ocm1 เซลล์บรรทัด ( egfr ( ) ) กระบวนการวัฒนธรรมจะไม่สามารถอธิบาย
ที่นี่เลยมันถูกทำใน 37 ° C ใน humidified ฟักไข่ด้วย
5% CO2 ในชั้นบรรยากาศ ไม่ใช้ยาปฏิชีวนะ และเซลล์วัฒนธรรมถูก
ฟรีและ Mycoplasma เชื้อโรคไวรัส เซลล์แขวนลอย
แล้วเตรียมสพการทดลอง นี้ และ a431 ocm1
เซลล์จากชั้นที่กระจู๋กระจี๋คือบ้านเดี่ยวกลไกโดย
อ่อนโยนขูดเซลล์จากพื้นผิวการเจริญเติบโตในเย็น
เกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS ) เซลล์แล้วซัก 3
ครั้งใน PBS เย็นซ้ำ ดังนี้ ( 2500 รอบต่อนาที
4 ° C เป็นเวลา 3 นาที ) แล้วอีกเม็ดระงับเพื่อสมาธิ
2 – 5  106 เซลล์ / มล. ปริมาณ 0.5 มล. ) ใช้สำหรับ
การทดลอง นับเซลล์อัตโนมัติจากมือถือมิลลิ
( คทา 2.0 , phcc00000 ) คือใช้นับเซลล์ immunosensing
สำหรับการทดลองtfbgs เคลือบทองถูกจับ
ตรงระหว่างสองหนีบและจากนั้นก็ต่อ
เซลล์แขวนลอยโดยใช้ขั้นตอนการแปลในแนวตั้ง ภาพที่ 5 แสดงให้เห็น
ภาพที่ถ่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์ ( 100  ขยาย )
วางข้างต้นเซลล์แขวนลอยเมื่อเส้นใยส่วน
ที่มี tfbg เข้ามาในการติดต่อกับเซลล์ รูปนี้
ตัวเลขขนาดจริงของเซลล์ซึ่งปกติคือ 2 มิลลิเมตร และ 3 .
ด้วยความเคารพขนาดนี้ มันเป็นสิ่งสำคัญโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่จะรับประกัน
ความลึกของการสอดใส่ที่เพียงพอของคลื่น PLASMON ( อย่างรวดเร็ว
Field ) ที่โลหะการอินเตอร์เฟซ เป็นหลังมีสัดส่วน
กับเศษส่วนของผ่าตัดความยาวคลื่นใกล้อินฟราเรด [ 4 ] , tfbgs
ปรากฏแข่งขันมากขึ้นกว่ารูปแบบอื่น ๆตาม

มองเห็นแสง