Materials and methods2.1 Experiment

Materials and methods
2.1 Experimental animals
animalsBlood samples (n = 112) were collected from males and females ofyoung and adult Vembur sheep maintained at the farmers’ households inthe breeding tract (between 9◦00and 9◦30N and 77◦90and 78◦25E).Genomic DNA was extracted using standard phenol–chloroform extrac-tion procedure (Sambrook et al., 1989) with slight modifications by usingDNAzol reagent, instead of SDS and proteinase K.
2.2. Primer synthesis and PCR–RFLP reactions
The published primer sequences were used for amplification of GH(Hua et al., 2009) genes.
GH1-F 5-CTCTGCCTGCCCTGGACT-3
GH1-R 5-GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3
Both PCR reactions were performed in a 20 l mixture containing10 pmol forward and reverse primers each, 10 l master mix which con-tained 200 M dNTP (deoxyribonucleotide phosphate), 1.5 mM MgCl2, 1unit of Taq-DNA polymerase (Sigma), and 50 ng genomic DNA as tem-plate. Gradient PCR was used to optimize the reaction accuracy: 95◦C for

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ2.1 สัตว์ทดลองanimalsBlood ตัวอย่าง (n = 112) ได้รวบรวมจากชายและหญิง ofyoung และผู้ใหญ่ Vembur แกะเก็บรักษาในครัวเรือนของเกษตรกรในทางเดินอาหารการผสมพันธุ์ (ระหว่าง 9◦00 และ 9◦30 N และ 77◦90 และ 78◦25 E) Genomic DNA ถูกสกัดโดยใช้มาตรฐานวาง – คลอโรฟอร์ม extrac สเตรชันกระบวน (Sambrook et al., 1989) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ด้วยรีเอเจนต์ usingDNAzol, SDS และ proteinase คุณแทน2.2 การรองพื้นการสังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR-RFLPลำดับประกาศพื้นที่ใช้สำหรับการขยายของ GH (หัว et al., 2009) ยีนGH1-F 5 - CTCTGCCTGCCCTGGACT-3GH1-R 5 - GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3ดำเนินทั้งสองปฏิกิริยา PCR ในการ 20 l ผสม containing10 pmol ไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์ละ 10 l หลักผสม (deoxyribonucleotide ฟอสเฟต) dNTP 200 M ที่คอน tained, 1.5 มม. MgCl2, 1unit ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (ซิกมา), และดีเอ็นเอ genomic ng 50 เป็นยการแผ่น ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความถูกต้องของปฏิกิริยา PCR ไล่ระดับ: 95◦C สำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
2.1 สัตว์ทดลอง
animalsBlood ตัวอย่าง (n = 112) ที่ถูกเก็บรวบรวมจากชายและหญิง ofyoung และผู้ใหญ่ Vembur แกะไว้ที่ครัวเรือนเกษตรกรเบี่ยงทางเดินพันธุ์ (ระหว่าง9◦00? และ9◦30? n และ77◦90? และ78◦25? E) .Genomic ดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้ฟีนอลคลอโรฟอร์มขั้นตอนการสกัด-การมาตรฐาน (Sambrook et al., 1989) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยโดยน้ำยา usingDNAzol แทน SDS และโปรเค
2.2 ไพรเมอร์สังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR-RFLP
ลำดับไพรเมอร์ที่ตีพิมพ์ถูกนำมาใช้สำหรับการขยายของ GH (Hua et al., 2009) ยีน.
GH1-F 5? -CTCTGCCTGCCCTGGACT-3?
GH1-R 5? -GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3
ทั้งสองปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการใน 20 ลิตรผสม containing10 pmol ไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์แต่ละ 10 ลิตรผสมต้นแบบซึ่งนักโทษ tained-200 M dNTP (deoxyribonucleotide ฟอสเฟต) 1.5 มิลลิ MgCl2, 1unit ของโพลิเมอร์ Taq ดีเอ็นเอ (ซิกม่า) และ 50 นาโนกรัม ดีเอ็นเอเป็น TEM จาน PCR ไล่โทนสีถูกนำมาใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความแม่นยำในการเกิดปฏิกิริยา: 95◦Cสำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการทดลองสัตว์

2.1 ตัวอย่าง animalsblood ( n = 112 ) โดยใช้ข้อมูลจากชายและหญิง ofyoung และแกะ vembur ผู้ใหญ่ยังคงที่เกษตรกรครัวเรือนในระบบการผสมพันธุ์ระหว่าง 9 ◦ 00  และ 9 ◦ 30  N และ 77 ◦ 90  และ 78 ◦ 25  ดีเอ็นเอจีโนม e ) โดยใช้มาตรฐานฟีนอล ) คลอโรฟอร์มสกัดกระบวนการ tion ( sambrook et al . ,1989 ) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โดย usingdnazol รีเอเจนต์ แทนที่จะ SDS และโปรตีน K .
2.2 . การสังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR ไพรเมอร์สำหรับรองพื้น :
หัวข้อลำดับที่ใช้เป็นแบบ GH ( หัว et al . , 2009 ) ยีน .
gh1-f 5  - ctctgcctgccctggact-3 
gh1-r 5  - ggagaagcagaaggcaacc-3 
ทั้งเทคนิคปฏิกิริยาได้ใน 20  ผมผสม containing10 pmol ไปข้างหน้าและย้อนกลับจากแต่ละ10  L master ผสม ซึ่งคอน tained 200 M dntp ( deoxyribonucleotide ฟอสเฟต 1.5 มม. ชุด 1unit , ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( Sigma ) และ 50 ของ genomic DNA เป็นเทมเพลท การใช้ปฏิกิริยา PCR เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความแม่นยำ : 95 ◦ C